王文秀
- 作品数：24 被引量：98H指数：6
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 口蹄疫病毒O/China/99株VP1基因植物种子特异性表达载体的构建及农杆菌的导入被引量：6
- 2005年
- 根据植物组成型表达质粒pBin438的限制性酶切位点及FMDVVP1的核苷酸序列设计并合成引物,从种子特异性启动子7S质粒pU82质粒中扩增7S启动子,经HindⅢ和BamHⅠ酶切,与经同样双酶切的植物组成型表达载体pBin438大片段连接,经酶切、PCR鉴定及序列分析,种子特异性表达载体p7SBin438构建完成。从FMDVVP1基因的pGEMVP1质粒中扩增VP1基因,经BamHⅠ和SalⅠ双酶切后,与p7SBin438质粒酶切后的大片段连接,经酶切、PCR及测序鉴定,FMDVVP1基因已置于种子特异性启动子7S下游,成功构建了FMDVVP1基因的种子特异性表达载体p7SBin438VP1。通过三亲交配法,将表达载体p7SBin438VP1导入根癌农杆菌,为研究FMD可饲疫苗奠定了基础。
- 潘丽张永光王永录王宝琴王文秀方玉珍蒋守田王炜孙元谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒根癌农杆菌VP1基因
- FMDV vp1基因在烟草中表达及转基因烟草的免疫效果被引量：1
- 2005年
- 通过三亲杂交法,构建克隆有阿克苏(Akesu/58) O 型口蹄疫病毒vp1 基因的双元表达载体pBin FMDVVP1。采用农杆菌介导法转化NC89烟草叶盘,经卡那霉素筛选,共获得49株抗性植株。对抗性植株总DNA进行目的基因的PCR检测,有40株阳性植株。对阳性植株总RNA进行目的基因的RT PCR检测,有21株阳性植株。将7株ELISA和Western blot检测阳性植株叶片提取物分别与弗氏佐剂乳化,在0、15、30 和45d 腹膜腔接种Balb/C小白鼠,于第4次免疫后第9d进行血清抗体检测;第12d用104SM50 LD的同源强毒进行攻击;攻毒后24h采血,通过乳鼠病毒血症试验判定攻击Balb/C小白鼠的发病和保护情况。结果表明:双元表达载体pBin FMDVVP1构建正确;vp1基因转入NC89烟草并获得表达;7组中有2组Balb/C小白鼠血清抗体呈阳性,攻毒保护率分别为100%和63%。证明2株转基因烟草表达的VP1蛋白具有较好的免疫原性,所免疫的2 组Balb/C小白鼠对同源强毒攻击有一定的抵抗能力。
- 王宝琴张永光王小龙王永录潘丽王文秀董金杰吕建亮
- 关键词：口蹄疫病毒烟草免疫
- 口蹄疫病毒Akesu/O/58株结构蛋白基因的克隆和细胞受体结合位点初探被引量：1
- 2008年
- 将Akesu/O/58口蹄疫病毒分离株牛舌皮毒适应乳鼠,通过RT-PCR法分别获得了该病毒结构蛋白基因vp1和p1。结果表明:vp1和p1基因分别为639 bp和2 208 bp,与Akesu/O/58细胞适应株FMDV的vp1和p1基因核苷酸序列的同源性分别为83.9%和84.7%,氨基酸序列的同源性为89.7%和95.1%。本试验分离株与OHK99、O1K、Tai wan97病毒株的细胞受体结合位点均为RGD(Arg-Gly-Asp),而Akesu/O/58细胞适应株的细胞受体结合位点为SGD(Ser-Gly-Asp)。
- 王宝琴张永光潘丽王文秀吕建亮
- 关键词：口蹄疫病毒结构蛋白基因克隆
- 用小鼠复制仔猪水肿病的模型试验被引量：12
- 2003年
- 以幼鼠和成年鼠为试验动物 ,分别经腹腔注射细菌或外毒素。试验结果表明 ,注射细菌后能够导致成年鼠死亡的最小细菌数为 2×1 0 10 ,成年鼠注射细菌后 1 2～ 96 h死亡 ,剖检死亡鼠可见皮下、淋巴结、肝、脾和肺脏出血 ,十二指肠和胃壁水肿。幼鼠注射细菌后 1 2～ 48h死亡 ,导致幼鼠死亡的最小细菌数为 3× 1 0 9,死亡鼠剖检结果与成年鼠相同 ;注射外毒素后 ,成年鼠出现典型的神经症状 ,最后死亡。致成年鼠死亡的毒素最小剂量为 1 m L,注射外毒素后 1 2～2 8h死亡。剖检死亡鼠可见皮下胶冻样水肿 ,皮下淋巴结出血水肿 ,脏器表面多汁 ,胃肠壁水肿 ,十二指肠和胃底壁尤其严重 ,积聚大量黄色黏稠液体。幼鼠注射外毒素后 4～ 2 8h死亡 ,其神经症状和死亡剖检结果与成年鼠基本相同 ,水肿病变更典型。本研究结果表明 ,细菌外毒素是引起水肿病的关键性因子 。
- 陈德坤王文秀孔庆波雷利辉
- 关键词：小鼠仔猪水肿病神经症状
- 较高母源抗体对雏鸡NDⅣ系苗首次免疫效果的影响被引量：1
- 2003年
- 8日龄雏鸡 70只随机分为 A、B组 ,每组 35只。A组 ,转移因子稀释 ND 系苗。B组 ,生理盐水稀释 ND 系苗。免疫途径为点眼、滴鼻。分别在免疫前 (0 d)和免疫后 2 ,4 ,6 ,8,10 ,12 ,14 d和 16 d采用 β-微量法测各组鸡 ND抗体效价。免疫后 2 6 d用 F48E9毒株攻击各组鸡。试验结果表明 ,各组鸡免疫后的抗体水平均呈下降趋势 ,且 A组鸡与 B组鸡免疫后抗体效价在整个免疫期间差异不显著 (P >0 .0 5 )。攻毒试验结果显示 :A组的死亡率为 4 2 .3% ,B组的死亡率为 5 9.3%。 A组与 B组的保护率呈极显著差异 (P <0 .0 1)。
- 陈德坤雷莉辉郭战军王文秀
- 关键词：母源抗体雏鸡免疫效果影响因素
- 一种合生元组合物、合生元无糖软糖及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种合生元组合物、合生元无糖软糖及其制备方法和应用，属于食品加工技术领域。该合生元组合物由罗伊氏乳杆菌菌液C501和菊粉组成；罗伊氏乳杆菌C501菌液和菊粉的质量比为0.1‑1:1‑3；罗伊氏乳杆菌C501菌...
- 刘志刚王文秀郭瑞王川川原田折泳波王千诩肖晓
- 口蹄疫病毒结构蛋白P1-2A及蛋白酶3C基因的转基因番茄对豚鼠免疫反应的初步研究被引量：12
- 2006年
- 构建了O型口蹄疫病毒China99株结构蛋白P1-2A、非结构蛋白3C以及部分2B基因（P1-2X3C）的植物双元表达载体pBin438／P1-2X3C，通过农杆菌介导法转化番茄子叶，经卡那霉素抗性筛选，获得40余株抗性植株，对得到的抗性植株进行分子生物学检测，65％的再生植株PCR检测阳性；RT-PIER结果证实P1-2X3C基因在转基因番茄中能够有效转录；ELISA和Western blot检测表明转基因植株中表达的目的蛋白具有免疫反应性。转基因番茄叶片蛋白粗提液经肌肉途径免疫豚鼠，于第3次免疫后28d用100ID50／0．2mL的同源强毒攻击，结果表明口蹄疫病毒P1—2X3C基因的转基因番茄表达产物具有良好的免疫原性，豚鼠3免后血清效价可达1：64～1：128，攻毒后两组免疫豚鼠保护率分别达3／5和5／5。
- 潘丽张永光王永录王宝琴王文秀方玉珍蒋守田王炜孙元吕建亮谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒转基因番茄免疫原性
- 亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒VP1基因真核表达载体的构建及其免疫活性的初步分析被引量：1
- 2005年
- 提取亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒总RNA,用特异性引物通过RTPCR反应获得了约750bp的核酸片段,将其与pGEMTEasy载体连接,并转化大肠埃希氏菌JM109。重组质粒经PCR、酶切鉴定及测序,证明所克隆的片段含有完整的VP1基因;将重组质粒与表达载体pcDNA3.1(+)分别用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后连接,构建成重组表达质粒,转化宿主菌DH5α,筛选阳性克隆。测序结果证明,目的基因正确插入到表达载体中,命名为pcDNAV;用同样方法将IL18基因插入pcDNAV中,命名为pcDNAVI。用pcDNAVI免疫豚鼠,2周后加强免疫1次,每周用ELISA检测豚鼠血清中的抗体水平。结果表明,pcDNAVI可引发机体产生体液免疫。
- 董金杰王永录张永光伏小平潘丽方玉珍蒋守田王宝琴王文秀
- 关键词：VP1基因真核表达载体免疫活性体液免疫核酸疫苗
- 口蹄疫病毒O/China/99株多基因植物组成型表达载体的构建及序列分析被引量：6
- 2005年
- 目的构建包含FMDV结构蛋白P1、非结构蛋白2A、3C以及部分2B的基因片段P12X3C的植物组成型表达载体,为FMDV可饲疫苗的研制奠定基础。方法通过PCR扩增法,从pGEM/P12A质粒和pGEM/3C质粒中扩增P12A及部分2B基因(P12X)、3C基因,将获得的P12X与3C片段经BamHI/SpeI和SpeI/SalI双酶切后,与经BamHI/SalI双酶切后的pUC18质粒大片段连接,得到重组质粒pUC18/P12X3C,pUC18/P12X3C质粒经BamHI/SalI双酶切后的大片段与经同样双酶切的植物表达载体pBin438连接,转化子经酶切、PCR及测序鉴定后,获得包含FMDV O/China/99株P12X3C片段的植物组成型表达载体pBin438/P12X3C,最后通过三亲交配法,将表达载体pBin438/P12X3C导入农杆菌。结论成功构建FMDV多基因的植物组成型表达载体。
- 潘丽张永光王永录王宝琴王文秀方玉珍蒋守田张维德董金杰吕建亮谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒基因序列
- TGF-β1诱导SUVEC向平滑肌样细胞转分化的初步研究
- 2007年
- 用不同浓度TGF-1β对猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC)进行诱导,研究体外诱导SUVEC向平滑肌细胞分化的可能性。倒置显微镜下观察诱导前后细胞形态的变化,并采用免疫细胞化学SP法对细胞表面特异性标志物进行染色。结果表明,诱导后细胞失去内皮细胞典型的铺路石样形态,而呈现出肌成纤维样细胞;对诱导后的细胞进行免疫组化检测,发现5～10ng.mL-1 TGF-1β诱导后,平滑肌特异性蛋白-αSMA的相对表达量均显著升高;而浓度升高为20 ng.mL-1时,升高不显著;内皮细胞特异性标志(F-ⅧRAg)的表达均显著下降。该研究表明TGF-1β可诱导猪脐静脉血管内皮细胞向肌样细胞分化,但诱导分化的能力与TGF-1β的浓度有关。
- 王文秀张彦明熊奎州张浩邓文代晨
- 关键词：脐静脉血管内皮细胞转化生长因子Β1转分化平滑肌样细胞
