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副黏病毒Tianjin株重组血凝素-神经氨酸酶单克隆抗体的制备及在临床检测中的初步应用被引量：4: 2008年; 目的:建立双抗体夹心ELISA法,调查副黏病毒Tianjin株引起婴幼儿下呼吸道感染情况。方法:用纯化的重组HN片段免疫BALB/c小鼠,按常规方法制备单克隆抗体。以兔抗Tianjin株多克隆抗体为捕获抗体,单抗G7G7E7为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,检测104例下呼吸道感染患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)标本。结果:获得3株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株G7H4D3、G7D9G3和G7G7E7。3株单克隆抗体与副黏病毒Tianjin株有较高结合活性,与甲、乙型流感病毒,新城疫病毒(NDV),人副流感病毒(hPIV)1型、3型、肺炎支原体均无交叉反应性。ELISA相加试验和阻断试验表明,3株单抗识别相同或相近表位区域,识别的表位在抗病毒免疫应答中处于免疫优势地位。双抗体夹心ELISA法检测阳性率为1.92%(2/104)。结论:与RT-PCR和间接ELISA法比较,双抗体夹心ELISA法,具有敏感性高、特异性强的优点,适于临床检测使用。副黏病毒Tianjin株是婴幼儿下呼吸道感染的重要致病因子之一。; 李霞李晓眠石立莹袁立军王卿王文秀李梅侯凯; 关键词：单克隆血凝素类神经氨酸酶重组蛋白质类

副粘病毒Tianjin株主要蛋白在真核细胞中的表达及其反向遗传学的初步研究: 副粘病毒Tianjin株是仙台病毒的一个新基因型，仙台病毒为啮齿类动物(鼠类)致死性病原体，在鼠群中可引起致死性肺炎，死亡率高。1999年天津医科大学实验动物中心饲养的普通棉耳狨猴群体中爆发急性呼吸道传染病，多种抗生素治...; 王文秀; 关键词：HN蛋白 NP蛋白真核细胞生物活性; 文献传递

副粘病毒Tianjin株NP蛋白的表达及分析被引量：2: 2008年; 目的分析副粘病毒Tianjin株NP蛋白与其他SeV的同源性及种系进化关系,探讨其变异及抗原性。方法克隆NP基因,对其核苷酸和氨基酸序列进行同源性及进化分析。在原核系统中分3段表达NP蛋白。结果经Western blot分析,重组蛋白NP1、NP2和NP3能与副粘病毒Tianjin株抗血清特异反应,具有天然抗原性。Tianjin株与仙台病毒BB1株NP的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为94.5%和96.2%,与其他仙台病毒的同源性,在85.1%～88.7%和92.4%～94.7%之间。Tianjin株NP蛋白共有15个独特的氨基酸变异位点和11个与BB1株共有的变异位点。Tianjin株与BB1株NP核苷酸序列的差异大于同一进化分支内的仙台病毒之间的差异。结论副粘病毒Tian-jin株属于仙台病毒新的进化分支。重组NP蛋白具有抗原性。; 王卿李梅石立莹袁立军王文秀; 关键词：NP基因原核表达

体外诱导大鼠脂肪源间充质干细胞成肌腱潜能的研究被引量：6: 2011年; 目的体外诱导脂肪源间充质干细胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,AT-MSCs)成肌腱细胞,为临床肌腱损伤的修复提供理论基础。方法从SD大鼠腹腔脂肪组织中分离出脂肪源间充质干细胞,经生长分化因子-5(growth differentiation factor 5,GDF-5)诱导,使其向肌腱细胞分化。应用形态观察和RT-PCR等方法,从形态和分子水平上对诱导分化的细胞进行鉴定。结果从SD大鼠腹腔脂肪组织中分离出的AT-MSCs呈散在分布,排列不规则,以星形和多角形细胞为主,能稳定增殖传代。经5、10 ng/mL GDF-5诱导8 d后,大部分细胞呈梭形。RT-PCR结果显示经GDF-5诱导的细胞,Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达明显高于未经诱导的对照组;GDF-5诱导的细胞Bcl-2/Bax均高于对照组。结论从脂肪组织中可以获得具有多向分化能力的AT-MSCs,并能在体外稳定传代。经GDF-5诱导后,AT-MSCs有向肌腱细胞分化的倾向。GDF-5在一定时间内对细胞凋亡有抑制作用,有利于AT-MSCs向肌腱细胞的分化。AT-MSCs有可能替代骨髓间充质干细胞作为组织工程学的种子细胞,用于肌腱损伤的修复。; 侯凯李梅李金茹杨逸昆李纯王文秀黄德清; 关键词：脂肪源间充质干细胞肌腱细胞生长分化因子-5

副黏病毒Tianjin株NP蛋白的稳定表达及其检测: 2009年; 目的:构建副黏病毒Tianjin株NP基因的真核表达载体,转染HEK293细胞,经G418筛选出稳定表达NP蛋白的细胞。方法:应用RT-PCR技术克隆副黏病毒Tianjin株NP基因,插入真核表达载体pcDNA3.1(+)。经PCR、酶切和测序鉴定后,将构建的pcDNA3.1(+)-NP用LipofectamineTM2000转染试剂转染HEK293细胞。应用免疫荧光法及Western Blot检测NP蛋白的瞬时和稳定表达。结果:RT-PCR扩增得到NP基因,重组质粒pcDNA3.1(+)-NP转染HEK293细胞后,经免疫荧光法检测到目的蛋白的瞬时和稳定表达。WesternBlot法可见NP蛋白瞬时和稳定表达的条带。结论:副黏病毒Tianjin株NP基因在HEK293细胞可以瞬时和稳定表达,为研究副黏病毒Tianjin株NP蛋白功能与病毒致病性、宿主亲嗜性奠定了基础。; 王文秀李梅王卿; 关键词：仙台病毒核蛋白类细胞系

副粘病毒Tianjin株NP蛋白的表达及分析被引量：1: 2008年; 1999年，本实验室从群体性暴发的急性呼吸道感染致死的普通棉耳绒猴肺组织中分离到一株副粘病毒，命名为副粘病毒Tianjin株。经研究发现该动物中心的工作人员都有此病毒抗体，且正常人群（献血员）抗体阳性率高达46％，急性呼吸道感染的患儿抗体阳性率为19．28％，提示此病原体与人类可能有密切的关系。经血清学、形态学及基因测序研究，表明副粘病毒Tianjin株与仙台病毒（Sendai virus，SeV）同源性较高，; 王卿李梅石立莹袁立军王文秀; 关键词：NP基因

新分离的副粘病毒Tianjin株的全基因组序列分析被引量：8: 2008年; 副粘病毒Tianjin株是一株对普通棉耳狨猴具有高致病性,并可能与人类下呼吸道感染密切相关的毒株。为了明确其基因结构、变异特点及种系进化地位,采用RT-PCR、测序和拼接,获得了副粘病毒Tianjin株全基因组序列,与GenBank登录的副粘病毒科7个属和尚未分类的28株病毒及7株仙台病毒代表株,进行同源性比较及系统进化分析。结果表明,副粘病Tianjin株属于副粘病毒科、副粘病毒亚科、呼吸道病毒属,与仙台病毒关系最近。基因组全长及组成规律与仙台病毒相似,只是L基因末尾A15240C变异而使L蛋白增加了一个谷氨酸残基。副粘病毒Tianjin株存在440个独特的核苷酸变异位点,导致110个氨基酸残基的改变,系统进化上构成独立的分支。副粘病毒Tianjin株在基因组序列、宿主亲嗜性和致病性等方面与已知仙台病毒存在较大的差异,可能代表仙台病毒的一个新基因型。; 李梅石立莹袁立军李晓眠王卿王文秀; 关键词：仙台病毒同源性比较系统进化分析

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王文秀