童铁钢
- 作品数：45 被引量：70H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金国家高技术研究发展计划中国农业科学院杰出人才科研启动经费资助更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 鸡β2微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达与纯化
- 2微球蛋白(2-m)是组成MHC Ⅰ类分子复合体的轻链分子,对于MHC Ⅰ类分子在细胞表面稳定表达和有效递呈抗原肽必不可少。本试验从来航鸡全血细胞中克隆了鸡2m全基因,利用软件预测了其信号肽序列,并构建了表达成熟2m的重...
- 刘光亮童铁钢孟庆文吴东来
- 关键词：微球蛋白基因克隆纯化
- 文献传递
- 含禽源启动子的禽流感病毒核蛋白表达载体的构建及其免疫原性的检测
- 为了研究禽流感病毒核蛋白在鸡体内所引起的免疫反应，将其NP基因从重组质粒pVAX-NP上酶切后亚克隆至含禽源启动子的真核表达载体pCAGGS中，经筛选鉴定后获得重组子pCAGGS-NP，将鉴定正确的阳性重组子体外转染真核...
- 王群刘光亮肖一红童铁钢白宇张维军徐树兰吴东来
- 关键词：禽流感病毒核蛋白血清抗体免疫原性
- H5亚型禽流感病毒核蛋白基因重组质粒的构建及其在Hela细胞的瞬时表达被引量：3
- 2006年
- 采用PCR技术从重组质粒pMel-NP扩增得到了禽流感病毒(AIV)A/Goose/Guang-dong/1/96(H5N1)株的核蛋白(NP)基因,将其亚克隆至真核表达载体pVAX1上。将提取的pVAX-NP阳性克隆转染Hela细胞,48 h后经间接免疫荧光试验和Western-blotting检测,NP基因在Hela细胞中已成功瞬时表达。表达产物的分子质量约为57 ku,它与H5N1亚型AIV多克隆抗血清有较好的免疫反应。
- 刘光亮王群童铁钢肖一红孟庆文吴东来
- 关键词：H5N1亚型禽流感病毒NP基因
- 猪MHC-Ⅰa生物素化序列融合基因的构建、表达与纯化
- MHC-I 类分子肽四聚体复合物技术,就是将基因工程制备的 MHC-I 类分子的轻、重链在体外与 T 淋巴细胞特异性抗原肽组装成可以特异、高效和直接定量检测特异性 CTL 活性的肽四聚体复合物检测系统,目前国内关于畜禽动...
- 肖一红刘光亮王群童铁钢白宇孟庆文吴东来
- 关键词：MHC-I克隆纯化
- 文献传递
- 马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏菌中表达及其抗病毒活性的鉴定
- γ-干扰素主要由激活的 T 细胞和 NK 细胞产生,是机体内具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能的重要细胞因子。内源性 IFN-γ水平的高低在很大程度上可以反映机体的细胞免疫状态,对样本中的 IFN-γ进行定量分析,在免疫机...
- 白宇童铁钢刘光亮肖一红王群徐树兰张维军吴东来
- 关键词：Γ-干扰素原核表达抗病毒活性
- 文献传递
- 5种人兽共患病病毒多重RT-PCR检测方法的初步建立被引量：10
- 2009年
- 为建立可同时检测裂谷热病毒(RVFV)、戊型肝炎病毒(HEV)、狂犬病毒(RV)、水泡性口炎病毒(VSV)及口蹄疫病毒(FMDV)5种人兽共患病病毒的多重RT-PCR快速检测方法,本研究根据GenBank登录的上述5种病毒的全基因组序列,设计了5对多重PCR引物,通过优化反应条件,建立检测以上5种病毒的多重RT-PCR方法。通过对同一种属的其他病毒及相关病毒的检测,确定方法的特异性;通过对体外转录合成的RNA进行定量检测的方法,确定方法的敏感度。实验结果表明:在同一RT-PCR反应体系中可同时检测以上5种病毒,扩增片段长度分别为499bp、137bp、274bp、224bp、389bp;而对新城疫病毒(NDV)、赤羽病病毒(AKAV)、牛流行热病毒(BEFV)和乙型脑炎病毒(JBEV)的检测均为阴性;5种病毒RNA的最低检测拷贝数分别为2.91×104、3.14×103、1.25×103、6.65×103和2.38×104。利用该方法对11份RV已知阳性样本和7份HEV已知阳性样本检测结果均呈阳性。本研究建立了一种快速、可同时检测5种人兽共患病病毒的多重RT-PCR检测方法,该方法具有良好的特异性和较高的敏感性。
- 孙庆歌杨银辉张维军王群康晓平李永强白宇童铁钢杨涛步志高吴东来
- 关键词：戊型肝炎病毒狂犬病毒水泡性口炎病毒口蹄疫病毒多重RT-PCR
- 重组马γ-干扰素抗病毒活性测定及单克隆抗体抑制活性鉴定被引量：2
- 2008年
- 为了测定大肠杆菌和杆状病毒表达的重组马γ-干扰素是否具有抗病毒活性,利用这两种干扰素处理马胎肾细胞(EFK-78),然后接种表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组水泡性口炎病毒(VSV*GFP),观察干扰素对病毒表达GFP的抑制,测出其抗病毒活性单位分别为1×103AU/mL、1×105AU/mL。评价了制备的九株抗重组马γ-干扰素单克隆抗体是否可抑制重组马γ-干扰素抗病毒活性,证实其中一株可中和重组马γ-干扰素的抗病毒活性。结果表明:杆状病毒表达的马γ-干扰素具有较高的抗病毒活性,其活性可被一株制备的抗重组马γ-干扰素单克隆抗体抑制;首次获得原核表达的具有抗病毒活性的马γ-干扰素。
- 白宇陈伟业童铁钢张维军徐树兰王群孙庆歌刘光亮步志高吴东来
- 关键词：单克隆抗体
- 含禽源启动子的禽流感病毒核蛋白表达载体的构建及其免疫原性的检测
- 为了研究禽流感病毒核蛋白在鸡体内所引起的免疫反应,将其NP基因从重组质粒pVAX-NP上酶切后亚克隆至含禽源启动子的真核表达载体pCAGGS中,经筛选鉴定后获得重组子pCAGGS-NP,将鉴定正确的阳性重组子体外转染真核...
- 王群刘光亮肖一红童铁钢白宇张维军徐树兰吴东来
- 关键词：禽流感核蛋白真核表达载体血清抗体
- 文献传递
- 猪β2-微球蛋白基因在大肠埃希氏菌中的表达与纯化
- 2008年
- 肖一红刘光亮童铁钢王群孟庆文吴东来
- 关键词：大肠埃希氏菌蛋白基因细胞特异性自身免疫性疾病微球SARS病毒
- 检测马白细胞介素-18双抗体夹心ELISA方法的建立被引量：5
- 2009年
- 目的:建立检测马白细胞介素-18(equine interleu-kin-18,EIL-18)的双抗体夹心ELISA,为马传染病的免疫学研究提供新方法。方法:将识别不同表位的EIL-18的2株单克隆抗体(mAb)B1G1和S6A3纯化后,利用生物素标记试剂盒对B1G1株mAb进行标记,以重组马白细胞介素-18(rEIL-18)为捕获抗原进行ELISA检测来建立EIL-18双抗体夹心ELISA。结果:经过方阵滴定试验确定捕获抗体的最佳浓度为4mg/L,检测抗体的工作效价为1∶2000。建立的方法可检测马血清中的EIL-18,与猪、牛和羊血清中的IL-18不发生交叉性反应,此方法检测敏感度达到15ng/L,特异性良好。结论:成功建立了EIL-18的双抗体夹心ELISA,为马细胞免疫学研究提供了方法,也为下一步EIL-18ELISA试剂盒的商品化开发奠定了坚实基础。
- 童铁钢白宇张维军王群刘光亮徐树兰吴东来
- 关键词：单克隆抗体夹心ELISA
