罗浩
- 作品数：9 被引量：27H指数：3
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- 溶血磷脂酸对胚胎干细胞分化心肌细胞钙通道电流的影响
- 目的诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化并观察溶血磷脂酸对分化心肌细胞L-型钙通道电流的影响。方法采用悬滴培养法诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化。RT-PCR及免疫荧光检测心肌细胞特异性标志物。全细胞膜片钳方式记录溶血磷脂酸...
- 罗浩江洪曾彬蔡军王腾
- 关键词：溶血磷脂酸胚胎干细胞分化心肌细胞L型钙通道
- 文献传递
- 绿色荧光蛋白标记的小鼠胚胎干细胞系的建立及向心肌细胞分化
- 目的建立能够稳定表达绿色荧光蛋白（greenfluorescent protein,GFP）的小鼠胚胎干细胞系,并诱导其向心肌细胞分化。方法质粒pEGFP-N1脂质体复合体转染小鼠胚胎干细胞,经G418筛选后选取GFP强...
- 罗浩江洪蔡军曾彬
- 关键词：胚胎干细胞绿色荧光蛋白分化
- 文献传递
- 异甘草素对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响被引量：10
- 2006年
- 目的:研究异甘草素对豚鼠单个心室肌细胞膜ICa-L通道的影响,旨在探讨其抗心律失常的机制。方法:采用全细胞膜片钳技术,观察不同浓度的异甘草素对ICa-L的作用。结果:①异甘草素能使I-V曲线明显上移。②异甘草素0.1-100μmol/L对ICa-L呈浓度依赖性的抑制作用。③3μmol/L异甘草素具有频率依赖性的抑制作用,它能使ICa-L稳态激活曲线右移、失活曲线左移,还能增加失活后恢复的τ值。结论:提示异甘草素对ICa-L通道的激活态和失活态有较高亲和力,这些可能成为其抗心律失常作用的机制。
- 冯斯婷唐其柱易方方罗浩王腾
- 关键词：异甘草素L型钙电流全细胞膜片钳心室
- 体外诱导鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化的实验研究被引量：3
- 2006年
- 目的:探讨小鼠胚胎干细胞(ESCs)在转化生长因子β1(TGFβ1)联合内脏内胚层END2细胞共培养诱导条件下分化为心肌细胞的特征。方法:小鼠胚胎干细胞在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层上增殖培养,先将ESCs悬浮培养形成23d的拟胚体(EBs),再将23dEBs种植到含有TGFβ1的24孔板中进行诱导,以及种植到铺有END2细胞饲养层的24孔板中进行诱导,培养液中同时加入TGFβ1。免疫细胞荧光技术检测心肌细胞特异性肌动蛋白(αActin)及肌钙蛋白T(TnT)的表达,透射电镜观察分化心肌细胞的超微结构。流式细胞仪检测EBs集落心肌细胞的平均分化率。结果:TGFβ1诱导组和TGFβ1联合内脏内胚层END2细胞共培养诱导组分别有43%,91%(P<0.05)的拟胚体出现自发节律性收缩,均表达心肌细胞特异性蛋白αActin和TnT,以及观察到心肌样超微结构,但在共培养的条件下,自发节律性收缩区域较大,且细胞形态较单一。两诱导组EBs集落心肌细胞平均分化率分别是35%,74%(P<0.05)。结论:TGFβ1联合内脏内胚层END2细胞共培养对小鼠ESCs向心肌细胞定向分化有协同作用,具有较高的诱导分化率。
- 曾彬林国生罗浩蔡军
- 关键词：胚胎干细胞心肌细胞共培养分化
- 绿色荧光蛋白标记的小鼠胚胎干细胞系的建立及向心肌细胞分化被引量：1
- 2006年
- 目的 建立能够稳定表达绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）的小鼠胚胎干细胞系，并诱导其向心肌细胞分化。方法 质粒pEGFP—N1脂质体复合体转染小鼠胚胎干细胞，经G418筛选后选取GFP强阳性克隆进行扩增建系。对稳定表达GFP的胚胎干细胞系进行畸胎瘤形成检测，观察其多向分化潜能。诱导GFP阳性胚胎干细胞向心肌细胞分化。免疫荧光及RT-PCR检测心肌细胞特异性标志物。结果 转染后胚胎干细胞经20次传代后仍然表达GFP，裸鼠皮下接种胚胎干细胞后30～50d均可形成畸胎瘤。GFP阳性胚胎干细胞成功向心肌细胞分化。结论 成功建立表达GFP的小鼠胚胎干细胞系，并可诱导其向心肌细胞分化。
- 罗浩江洪蔡军曾彬
- 关键词：胚胎干细胞绿色荧光蛋白分化
- 内脏内胚层样END-2细胞体外诱导鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的实验研究被引量：7
- 2006年
- 目的 探讨内脏内胚层样END-2细胞体外诱导胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESCs）分化为心肌细胞的特征。方法 用鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryonic fibroblasts，MEF）作为饲养层促进ESCs增殖并抑制其分化，先将ESCs悬浮培养形成2～3d的拟胚体（embryoid bodies，EBs），再和END-2细胞共培养诱导向心肌细胞分化。实验分4组。第1，2组EBs分别和END-2细胞或END-2细胞条件培养液共培养；第3组EBs和表面铺有一层琼脂糖的END-2细胞共培养；第4组自然分化组为对照组。相差显微镜下观察分化细胞的形态学变化，免疫细胞荧光技术检测心肌细胞特异性肌钙蛋白T（TnT）的表达；透射电镜观察分化心肌细胞的超微结构。结果 各实验组均可见自发节律性收缩的拟胚体。随着培养的延长。自发节律性收缩的拟胚体数目也增加，均表达心肌细胞特异性蛋白TnT，以及观察到心肌样超微结构。在和END-2细胞直接接触的诱导条件下，分化的细胞形态较单一。结论 END-2细胞通过分泌可溶性细胞因子可诱导ESCs向心肌细胞分化，直接接触在END-2细胞诱导作用中并不是必要的。但可诱导出较单一的细胞。
- 曾彬林国生郑和忠蔡军罗浩
- 关键词：胚胎干细胞心肌细胞共培养
- 人HCN4基因重组腺病毒载体的构建和鉴定被引量：4
- 2005年
- 目的:构建超极化激活环核苷酸门控通道基因(HCN4)重组腺病毒载体.方法:采用基因工程技术,将HCN4cDNA定向克隆至穿梭载体pAdTrackCMV中,利用胞包装、扩增,CsC1密度梯度超速离心纯化.采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP报告基因,对病毒滴度和感染效率进行监测.结果:测序结果证明成功构建了HCN4基因重组腺病毒载体,病毒滴度达2.0×1015pfu/L.结论:应用细菌内同源重组法成功构建了含人HCN4基因的重组腺病毒载体.
- 蔡军林国生江洪王腾曾彬罗浩郭军李俊汪蕾
- 关键词：腺病毒科
- 溶血磷脂酸对胚胎干细胞分化心肌细胞L型钙通道电流的影响被引量：1
- 2006年
- 目的诱导小鼠胚胎干(ES)细胞向心肌细胞分化并观察溶血磷脂酸(LPA)对分化心肌细胞L型钙通道电流(ICa-L)的影响。方法采用悬滴培养法诱导小鼠ES细胞向心肌细胞分化,逆转录-聚合酶链式反应及免疫荧光检测心肌细胞特异性标志物,全细胞膜片钳记录LPA0.1,1.0和10μmol/L对小鼠ES细胞分化心肌细胞ICa-L的影响。结果小鼠ES细胞成功向心肌细胞分化。0.1,1.0和10.0μmol/LLPA使分化心肌细胞ICa-L峰电流密度分别由用药前-6.8±0.7pA/pF增加到-8.9±1.2,-12.6±2.9和-16.6±3.5pA/pF(P<0.01或P<0.05)。结论LPA呈浓度依赖性促进小鼠ES细胞分化的心肌细胞ICa-L。
- 罗浩江洪曾彬蔡军王腾
- 关键词：心血管病学溶血磷脂酸胚胎干细胞分化心肌细胞L型钙通道
- TGF-β_1联合内脏内胚层END-2细胞诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞及与凋亡的关系被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨体外诱导胚胎干细胞(ESCs)向心肌细胞分化过程中分化与凋亡的关系,为优化组织工程的种子细胞提供依据。方法:先将ESCs悬浮培养形成2-3 d拟胚体(embryoid bodies,EBs),再向培养液中添加转化生长因子-β1(TGF-β1),以及与内脏内胚层样END-2细胞条件培养液共培养联合诱导ESCs向心肌细胞分化。以自然分化为对照组。激光共聚焦显微技术检测心肌细胞特异性肌钙蛋白T(TnT)的表达,透射电镜观察分化心肌细胞的超微结构。用AnnexinⅤ/PI双染后,在流式细胞仪上检测ESCs分化过程中的凋亡情况。结果:EBs经TGF-β1诱导后,有(43.00±2.08)%的拟胚体出现自发节律性收缩,表达心肌细胞特异性蛋白TnT,以及观察到心肌样超微结构,尤其是联合TGF-β1和END-2细胞条件培养液诱导,自发性收缩的拟胚体高达(88.00±1.42)%(P<0.01),收缩区域较大且拥有较成熟的心肌样结构。然而自然分化组发生自发节律性收缩的拟胚体只有(12.00±1.53)%。经2种诱导条件诱导后,检测两者的凋亡率分别为(5.58±0.65)%,(9.60±0.75)%(P<0.05)。结论:联合TGF-β1和内脏内胚层样END-2细胞条件培养液对心肌细胞分化有较高的诱导率,两者发挥协同诱导作用,可能机制是直接诱导ESCs分化或促进不向心肌细胞分化的ESCs凋亡。
- 曾彬林国生郑和忠蔡军罗浩
- 关键词：胚胎干细胞心肌细胞
