胡晓俊
- 作品数：12 被引量：23H指数：3
- 供职机构：中山大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Cdyl基因敲除的小鼠诱导多能干细胞系的建立及鉴定被引量：2
- 2011年
- 【目的】建立Cdyl基因敲除的小鼠诱导多能干细胞系(iPSC)。【方法】通过组织块贴壁法培养Cdyl-/-的胚胎成纤维细胞(MEF)。将pMx-Oct3/4、Sox2、c-Myc、Klf4和hrGFP五种质粒分别转染Plat-E细胞,收集病毒上清,感染Cdyl-/-MEF获得Cdyl-/-iPSC,并对Cdyl-/-iPS细胞的分子标记及体内外分化能力进行检测。【结果】取Cdyl-/-胎鼠皮肤,培养得到增殖旺盛的Cdyl-/-MEF。成功包装逆转录病毒并感染Cdyl-/-MEF,得到胚胎干细胞样的Cdyl-/-iPS细胞。该细胞表达AKP、Oct3/4、SSEA-1,在体内外可以分化为三胚层的细胞类型。【结论】Cdyl-/-iPS细胞具有自我更新和多向分化能力的特性。Cdyl-/-iPS细胞系的建立为研究Cdyl在小鼠早期胚胎发育中的功能提供一个良好的细胞模型。
- 胡晓俊赖文玉万利王涛张秀明李伟强项鹏
- 关键词：基因敲除小鼠胚胎成纤维细胞
- 三模态报告基因的构建、体外标记和骨髓间充质干细胞显像的可行性
- 2014年
- 目的 探讨三模态报告基因的构建、体外标记和人骨髓间充质干细胞（hMSC）显像的可行性.方法 通过gateway技术构建同时含有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）、荧光素酶（luciferase2）和储铁蛋白（ferritin）为报告基因的慢病毒载体pLenti7.3-ferritin-IRES-luciferase2-SV40-EGFP.基因测序检测基因序列的正确性、慢病毒包装、感染hMSC,建立稳定的hMSC转染细胞系.以未转染hMSC为未转染组,转染hMSC为转染组.2组细胞分别应用荧光显微镜检测细胞中EGFP表达,光学成像系统计数细胞中加入催化底物D-luciferin后Is内发光光子数,普鲁士蓝染色检测铁染色率,利用MR的T2-mapping序列检测细胞的T2值.采用Pearson法分析转染组细胞个数与1s内发光光子数的相关性;采用t检验比较转染组和未转染组之间细胞的铁染色率、MR T2-mapping序列T2值,及转染加铁组与未转染加铁组之间T2值的差异.结果 基因测序显示pLenti7.3-ferritin-IRES-luciferase2-SV40-EGFP基因序列正确.慢病毒成功制备并转染hMSC,建立EGFP＋-hMSC稳定细胞系.荧光显微镜可检测到单个转染组细胞EGFP表达,未转染组细胞中未检测到EGFP的表达.1ml不同浓度2.00×106、1.00× 106、5.00× 105、2.50× 105、1.25×105、6.25×104个/ml转染组细胞悬液产生的光子数分别为7.972× 107、3.061×1 07、1.547×107、7.805×106、4.256× 106、1.411×106,二者浓度呈正相关（r=0.993,P＜0.01）.未转染组细胞中未检测到光学信号.普鲁士蓝染色可见转染组和未转染组中hMSC的铁染色率分别（81.6±5.1）％和（21.6±3.8）％,差异有统计学意义（t=20.97,P＜0.01）.标记细胞MR成像,转染组细胞T2值为（628.0±23.1）ms,未转染组T2值为（646.5±17.2）ms,差异无统计学意义（t=1.286,P=0.246）.转染加铁组T2值为（488.3±10.7） ms,明显低于未转染加铁组T2值[（520.8±21.0） ms],差异有统计学意义（t=2.76,P=0.033）.结论 构建同时含有EGFP、lucife
- 秦潇潇胡晓俊李征然陈俊伟吴春赖丽莎张丽娜谢佩怡孟晓春朱康顺
- 关键词：骨髓间充质干细胞基因显像
- 氯化钴作用下大鼠肝癌细胞株RH35的HIF-1α与VEGF表达及侵袭性影响的研究被引量：7
- 2014年
- 目的研究不同浓度的氯化钴(CoCl2)对大鼠肝癌细胞株(RH35)的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,及对RH35增殖及侵袭能力影响。方法利用不同浓度的(0、50、100、150、200μmol/L)CoCl2建立RH35缺氧模型。通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测CoCl2对RH35的体外生长增殖活性的影响。定量PCR(Q-PCR)、蛋白免疫印迹法及ELISA检测RH35中HIF-1α及VEGF的mRNA及蛋白表达情况。体外侵袭实验(Transwell)检测细胞的体外侵袭迁移力。结果 CCK-8显示在CoCl2浓度为50、100、150μmol/L时,RH35细胞体外生长增殖活性与0μmol/L无差异(P>0.05),在200μmol/L时,RH35增殖活性降为(62.90±1.57)%,与0μmol/L时比较差异有统计学意义(P﹤0.01)。Q-PCR显示RH35细胞HIF-1α及VEGF的mRNA表达随CoCl2浓度升高而增加,并且HIF-1α与VEGF呈显著正相关(r=0.980,P=0.020)。蛋白免疫印迹法及ELISA显示HIF-1α及VEGF的蛋白表达均随CoCl2浓度升高而增加。Transwell显示RH35随CoCl2浓度增高,侵袭能力增加。结论 CoCl2化学缺氧模型可较好的模拟缺氧引起的肝癌细胞HIF-1α上调,使VEGF表达增加,并且两者具有相关性;通过上调HIF-1α可增加肝癌细胞的侵袭能力,为下一步实验奠定基础。
- 陈俊伟胡晓俊林曲毛军杰王龙柏明军黄明声单鸿
- 关键词：缺氧缺氧诱导因子-1Α血管内皮细胞生长因子肿瘤侵袭
- 过表达肝细胞核因子4alpha对人骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化的作用被引量：2
- 2014年
- 目的应用转基因技术将肝细胞核因子4alpha(HNF-4α)转导入人骨髓间充质干细胞(MSCs)内,使其连续过表达HNF-4α并促进MSCs向肝样细胞分化。方法 HNF-4α基因通过慢病毒表达载体pLV/Final-puro-hHNF4α-hrGFP转入人MSCs(UE7T-13细胞)内,用流式细胞分析法检测及分选后,收集hrGFP阳性的UE7T-13细胞进行扩增。体外成肝诱导一周后,免疫荧光染色检测过表达HNF-4α基因的UE7T-13细胞(E7-hHNF-4α细胞)的白蛋白(ALB)和细胞角蛋白(CK18)的表达情况,糖原染色检测UE7T-13细胞及E7-hHNF-4α细胞的糖原储存功能。结果建立稳定、过表达hHNF-4α基因的E7-hHNF-4α细胞,持续过表达HNF-4α促进MSCs向肝样细胞分化,经过7天体外成肝诱导,E7-hHNF-4α细胞具有成熟肝样细胞表达ALB和CK18蛋白及糖原储存功能。结论利用Gateway技术可将HNF-4α高效转导入人MSCs细胞中,并有效促进MSCs向肝样细胞分化。
- 谢佩怡胡晓俊陈俊伟孟晓春朱康顺单鸿
- 关键词：肝细胞核因子4Α间质干细胞细胞分化
- 利用多位点Gateway技术构建小鼠平滑肌肌动蛋白α基因启动子慢病毒载体被引量：2
- 2012年
- 背景:平滑肌肌动蛋白α基因是相对局限于在血管平滑肌细胞中表达的少数几个基因之一,公认是血管平滑肌细胞表型转化的标志。目的:利用多位点Gateway技术构建慢病毒载体pLVpuro/平滑肌肌动蛋白α控制绿色荧光蛋白基因的表达。方法:设计合成含有attB位点的小鼠平滑肌肌动蛋白α基因启动子引物,构建pUp-平滑肌肌动蛋白α;通过LR反应将pUp-平滑肌肌动蛋白α和pDown-绿色荧光蛋白(含att位点的绿色荧光蛋白入门克隆)连接到目的载体pDEST-puromycin,得到pLVpuro/平滑肌肌动蛋白α-绿色荧光蛋白表达载体;经PCR和测序鉴定,将载体质粒瞬时转染C2C12细胞系,并且用免疫荧光染色检测基因的表达。结果与结论:成功构建pLVpuro/平滑肌肌动蛋白α-绿色荧光蛋白报告基因载体,测序结果表明启动子序列正确;细胞转染实验以及免疫荧光检测证实构建的报告基因载体可以反映平滑肌肌动蛋白α基因的表达情况。
- 袁晓峰项鹏李伟强胡晓俊彭朝权
- 关键词：慢病毒绿色荧光蛋白
- 多功能纳米基因载体转染人脂肪间充质干细胞及体外细胞磁共振显像被引量：3
- 2014年
- 目的 观察多功能纳米基因载体聚乙二醇-聚乙烯亚胺-超顺磁性氧化铁（PEG-g-PEI-SPION）转染人脂肪间充质干细胞（hADMSCs）的可行性、效率及体外细胞磁共振显像功能.方法 根据先前报道的方法合成PEG-g-PEI-SPION.采用凝胶阻滞实验评估其复合外源性基因的能力;动态光散射法测量PEG-g-PEI-SPION/pDNA纳米复合物的粒径大小及表面电位;体外细胞毒性实验检测其对hADMSCs的细胞毒性.使用流式细胞分析仪检测PEG-g-PEI-SPION转染hADMSCs的效率.通过激光共聚焦显微镜及锥虫蓝染色实验研究hADMSCs对PEG-g-PEI-SPION/pDNA纳米复合物的摄入.PEG-g-PEI-SPION的磁共振显像功能通过体外细胞磁共振扫描验证.结果 PEG-g-PEI-SPION细胞毒性小,复合外源性基因后能够形成稳定的纳米复合物,粒径80 ～ 100 nm.在N/P=20时PEG-g-PEI-SPION转染hADMSCs最高取得了22.8％±3.6％的转染率,高于商品化的阳离子脂质体Lipofectamine最高11.2％±2.6％的转染率（P＜0.05）.同时,PEG-g-PEI-SPION中的SPION可有效标记hADMSCs,在磁共振T2加权图像上呈低信号.结论 PEG-g-PEI-SPION是一种磁共振可视的,能有效转染hADMSCs的纳米基因载体.
- 庞鹏飞李冰胡晓俊康庄关守海巩发明孟晓春李丹黄明声单鸿
- 关键词：干细胞转染
- Luciferase2/mKate2双报告基因对小鼠骨髓间充质干细胞的标记及活体光学成像研究被引量：3
- 2014年
- 【目的】Luciferase2/mKate2双报告基因标记小鼠骨髓间充质干细胞(mMSC),并进行活体生物发光和荧光双模态光学成像研究。【方法】全骨髓细胞贴壁分离法提取mMSC,进行细胞表面标志物和多向分化潜能的鉴定;CMVLuciferase2-mKate2慢病毒感染mMSC,根据细胞内远红荧光蛋白mKate2的表达水平评估转染效率并利用流式细胞仪进行纯化筛选;对筛选后的mMSC(mMSC-CMV-Luc2-mKate2,mKate2+>95%)进行活体生物发光和荧光双模态光学成像。【结果】成功分离mMSC;表型分析结果显示mMSC高表达Sca-1(94.5%)、CD44(99.6%),低表达CD11b(0.092%)、CD45(0.11%);mMSC具有成脂和成骨分化能力。CMV-Luciferase2-mKate2慢病毒感染mMSC 96 h后,细胞内mKate2的荧光表达率为22.97%,经流式细胞仪筛选后mKate2表达率大于95%。对筛选后的mMSC进行活体生物发光成像和荧光成像可探测光信号,光信号强度与细胞数量呈明显线性正相关(生物发光成像为R2=0.9893;荧光成像为R2=0.9226)。【结论】CMVLuciferase2-mKate2慢病毒转染mMSC可稳定表达双报告基因Luciferase2和mKate2,体外可根据细胞内mKate2的表达水平间接评估转染效率、进行细胞筛选,活体内可同时进行生物发光成像和荧光成像,为mMSC体内移植后生物学行为的研究提供了良好、无创的定量示踪手段。
- 刘静静胡晓俊李征然李丹颜荣华覃杰王劲单鸿
- 关键词：骨髓间充质干细胞示踪生物发光成像
- 肝细胞癌对三氧化二砷的化疗耐药性机制被引量：1
- 2016年
- 研究证实三氧化二砷（As2 O3）单药治疗肝细胞癌（HCC）的效果有限，多数学者认为主要与 HCC 的化疗耐药有关。HCC 对 As2 O3的耐药机制目前仍很不明确，研究显示与 As2 O3的代谢特点、肝癌组织学和分子生物学的特征等密切相关。
- 陈耀庭胡晓俊李丹单鸿
- 关键词：肝肿瘤砷剂分子靶向治疗
- 人永生化骨髓间充质干细胞移植后在肝损伤裸鼠体内的活体光学示踪被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨生物发光成像用于细胞移植后的活体示踪和定量研究的可行性。方法:构建CMVluciferase2-mkate2片段的慢病毒载体,感染永生化人骨髓间充质干细胞(UE7T-13),体外和活体验证双光学报告基因标记细胞的荧光表达及生物发光成像。结果:(1)成功建立稳定表达红色荧光蛋白(mKate2)和荧光素酶(Luc2)活性的UE7T-13细胞系。(2)慢病毒感染后的UE7T-13细胞其多向分化能力未受影响;(3)双光学报告基因标记细胞的体外和活体生物发光成像,可用于裸鼠肝脏移植细胞后的活体示踪。结论:慢病毒pLENTi-CMV-luc2-mKate2感染后的永生化人骨髓间充质干细胞(UE7T-13)稳定表达红色荧光蛋白(mKate2)和萤火虫荧光素酶(Luc2)活性,可用于裸鼠干细胞移植后活体示踪研究。
- 李征然唐文杰李丹胡晓俊单鸿
- 关键词：慢病毒载体生物发光成像活体示踪
- 碱性成纤维生长因子对脂肪干细胞分化为心肌细胞的影响被引量：3
- 2015年
- 【目的】探讨碱性成纤维生长因子(b FGF)对脂肪干细胞(ADSC)分化为心肌细胞的影响。【方法】从SD大鼠中提取、分离、培养、鉴定ADSC后,评价ADSC分化能力。将成功建立心肌梗死(MI)模型的60只大鼠随机分4组(n=15/组):PBS组、b FGF组、ADSC组及b FGF+ADSC组。建立心梗1周后分别注射PBS、b FGF、ADSC及b FGF+ADSC,4周后用心脏超声测量心梗大鼠的左室射血分数(EF),取大鼠心脏检测左室梗死面积、微血管密度(MVD)及ADSC分化。【结果】成功分离ADSC,流式细胞分析显示大多数ADSC表达CD29和CD90,不表达CD34和CD45。ADSC能被诱导分化成成脂、成骨细胞。b FGF+ADSC组及ADSC组的EF高于PBS组和b FGF组(P<0.01),b FGF+ADSC组的EF高于ADSC组(P<0.01),PBS组和b FGF组的EF差别无统计学意义(P=0.33)。b FGF+ADSC组及ADSC组的梗死面积小于PBS组和b FGF组(P<0.01),b FGF+ADSC组的梗死面积小于ADSC组(P<0.01),PBS组和b FGF组的梗死面积差别无统计学意义(P=0.28)。四组中b FGF+ADSC组的MVD最大(P<0.01)。ADSC可分化为c Tn T阳性细胞、SMA阳性细胞及fⅧ阳性细胞。【结论】b FGF可促进ADSC分化成心肌细胞和新生血管,改善心脏功能。
- 覃杰闫翠陈极锋李丹胡晓俊单鸿
- 关键词：心肌梗死脂肪干细胞碱性成纤维生长因子
