谭洪毅
- 作品数：16 被引量：56H指数：5
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 体外获得高纯度大鼠背根神经节神经元的原代培养被引量：8
- 2009年
- 目的:建立一种切实可行的胚胎大鼠背根神经节神经元培养及纯化方法。方法:用显微解剖获取足够数量的胚胎大鼠背根神经节,通过胰蛋白酶+EDTA消化、交替使用NB培养基与加入了5-氟-2-脱氧尿嘧啶核苷酸/尿苷的抗有丝分裂NB培养基等方法,在体外获得纯化的背根神经节神经元,采用神经丝蛋白免疫细胞化学染色法与DAPI染核的方法鉴定并测定神经元的纯度。结果:获得的背根神经节神经元在体外生长良好,纯度可达到96%以上。结论:本实验方法可以获得大量高度纯化的大鼠背根神经节神经元。
- 谭洪毅潘频华胡成平
- 关键词：背根神经节神经元原代培养
- 呼吸道合胞病毒感染大鼠脊髓背根节信号转录因子的研究被引量：6
- 2009年
- 目的:研究反复呼吸道合胞病毒(RSV)感染大鼠脊髓背根节感觉神经细胞转录因子的活化状态变化。方法:1～2周龄SD大鼠幼鼠共80只,区组随机分为对照组和RSV感染组,每组40只。RSV感染组采用每周1次RSV(浓度5×105U/mL)滴鼻法制作RSV慢性感染模型,对照组采用无病毒培养上清液滴鼻。8周后每组取5只大鼠进行气道反应性测定。原位杂交检测肺组织RSVRNA以证明呼吸道合胞病毒感染模型的可靠性。用TranSignal蛋白质/DNA活性芯片筛选C7～T5脊髓背根节组织中活性改变的转录因子。Western印迹对筛选结果中改变最明显的因子进行验证。结果:RSV感染组气道阻力增幅显著大于对照组(P<0.05)。原位杂交显示RSV感染组肺组织有大量呼吸道合胞病毒存在,HE染色示肺部存在明显炎症细胞浸润,说明呼吸道合胞病毒感染模型建立成功。TranSignal蛋白/DNA组合芯片检测筛选:RSV反复感染大鼠背根节55个转录因子活性上调(RSV感染组/对照组>2),43个活性下调(RSV感染组/对照组<0.5)。Western印迹验证结果与芯片结果一致,并进一步明确蛋白/DNA组合芯片筛选的IRF转录因子是IRF-1,而不是IRF-2。结论:反复RSV感染可引起气道反应性增高和脊髓背根节感觉神经细胞内多种转录因子活性发生改变,可能与气道反应性增高的神经调控异常有关。
- 谭洪毅潘频华赵然然覃庆武王慧胡成平
- 关键词：呼吸道合胞病毒神经可塑性
- 抗神经生长因子抗体对支气管哮喘小鼠肺组织自噬水平的影响被引量：9
- 2014年
- 目的 研究抗神经生长因子（NGF）抗体对支气管哮喘（简称哮喘）小鼠肺组织抗原提呈细胞自噬水平的影响.方法 将24只6周龄BALB/c小鼠按随机数据表法分为对照组（PBS致敏,PBS激发）、哮喘组[卵清白蛋白（OVA）致敏,OVA激发]和抗NGF组（OVA致敏,OVA激发）,每组8只.致敏采用腹腔注射方法,激发采用雾化吸入方法.抗NGF组雾化前30 min腹腔注射抗NGF抗体进行干预,对照组及哮喘组在雾化前30 min腹腔注射PBS.最后一次致敏24 h后取肺组织和血清.免疫电子显微镜观察小鼠气道壁树突状细胞自噬水平,Western blot法检测小鼠肺组织自噬标志分子MHP1 LC3-Ⅱ水平.ELISA法检测血清中IL-4、干扰素-γ及NGF水平.免疫组化检测肺组织树突状细胞表面共刺激分子CD80、CD86、CD40及主要组织相容性复合物体Ⅱ类分子（MHC-Ⅱ）的表达水平.结果 抗NGF组肺组织自噬水平（0.28±0.07）低于哮喘组（0.46±0.10）、高于对照组（0.17±0.08）,差异有统计学意义（F=15.571,P＜0.05）,各组间两两比较差异均有统计学意义（均P ＜0.05）.血清神经生长因子浓度在抗NGF组为[（0.65 ±0.04） μg/L],低于哮喘组[（0.75±0.10） μg/L],但仍高于对照组[（0.52 ±0.05） μg/L],差异有统计学意义（F =61.972,P＜0.05）,各组间两两比较差异均有统计学意义（均P ＜0.05）.抗NGF组肺组织抗原提呈细胞表面共刺激分子CD80、CD86、C D40及MHC-Ⅱ较哮喘组明显减少.抗NGF组血清IL-4水平低于哮喘组而干扰素-γ水平高于哮喘组.结论 抗NGF抗体可能下调哮喘小鼠肺组织自噬水平,抑制抗原提呈细胞功能,减弱Th2优势的气道炎症.
- 曹足潘频华谭洪毅覃庆武王展苏晓丽胡成平
- 关键词：哮喘自噬树突细胞
- MEF2C调控大鼠脊髓背根节感觉神经元细胞P物质和低分子量神经丝微管蛋白表达的研究
- 目的:建立一种切实可行的胚胎大鼠背根神经节神经元培养及纯化方法,研究MEF2C在背根神经节神经元细胞内表达对P物质和低分子量神经丝微管蛋白基因表达的影响以及MEF2C与气道高反应性发生间可能的关系。
方法:利...
- 谭洪毅
- 关键词：背根神经节神经元原代培养P物质
- 文献传递
- 中性粒细胞胞外诱捕网在矽肺中的作用研究被引量：2
- 2019年
- 目的:通过构建二氧化硅诱导动物矽肺模型,探讨中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil nxtracellular traps,NETs)在矽肺中可能的作用。方法:将C57BL/6J雄性小鼠完全随机分为磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution,PBS)组、脱氧核糖核酸酶Ⅰ(deoxyribonuclease Ⅰ, DNase Ⅰ)组、二氧化硅+PBS组、二氧化硅+DNase Ⅰ组。通过气管内滴注二氧化硅(0.2 g/kg)混悬液构建小鼠矽肺模型,PBS组与DNase Ⅰ组注入等体积的PBS。在二氧化硅(silicon dioxide,SiO2)混悬液注入后的第0小时、10小时小鼠气管内注入DNase Ⅰ(5 mg/kg),以后DNase Ⅰ持续给药:5 mg/kg/day,直到SiO2混悬液注入后的28天。二氧化硅(SiO2)干预28天后,取各组小鼠肺组织与肺泡灌洗液,通过PicoGreen荧光染料检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中NETs水平,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测BALF中转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)与炎症因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,HE染色和Masson染色观察肺组织的病理学变化,Western Blot检测肺组织中NETs特异性组分瓜氨酸化组蛋白3(citrullinated-histone3,Cit-H3)表达。结果:SiO2干预28天后,与PBS组相比,二氧化硅+PBS组小鼠肺组织炎症损伤加重,BALF中促炎介质IL-1β、IL-6、TNF-α水平上升;肺组织发生纤维化,大量硅结节形成;肺组织中Cit-H3蛋白表达量增加,BALF中NETs水平显著升高。予以NETs抑制剂DNase Ⅰ进行干预后,肺组织NETs水平显著下降,二氧化硅诱导的肺部炎症损伤、纤维化显著减轻。结论:NETs水平升高可能介导了二氧化硅诱导的小鼠矽肺模型肺部炎症损伤与纤维化。
- 刘浪潘频华潘频华胡永斌罗百灵谭洪毅
- 关键词：矽肺炎症纤维化
- 神经生长因子通过诱导IRF-1核内转运增强PC-12细胞钠电流的表达
- 2011年
- 目的：初步探讨神经生长因子（nerve growth factor,NGF）和干扰素调节因子-1（interferon regula-tory factor-1,IRF-1）对类感觉神经元细胞株大鼠嗜铬细胞（rat pheochromocytoma cell,PC-12）中的Na＋电流变化的影响。方法：用不同浓度的NGF（0~200ng/mL）刺激PC-12细胞,采用Real-time PCR检测IRF-1mRNA表达变化,Western印迹检测IRF-1的活化。然后用全细胞膜片钳技术观察IRF-1干扰PC-12细胞对钠电流的影响。结果：低剂量NGF短时间刺激,就可以增加钠电流密度,同时这种钠电流的增加具有NGF浓度依赖性。此外,高剂量NGF刺激PC-12细胞后,细胞内的IRF-1mRNA的表达明显增加,而较低剂量NGF刺激细胞后可以导致IRF-1蛋白向细胞核内转运,同时并不影响其基因水平表达。此外,当IRF-1被干扰后,NGF刺激则不会再出现钠电流升高。结论：NGF可以呈剂量依赖性地增加PC-12细胞的钠电流强度,同时这种增强受到了IRF-1的调控。
- 朱叶牡潘频华谭洪毅胡成平
- 关键词：干扰素调节因子-1神经生长因子PC-12细胞
- 116例ICU医院获得性鲍曼不动杆菌肺炎预后危险因素分析
- 目的 探讨湖南省ICU获得性鲍曼不动杆菌肺炎(ABHAP)的预后危险因素.方法 以湖南省6家医院ICU在2010年12月-2011年12月期间发生的1 16例ABHAP患者为研究对象,收集患者的临床资料并记录,按住院28...
- 王展潘频华李茉莉谭洪毅张强吕爱莲陈齐国李舜午林春龙
- MEF2C调控大鼠脊髓背根节感觉神经元P物质和低分子量神经丝微管蛋白的表达被引量：1
- 2010年
- 目的:研究肌细胞增强因子2C(MEF2C)在大鼠脊髓背根神经节神经元细胞内的表达及其与P物质和低分子量神经丝微管蛋白合成的关系。方法:分离培养背根神经节神经元细胞,然后暴露于不同浓度的神经生长因子下24h,最后用实时聚合酶链反应技术检测P物质与低分子量神经丝微管蛋白基因在背根神经节神经元细胞内的表达。通过化学转染方法将合成的3条siRNA-MEF2C分别转染PC12细胞株,并用实时聚合酶链反应技术筛选干扰效率最高的siRNA。采用化学转染方法干扰背根神经节神经元细胞内MEF2C的表达,在高浓度神经生长因子刺激背根神经节神经元细胞后采用实时聚合酶链反应技术检测干扰后背根神经节神经元细胞内P物质与低分子量神经丝微管蛋白基因的表达。结果:P物质及低分子量神经丝微管蛋白基因表达随刺激用神经生长因子浓度的升高而升高。使用化学转染方法成功地干扰背根神经节神经元细胞内MEF2C的表达,MEF2C较对照组下降52%,同时没有检测到对cAMP反应元件结合蛋白表达的影响。实验组背根神经节神经元细胞内P物质在RNA水平较对照组下降了39%,而低分子量神经丝微管蛋白在RNA水平较对照组下降了62%。结论:神经生长因子促进大鼠脊髓背根节感觉神经元内P物质与低分子量神经丝微管蛋白的合成。大鼠背根神经节神经元细胞内P物质及低分子量神经丝微管蛋白基因表达受MEF2C调控。
- 谭洪毅潘频华朱叶牡胡成平
- 关键词：背根神经节P物质转录因子
- 有创正压通气对特发性肺纤维化合并急性呼吸衰竭患者预后的干预研究被引量：2
- 2015年
- 目的观察有创正压通气在治疗特发性肺纤维化(IPF)合并急性呼吸衰竭(ARF)中的作用。方法回顾分析中南大学湘雅医院呼吸重症监护室(RICU)2010年1月到2014年6月间收治的确诊IPF合并ARF患者12例,根据接受机械通气方式的不同分为无创正压通气(NPPV)组7例和有创正压通气(IPPV)组5例,比较两组患者的机械通气前的一般情况、实验室结果和机械通气治疗情况。结果 IPPV组入院时白细胞水平和Pa CO_2水平较NPPV组高(t=1.799,P=0.038;t=1.783,P<0.001),最终接受IPPV的5例患者在28 d内均死亡,而只接受NPPV的7例患者有5例在入住RICU后28 d仍存活,差异有统计学意义(P=0.028)。结论感染可能是导致IPF患者发生ARF的重要原因,IPF合并ARF患者不能从有创正压通气治疗中受益。
- 谭洪毅周作人曹足杨宇琼杨伊莹吴靓潘频华胡成平
- 关键词：有创正压通气特发性肺纤维化急性呼吸衰竭
- 几丁质微粒减轻中性粒细胞哮喘模型小鼠的气道炎症
- 目的 研究几丁质微粒对中性粒细胞哮喘模型小鼠气道炎症及细胞因子IL-10及IL-17的影响.方法 将30只4～6周龄的BALB/c小鼠按随机数字表法分为5组:正常对照组、CMP对照组(CMP干预/PBS致敏/PBS激发)...
- 周作人潘频华谭洪毅胡永斌
