赵学军
- 作品数：8 被引量：11H指数：2
- 供职机构：贵州医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划贵州省科学技术基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 家蝇伴侣蛋白TCP-1基因的序列分析、克隆及诱导表达被引量：1
- 2014年
- 旨在对EST筛选得到的家蝇伴侣蛋白TCP-1(MD-TCPⅠ)基因进行序列分析,克隆其cDNA序列并在大肠杆菌中诱导表达。采用EST测序技术从已构建的家蝇幼虫cDNA质粒文库中筛选到MD-TCPⅠ基因,对其进行序列测定和分析。以该基因的cDNA文库质粒为模板,通过PCR的方法进行扩增,以pET-28a(+)为载体构建重组质粒,再转化到表达宿主大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。表达产物通过SDS-PAGE进行鉴定。结果显示,MD-TCPⅠ基因ORF全长753 bp,编码250个氨基酸,理论分子量27.07 kD;等电点5.92,该序列编码的蛋白属于热休克蛋白60家族的TCP。构建了正确基因序列MD-TCPⅠ重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。
- 赵学军国果吴沁怡陶如玉吴建伟
- 关键词：基因克隆
- 家蝇伴侣蛋白CCTδ基因克隆、序列分析及表达模式的研究
- 2016年
- 旨在对家蝇伴侣蛋白CCTδ基因进行c DNA克隆、序列分析,并对其时空表达模式进行初步探索。采用EST测序技术从已构建的家蝇幼虫c DNA质粒文库中筛选到家蝇CCTδ基因,以该基因的c DNA文库质粒为模板,通过PCR的方法进行扩增。运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行结构与功能分析,构建系统进化树。取家蝇不同生活史时期虫体(卵、各龄幼虫、蛹、雄雌成虫),3龄幼虫不同组织部位(体壁、气管、唾液腺、脂肪体、马氏管及中肠),采用实时荧光定量PCR分析CCTδ基因在家蝇不同发育阶段和组织部位的表达情况。结果显示,经PCR扩增后,得到了1 600 bp左右的特异性家蝇CCTδ基因片段;CCTδ基因ORF全长1 602 bp,编码533个氨基酸,理论分子量57.16 k D,等电点为7.50;二级结构主要以α-螺旋和不规则卷曲为主;进化树分析显示其具有较好的保守性,与中华按蚊的遗传距离较近。时空表达谱显示:该基因在家蝇不同发育时期均有表达,以蛹期表达量最高;在3龄幼虫不同组织中,以气管表达量最高。成功克隆了家蝇CCTδ基因并初步探索了其时空表达模式。
- 陶如玉赵学军杨尉锦吴建伟国果
- 关键词：家蝇生物信息学分析
- 家蝇抗真菌肽-溶菌酶基因的克隆、表达及序列分析
- 2015年
- 旨在对家蝇抗真菌肽MAF-1-溶菌酶(LZM)基因进行生物信息学分析,并进行融合基因MAF-1-LMZ的克隆和表达分析。从Gen Bank获得家蝇抗真菌肽MAF-1和溶菌酶LZM的编码序列,分析和预测这两种蛋白质的结构和功能。PCR扩增融合蛋白质抗真菌肽-溶菌酶的基因MAF-1-LMZ,将其克隆到原核表达载体p ET-28a中,重组质粒p ET-28a-MAF-1-LMZ在大肠杆菌Origmi B/DE3中经用IPTG诱导表达,表达产物MAF-1-LMZ通过SDS-PAGE电泳进行鉴定,采用小试管法倍比稀释法进行活性验证。结果显示,融合蛋白质MAF-1-LMZ序列的ORF为969 bp,编码322个氨基酸残基,理论分子量为35 468.6 Da,等电点为8.31,在大肠杆菌Origmi B/DE3中得到成功表达。其纯化后的目的蛋白具有抗真菌活性。
- 彭传林魏川川吴建伟王宇修江帆尚小丽赵学军
- 关键词：家蝇
- 家蝇伴侣蛋白CCTη基因序列分析与表达模式被引量：2
- 2015年
- 目的对家蝇伴侣蛋白CCTη(MD-CCTη)基因进行序列分析,克隆其c DNA序列并检测家蝇CCTη基因的表达情况。方法采用表达序列标签(EST)测序技术从已构建的家蝇幼虫c DNA文库中筛选MD-CCTη基因,对其进行序列测定和分析;提取家蝇3日龄幼虫RNA,逆转录c DNA为模板,PCR扩增,并与p MD-19T载体连接,转化大肠杆菌DH5α中;采用实时荧光PCR技术分析MD-CCTη基因在家蝇不同生长发育阶段及3日龄幼虫组织中表达模式。结果 MD-CCTη基因开放阅读框(ORF)全长1 632 bp,编码543个氨基酸,理论分子量59.3 k Da,等电点6.27;该基因推导的氨基酸序列与其他昆虫同源序列比较有较高的相似性(93%),聚类分析结果显示,家蝇与地中海实蝇和果蝇的亲缘关系最近(100%);MD-CCTη在发育阶段以卵期表达量最高,其次为1日龄幼虫,雄性成虫表达量最低;MD-CCTη基因在家蝇3日龄幼虫组织中气管表达量最高,其次为唾液腺,在体壁中表达量最低。结论成功克隆出MD-CCTη基因的c DNA序列,MD-CCTη在家蝇不同发育阶段及组织中表达模式存在明显差异。
- 赵学军国果修江帆吴建伟陶如玉
- 关键词：家蝇克隆实时荧光
- 家蝇黏蛋白mucin-46基因的序列分析
- 2014年
- 目的:分析和预测家蝇黏蛋白mucin-46基因及其编码蛋白的结构和特性。方法:利用EST测序技术从家蝇幼虫cDNA文库中获得家蝇黏蛋白mucin-46基因cDNA序列,采用美国国家生物技术信息中心(NCBI)、瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(Expasy)中的相关工具,对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、疏水性、信号肽、二级结构和亚细胞定位等方面进行预测和分析。结果:家蝇黏蛋白mucin-46基因的cDNA序列具有完整的开放阅读框(ORF),全长1 383 bp,编码460个氨基酸;其编码的蛋白质理论分子量为46.42 kDa,等电点4.13;无信号肽及跨膜区,属于亲水性蛋白,具有4个几丁质结合功能域,含有4个糖基化位点及多个蛋白磷酸化作用位点;二级结构β折叠(E)和无规则卷曲(L)的比例是14.13∶85.87,没有α螺旋(H)结构类型;主要分布于细胞核。结论:应用生物信息学方法从家蝇cDNA文库中筛选出了家蝇黏蛋白mucin-46基因序列并预测了其结构及功能等生物学信息,为进一步研究家蝇围食膜蛋白的功能奠定了一定的基础。
- 裘学丽国果吴沁怡赵学军付萍张勇吴建伟
- 关键词：家蝇黏蛋白
- 家蝇泛素结合酶基因的生物信息学分析被引量：6
- 2014年
- 利用EST测序技术从家蝇幼虫cDNA文库中获得家蝇泛素结合酶基因(MD-E2)cDNA序列,采用NCBI、ExPASY中的相关工具,对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、疏水性、信号肽、二级结构和亚细胞定位等方面进行预测和分析,MEGA软件构建了进化树。结果表明,家蝇泛素结合酶基因的cDNA序列具有完整的ORF框,全长480 bp,一共编码159个氨基酸。其编码的蛋白质理论分子量为18.117 9 kD,等电点8.64,无信号肽及跨膜区,属于亲水性蛋白,具有泛素结合酶家族的活性位点(FHPNVYPSGTVCLSLL),主要分布于细胞核;二级结构以无规则卷曲为主,β折叠较少。
- 国果吴沁怡吴建伟赵学军付萍张勇
- 关键词：家蝇泛素结合酶生物信息学
- 钙离子强化NLRP3炎症小体引起的神经母细胞瘤细胞氧化应激研究被引量：3
- 2016年
- 目的：通过钙离子络合剂BAPTA-AM对抗过氧化氢诱导的神经母细胞瘤细胞氧化应激反应、探讨钙离子对 NLRP3炎症小体介导的细胞变性的影响作用。方法用过氧化氢处理SHSY5Y细胞以制作细胞氧化应激模型，然后用钙离子载体A23187或钙离子络合剂BAPTA-AM处理细胞模型；细胞实验分为4组：单纯过氧化氢处理组、过氧化氢加钙离子载体A23187处理组、过氧化氢加A23187再加BAPTA-AM处理组以及对照组；再分别用Western Blot 分别检测上述4组细胞NLRP3蛋白，用ELISA方法分别检测上述4组细胞的半胱天冬酶（ Caspase-1）和IL-1β蛋白。结果单纯用过氧化氢处理后，细胞中NLRP3表达明显增加（P＜0．05）；加用A23187处理后，细胞蛋白NLRP3继续增加；Caspase-1和IL-1β表达也有显著增加，分别达到（57．1±19．2） pmol／L 和（484．2±49．5）pg／ml，与对照组比较[Caspase-1：（26．8±12．9）pmol／L；IL-1β：（326．9±52．1）pg／ml]差异有统计学意义（P＜0．05， P＜0．01）。再加用高效钙离子络合剂BAPTA-AM阻抑后，细胞蛋白NLRP3、Caspase-1和IL-1β均明显减少。结论钙超载很可能会强化过氧化氢诱导的细胞氧化应激、并产生由NLRP3炎症小体介导的细胞变性作用。
- 柏华赵学军张启芳余德军
- 关键词：过氧化氢半胱天冬酶钙离子
- 家蝇CCTζ基因的cDNA克隆、表达及表达模式研究
- 目的:从家蝇的EST测序数据库中筛选获得家蝇的CCT(chaperonin containing t-complex polypeptide)基因MD-CCTζ,上传Gen Bank分析分子特性后,进行c DNA克隆、表...
- 赵学军
- 关键词：家蝇CCT分子特性克隆表达
