赵巧莲
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 隐孢子虫Gal/GalNAc特异性凝集素P30基因的克隆及生物信息学分析被引量：1
- 2009年
- 目的克隆隐孢子虫Gal/GalNAc特异性凝集素P30基因并测序,对其进行生物信息学分析。方法采用聚合酶链(PCR)技术,从微小隐孢子虫基因组中扩增P30基因,然后将其克隆入pMD18-T载体,转化后挑取阳性克隆进行酶切和测序鉴定,并对获得的P30基因进行生物信息学分析。结果PCR扩增得到特异的微小隐孢子虫P30基因,测得的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与GenBank上提交的序列同源性分别为98%～100%和99%～100%。结论成功克隆出序列正确的微小隐孢子虫P30基因,预测的P30蛋白具有9个潜在的抗原表位,为其相关研究奠定了基础。
- 赵巧莲黄慧聪潘长旺梁韶晖南存标
- 关键词：隐孢子虫P30基因生物信息学分析
- 一种新的广州管圆线虫候选诊断抗原基因的克隆、表达及初步鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的克隆广州管圆线虫Ⅴ期幼虫候选免疫诊断抗原基因,进行体外表达及免疫学鉴定。方法根据本室构建的广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA文库的免疫筛选结果 ,选择文库中表达具有免疫反应性Ac11蛋白基因,进行生物信息学(在线Blast)分析,PCR扩增后克隆入pET28a(+)载体中,进行诱导表达及免疫学鉴定。结果推断Ac11基因为亚硫酸盐氧化酶基因。构建的重组质粒pET28a(+)-Ac11经IPTG透导,表达以包涵体形式存在的重组融合蛋白,分子质量单位约为30 kd。Western blot显示纯化的重组蛋白具有良好的免疫反应性。结论制备了具有良好免疫反应性的广州管圆线虫Ⅴ期幼虫亚硫酸盐氧化酶重组融合蛋白,为广州管圆线虫病的免疫诊断研究奠定了基础。
- 王寒刘文权赵巧莲谭峰潘长旺梁韶晖
- 关键词：广州管圆线虫克隆纯化免疫印迹
- 广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA文库的构建及免疫学筛选被引量：3
- 2010年
- 目的构建广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA文库,免疫学筛选抗原基因。方法提取广州管圆线虫Ⅴ期幼虫总RNA,用Clontech公司的SMARTTMcDNA文库构建试剂盒构建未扩增文库,检测未扩增文库滴度和重组率后,进行文库扩增。用大鼠感染血清作免疫探针筛选文库,PCR扩增外源基因插入片段并测序,用生物信息学软件进行同源性比对,推导氨基酸序列,预测其理化性质。结果成功构建了广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA文库,免疫学筛选获得11个阳性克隆,对测序的9个阳性克隆进行初步分析,1个与广州管圆线虫Ⅴ期幼虫的1个EST同源性为99%,6个(有2个为同一克隆)与秀丽隐杆线虫和新杆状线虫均有不同程度的同源性,最高达91%。共有7个阳性克隆存在完整的开放阅读框。结论从广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA文库中初步筛选出7个有诊断意义的抗原基因,为其相关研究奠定了基础。
- 赵巧莲马雪莲王寒谭峰潘长旺梁韶晖
- 关键词：广州管圆线虫CDNA文库免疫学筛选
- 隐孢子虫Gal/GalNAc特异性凝集素p30原核表达系统的构建及鉴定
- 2010年
- 目的获取隐孢子虫Gal/Gal NAc特异性凝集素p30基因,并构建原核表达系统,获得相应的重组蛋白。方法采用聚合酶链反应(PCR)技术,从微小隐孢子虫基因组中扩增出p30基因,然后将其克隆入pMD18-T载体,转化后挑取阳性克隆进行酶切和测序鉴定,并进行生物信息学分析及预测。再将亚克隆与表达载体PET-28a(+)分别酶切并连接,经IPTG诱导表达,表达产物用Ni-NTA亲和层析法纯化,SDS-PAGE和Western blotting检测表达效果。结果PCR扩增得到特异的微小隐孢子虫Gal/Gal NAc特异性凝集素p30基因,测得的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与GenBank上提交的序列同源性分别为98%～100%和99%～100%,理论等电点和分子量分别为6.4854和31842Da,并存在9个潜在的抗原表位。经酶切、测序结果表明质粒已导入Rosetta。SDS-PAGE和Western blotting证实重组菌成功表达融合蛋白。结论成功构建微小隐孢子虫Gal/Gal NAc特异性凝集素p30原核表达系统。
- 黄慧聪赵巧莲谭峰潘长旺
- 关键词：隐孢子虫P30基因原核表达
