辛舒
- 作品数：17 被引量：21H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省青年科研基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学水利工程更多>>
- 乙型脑炎病毒可视化分型基因芯片的制备被引量：2
- 2014年
- 目的:制备乙型脑炎病毒(JEV)可视化分型基因芯片。方法:根据JEV的基因组序列,应用生物学软件设计JEV分型引物及探针,制备其可视化分型基因芯片;用生物素标记的引物PCR扩增目的片段,并与固定于玻片上的探针杂交,加入链霉亲和素标记的纳米金,银增强实现可视化;进行特异性、灵敏性及重复性试验。结果:探针特异地与相应的标记目的基因片段杂交,并在芯片上呈现较强的阳性杂交信号;2号探针能特异性检出JEV,3、4号探针可分别对Ⅰ型和Ⅲ型JEV进行分型;芯片对JEV质粒检测的灵敏度达105拷贝/mL;以蓝耳病病毒等5种病毒为对照,芯片只对JEV响应,具有特异性;制备的基因芯片具有批间、批内重复性。结论:制备的基因芯片具有高特异性、灵敏性及重复性,可以快速、准确、高通量地对JEV进行可视化分型检测。
- 薛斐辛舒田宇飞孙文超温树波阎富龙盛媛王茂鹏朱羿龙田明尧金宁一
- 关键词：乙型脑炎病毒基因型基因芯片可视化
- 基孔肯亚病毒和辛德毕斯病毒可视化检测基因芯片研究
- 研究背景:基孔肯雅病毒(Chikungunya Virus,CHIKV)和辛德毕斯病毒(Sindbis Virus,SINV)是甲病毒属单链RNA病毒,经蚊虫传播,在世界范围内广泛分布,有致病快,传播迅速等特点,其流行严...
- 薛斐田明尧辛舒曹佳嫒孙文超金宁一
- 关键词：基孔肯亚病毒辛德毕斯病毒可视化
- 表达基因Ⅶ型新城疫病毒F蛋白的重组鸡痘病毒的构建和筛选被引量：1
- 2015年
- 为了构建并筛选表达新城疫病毒(NDV)F蛋白的重组鸡痘病毒(rFPV-F),通过PCR扩增F基因,克隆至pMD18-T Simple载体,进行DNA序列分析和遗传进化关系分析。将测序正确的F基因克隆至笔者所在实验室自行构建的新型鸡痘病毒穿梭载体pTS2GFPV150中,获得重组质粒pTS2GFPV150-F。然后将其与鸡痘病毒FPV282E4株共转染鸡胚成纤维细胞进行同源重组,挑取表达增强型绿色荧光蛋白的噬斑,经多轮筛选获得重组病毒rFPV-F,应用PCR、RT-PCR、Western-blot等方法对重组鸡痘病毒进行鉴定。结果显示,成功获得NDV F基因及重组F基因的鸡痘病毒rFPV-F,并证实F基因已被整合到鸡痘病毒基因组中,且在感染细胞内被成功表达。本研究成功获得了1株表达NDV F基因的重组鸡痘病毒,为下一步开展动物体内免疫研究奠定了基础。
- 辛舒田明尧曹佳媛薛斐杜寿文谭鹏肖朋朋陈兴郭海宁金宁一
- 关键词：新城疫病毒F蛋白同源重组
- 3种常见呼吸道病毒检测基因芯片的制备
- 崔鹤馨辛舒曹佳嫒田明尧金宁一
- 关键词：鼻病毒呼吸道合胞病毒腺病毒巢式PCR基因芯片
- 人干扰素诱导跨膜蛋白基因实时荧光定量PCR检测方法的建立
- 研究背景:人干扰素诱导跨膜蛋白(Interferon induced transmembrane protein,IFITM)基因家族包括IFITM1,IFITM2,IFITM3和IFITMS,其中IFITM1,2,3在...
- 袁森辛舒曹佳嫒薛斐田明尧金宁一
- 关键词：实时荧光定量PCR
- HBc嵌合PRRSV GP5 CLP候选疫苗的构建及其免疫研究
- 目前,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在全球范围内流行,基因型表现出高度可变性,对疾病的防控产生了巨大的阻碍。现阶段对PRRS的防控主要采取疫苗接种的方式,但存在一定的局限性,不能对猪群提供全面持久的保护,因此积极发...
- 曹佳媛田明尧辛舒崔卓栋金宁一
- 基孔肯雅病毒和辛德毕斯病毒可视化基因芯片与荧光基因芯片的建立被引量：1
- 2014年
- 根据GenBank中收录的基孔肯雅病毒和辛德毕斯病毒E蛋白基因序列,设计及筛选针对2种病毒的寡核苷酸探针及引物,制备基孔肯雅病毒与辛德毕斯病毒可视化基因芯片与荧光基因芯片,对芯片的灵敏性、特异性进行了验证,并将可视化基因芯片、荧光基因芯片进行灵敏性比较.结果显示,制备的两种基因芯片都能检测到基孔肯雅病毒和辛德毕斯病毒特异性杂交信号.可视化基因芯片、荧光基因芯片检测两种病毒质粒的灵敏度达到9.1×103copies/mL,6.8×101copies/mL和9.1×104copies/mL,6.8×103copies/mL,与普通PCR比较差异显著.荧光基因芯片灵敏度是PCR方法的10倍,可视化基因芯片是荧光基因芯片灵敏度的100倍.模拟病毒检测过程特异性检验证明,可视化基因芯片都具有良好的特异性.本试验建立了基孔肯雅病毒与辛德毕斯病毒两种特异的可视化和荧光基因芯片检测方法,两种方法灵敏度高、特异性强,适用于基孔肯雅病毒与辛德毕斯病毒的流行病学调查和种特异性鉴定.
- 薛斐田明尧辛舒任静强孙文超阎富龙温树波鲁会军田宇飞金宁一
- 关键词：基孔肯雅病毒辛德毕斯病毒基因芯片可视化
- 重组痘苗病毒rVTT-JEVE理化特性研究被引量：3
- 2014年
- 目的痘苗病毒作为疫苗载体具有接种途径简单、高滴度、低成本等优点,重组痘苗病毒投入使用之前进行理化特性试验,对重组痘苗病毒的生产、运输和保存有一定重要意义。方法将重组痘苗病毒rVTT-JEVE作热、酸、碱、乙醚、氯仿、胰蛋白酶、超声波以及紫外线处理,然后接种到BHK-21细胞上,观察rVTT-JEVE毒价的变化,分析理化因素对rVTT-JEVE的影响。结果在pH3～9范围内,酸碱度变化不会引起rVTT-JEVE毒价的显著变化。rVTT-JEVE经50℃处理60min、30min和60℃处理15min可被灭活；对5%的氯仿敏感；经终浓度0.5%的胰蛋白酶37℃作用1h,病毒毒价降低2个滴度；对25%的乙醚不敏感；经40KHz超声波处理60min和80KHz处理30min即可灭活；30W紫外灯垂直距离10cm照射15min、30cm照射30min即可灭活。结论 rVTT-JEVE耐热、酸、碱、乙醚、氯仿及胰蛋白酶,对超声波、紫外线较敏感。
- 肖朋朋刘昊阎富龙陈智飞朱羿龙辛舒王茂鹏靖杰鲁会军金宁一
- 以乙型肝炎病毒核心蛋白为载体的PRRSV病毒样颗粒疫苗的构建被引量：6
- 2015年
- 为采用乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)为载体,构建含美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5糖基化蛋白抗原表位的HBc-GP5病毒样颗粒(VLPs)疫苗,对HBc序列进行密码子优化,将其克隆至pET-28a(+)载体中,获得质粒pEO-NEW。在HBc刺突顶端的免疫显性区插入优化后的GP5序列,获得重组表达质粒pEO-LEORF5,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG 22℃诱导表达。利用SDS-PAGE和Western-blot验证融合蛋白pEO-LEORF5的表达。超声破碎后利用蔗糖密度梯度离心对融合蛋白进行纯化,最后用透射电镜观察VLPs的形成情况。结果表明,重组表达质粒pEO-LEORF5构建正确。表达的融合蛋白的分子质量为32ku,以包涵体和可溶性两种形式表达。经浓缩纯化后融合蛋白纯度可达67%,且能自主装配为VLPs。本试验成功构建出新型HBc-GP5VLPs候选疫苗,为研发新型PRRS疫苗提供了新思路。
- 曹佳媛田明尧辛舒崔卓栋李一权曹亮张艳芳韩继成郭海宁金宁一
- 关键词：乙型肝炎病毒核心蛋白猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 新城疫病毒NP和P基因辅助质粒的构建及鉴定被引量：6
- 2014年
- 目的构建新城疫病毒JL02/2000株P和NP基因真核表达质粒,并在BHK-21细胞中表达,为该病毒的反向遗传操作系统的建立奠定了基础。方法根据新城疫病毒(JL02/2000毒株)的全基因组中的NP、P基因分别设计引物,应用RT-PCR方法扩增NP基因和P基因,将扩增的NP基因和P基因片段连接到pMD18-T载体上,限制性内切酶EcoRⅠ和XbaⅠ酶切鉴定确认后回收目的条带,分别插入到真核表达载体pCI上,经测序确认pCI-NP、pCI-P辅助质粒的构建。将pCI-NP、pCI-P转染BHK-21细胞,两次换液,72h后回收细胞,经RT-PCR检测NP和P基因片段。结果构建的辅助质粒pCI-NP和pCI-P经双酶切和测序鉴定到目的片段。pCI-NP、pCI-P转染后,RT-PCR检测到NP和P基因片段。结论新城疫病毒pCI-NP、pCI-P辅助质粒构建成功,pCI-NP、pCI-P可在BHK-21细胞中表达,为该病毒的反向遗传操作系统的建立奠定了基础。
- 陈兴阎富龙徐一鸣赵权肖朋朋郭海宁靖杰辛舒鲁会军金宁一
- 关键词：新城疫病毒NP基因P基因
