郝巧玲
- 作品数：44 被引量：255H指数：9
- 供职机构：华中科技大学同济医学院公共卫生学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学环境科学与工程更多>>
- 五氯酚降解菌的驯化、筛选及其降解条件的研究
- 2010年
- 目的驯化、筛选降解五氯酚的高效菌,并对其生长特性和降解条件进行研究。方法采用活性污泥曝气与密度梯度驯化方法,以五氯酚为唯一碳源,定时定量逐步提高五氯酚浓度,连续驯化8周。将平板涂布分离纯化的细菌进行降解试验,筛选降解优势菌,探讨其生长的适宜温度、不同渗透压下的生长特点和降解五氯酚的适宜条件,并根据形态和生理生化特征进行菌种的初步鉴定。结果分离出3株五氯酚降解菌,其中1株对五氯酚48h的降解率为98.6%,且在温度30℃、pH6.0、五氯酚初浓度0.2～0.4g/L的条件下,降解效果最好。该菌在30℃生长最快,为耐盐菌,初步鉴定为醋杆菌属。结论通过活性污泥曝气与密度梯度驯化法可获得五氯酚高效降解菌,并取得良好的降解效果。
- 郭莉明张舒赵金辉曾欣郝巧玲罗启芳王琳
- 关键词：生物降解五氯酚驯化降解菌
- DNA切除修复标志物在肺癌、食管癌组织中的表达被引量：6
- 2003年
- [目的 ]研究切除修复中切除修复鼠缺陷交叉互补基因 2 (ERCC2 )蛋白、尿嘧啶DNA糖基化酶 (UDG)、细胞增殖核抗原 (PCNA)在肺癌和食管癌组织中的表达水平差异。 [方法 ]通过免疫组织化学和原位杂交方法研究三种生物标志物在不同部位的肿瘤组织和非肿瘤组织之间的表达水平进行比较。 [结果 ]ERCC2蛋白和mRNA、UDG蛋白在肺和食管良性病变中的表达水平均明显高于其癌和癌周组织。UDGmRNA水平在食管良性病变组织中明显高于癌和癌周组织 ,在肺良性病变、癌和癌周组织中无显著差异。PCNA蛋白和mRNA在肺和食管癌和癌周组织中的表达水平均明显高于良性病变组织。三种标志物蛋白和mRNA表达水平在癌组织和癌周正常组织之间均无明显差异。 [结论 ]ERCC2、UDG表达水平在良性病变组织中明显高于肿瘤组织、PCNA表达水平在肿瘤组织中明显高于良性病变组织。
- 吕斌张霞周晟郝巧玲周宜开
- 关键词：DNA损伤切除修复肺癌食管癌生物标志物细胞增殖核抗原
- Ephrin-A1、Ephrin-B1融合蛋白的构建、表达和活性测定
- 2005年
- 目的克隆并合成Eph受体的两个主要配体ephrinA1和ephrinB1的融合蛋白。方法利用RTPCR技术,分别扩增了ephrinA1、ephrinB1胞外序列和小鼠IgG2b的Fc序列,将其连接后,插入pAlterMax表达载体,得到两个重组子pAlterMaxephrinA1Fc和pAlterMaxephrinB1Fc,经序列测定,确认无突变产生后转染至293T细胞,使之表达分泌型ephrinA1Fc和ephrinB1Fc可溶性融合蛋白,并利用蛋白A琼脂糖凝胶纯化。利用免疫沉淀和Westernblot检测了ephrinA1Fc和ephrinB1Fc的相应受体的活性。结果EphrinA1和ephrinB1融合蛋白可以成功刺激其相应的Eph受体,使之发生磷酸化。结论制备得到的两个融合蛋白具有相应的生物活性,为进一步研究Eph受体酪氨酸激酶家族的功能打下了基础。
- 张合喜程晋鹏王友洁郝巧玲
- 关键词：融合蛋白
- 错配杂交化学发光法定量检测p16基因过甲基化被引量：9
- 2005年
- 目的建立一种基于错配杂交化学发光检测p16基因启动子区过甲基化的定量分析方法.方法用亚硫酸氢钠修饰基因组DNA,所有未甲基化的胞嘧啶都被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不发生变化.设计合成1对不含CpG位点的引物,同时扩增甲基化或非甲基化目的DNA片段,用2条分别与甲基化及非甲基化CpG位点互补的寡核苷酸探针与扩增产物进行杂交及化学发光检测,通过探针杂交信号强度比确定样品DNA中甲基化的p16基因的比例.结果错配杂交化学发光法具有较好的精密度(CV=5.2%～6.4%)和灵敏度(2.5×10-4pmol),检测已知混合样品的p16基因甲基化率分别为0%、23%、52 %、70% 及93%,与实际结果一致.结论本研究建立的错配杂交化学发光法是一种检测快速、操作简便的p16基因甲基化的定量检测方法.
- 姚群峰宁勇郝巧玲张利平周宜开
- 关键词：P16基因甲基化
- 顺铂对DNA切除修复生物标记物表达影响的研究
- 目的:DNA损伤剂顺铂(cisplatin)作用下,肺癌和食管癌细胞体内参与DNA切除修复的三种生物标记物的表达改变,着重研究DNA损伤对切除修复生物标记物表达的作用。方法利用肺腺癌A549和食管癌EC9706细胞株,结...
- 吕斌张霞郝巧玲周宜开
- 文献传递
- 利用微量渗透与化学发光检测生物体内内源性过氧化亚硝酸的生成
- 一氧化氮除了能够发挥它的正常生理功能以外,还和一些细胞与组织损伤相关联。现有的证据表明,一氧化氮的损伤作用应该主要归因于过氧化亚硝酸的产生。但是由于过氧化亚硝酸检测起来非常困难,所以,对于这个推论,直接的证据并不多。在本...
- 戴康吕斌郝巧玲周宜开
- 关键词：一氧化氮化学发光
- 文献传递
- 一种快速定量检测p16基因甲基化方法的建立
- 2005年
- 目的建立一种基于错配杂交-化学发光检测的p16基因启动子区过甲基化的定量分析方法。方法用亚硫酸氢钠修饰基因组DNA,所有未甲基化的胞嘧啶都被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不发生变化。设计合成一对不含CpG位点的引物同时扩增甲基化或非甲基化目的DNA片段,用两根分别与甲基化及非甲基化CpG位点互补的寡核苷酸探针与扩增产物进行杂交,化学发光检测,通过两根探针的杂交信号强度之比确定样品DNA中甲基化的p16基因的比例。结果检测结果与肿瘤细胞DNA样品中甲基化的p16基因的量成正比,而且与其表达水平呈逆相关。结论与现有方法相比,本法是一种检测快速、操作简便的p16基因甲基化的定量检测方法。
- 姚群峰郝巧玲邹立君张利平徐顺清周宜开
- 关键词：P16基因甲基化化学发光
- 莲房原花青素对乙醇诱导肝细胞DNA损伤的拮抗作用被引量：7
- 2006年
- [目的]研究莲房原花青素(LSPC)对乙醇诱导的人胚肝L-02细胞株DNA损伤的拮抗作用。[方法]观察5、 10、25 mg/L的LSPC与200 mmol/L乙醇共同作用于L-02肝细胞24 h后,对细胞生存率,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量,DNA损伤修复酶:[切除修复鼠缺陷交叉互补蛋白1(ERCC1)、O6- 甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)、错配修复hMSH2基因、DNA依赖的蛋白激酶复合物(DNA-PKcs)]表达水平等方面的差异进行比较。[结果]与乙醇组相比,5、10 mg/L的LSPC使细胞的生存率分别由73．14%上升到84．79％和90．52％,细胞SOD、CAT、GSH含量增加(P<0．01),MDA含量减少(P<0．01);有效降低细胞DNA损伤程度(P<0．05)。5 mg/L的 LSPC可显著增加乙醇处理细胞中ERCC1、DNA-PKcs、hMSH2的表达(P<0．01),但对MGMT的表达无影响(P>0．05), 10、25 mg/L的LSPC与乙醇组比较,所有4种DNA损伤修复酶的表达均无明显改变。[结论]适量的LSPC可拮抗乙醇诱导的L-02肝细胞的DNA损伤作用。
- 唐瑛李华文唐忠志石丹张江华郝巧玲吕斌
- 关键词：原花青素肝细胞株DNA损伤
- 核苷酸切除修复基因XPB反义RNA表达质粒的构建及其功能的初步研究被引量：3
- 2003年
- 背景与目的:核苷酸切除修复机制是细胞修复损伤DNA的重要途径,肿瘤细胞的耐药常伴随DNA损伤修复基因表达增强,采取反义策略降低细胞的DNA损伤修复能力可以增加肿瘤细胞的药物敏感性。本研究拟构建能在哺乳动物细胞中表达XPB反义RNA的表达质粒pcDNA-XPB/AS(XPB:着色性干皮病B基因),并初步探讨其对肺癌细胞DNA损伤修复能力及抗肿瘤药物耐药性的影响。方法:采用RT-PCR技术扩增的XPBcDNA5'端一段69～520bp的序列被反向插入表达质粒pcDNA3.1/His。将该重组质粒瞬时转染肺癌A549细胞。单细胞凝胶电泳(SCGE)比较阿霉素诱导的转染前后细胞DNA损伤修复情况。MTT法检测转染前后细胞对阿霉素的敏感性。结果:酶切图谱分析和基因测序证实反义表达质粒构建成功。RT-PCR显示转染细胞XPBmRNA表达水平下降。以4.0μg/ml阿霉素诱导细胞DNA损伤,SCGE显示转染细胞修复DNA损伤能力受到抑制。MTT显示未转染细胞与转染细胞对阿霉素的敏感性存在差别,但无统计学意义。结论:构建的反义表达质粒能下调转染细胞XPBmRNA表达,抑制细胞DNA损伤修复能力,为进一步研究XPB基因功能奠定了基础。
- 周李承蒋易吴晓明郝巧玲任恕周宜开
- 关键词：药物敏感性肿瘤细胞
- 顺铂对A549细胞DNA修复酶MGMT和DNA-PKcs表达的影响被引量：7
- 2004年
- [目的]探讨在DNA损伤剂顺铂作用下 ,A549细胞内DNA修复基因六氧甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)和DNA依赖的蛋白激酶复合物催化亚单位 (DNA_PKcs)的表达变化。[方法]MTT法分析顺铂对A549细胞生存力的影响 ;彗星实验研究顺铂对DNA损伤的程度 ;RT_PCR分析不同顺铂作用时间修复酶mRNA水平的变化。[结果]顺铂对A549细胞的生长有明显的抑制作用 ,且为剂量依赖性。低浓度 (IC20 剂量 )顺铂作用下 ,DNA损伤程度的变化与作用时间成正比 ,且伴随MGMT和DNA_PKcs的表达上升。停止作用后 ,DNA损伤程度减轻 ,修复基因的表达也逐渐恢复至正常水平。
- 张霞吕斌郝巧玲周宜开
- 关键词：顺铂A549细胞DNA修复酶MGMTDNA-PKCSRT-PCR法
