郭丽媛
- 作品数：15 被引量：28H指数：4
- 供职机构：烟台毓璜顶医院更多>>
- 发文基金：重庆市教委科研基金重庆市科技攻关计划重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 健康人群肿瘤坏死因子-α基因多态性的分析被引量：2
- 2010年
- 了解汉族健康人群中TNF-A基因多态性的分布,研究TNF-α表达与相关疾病之间的联系。采用PCR-限制性长度片段多态分析法检测140名重庆地区汉族健康人群的TNF-A-308,TNF-A-857位点基因多态性,计算其基因型和等位基因频率,结果显示TNF-A-308 G/G、G/A、A/A基因型的频率分别为89%、11%、1%,其等位基因的发生频率以G等位基因最常见(93%),其次为A等位基因(7%)。TNF-A-857 C/C、C/T、T/T基因型的频率分别为68%、36%、8%,其等位基因发生频率以C等位基因最常见(81%),其次为T等位基因(19%)。由结果可以得出重庆地区汉族健康人群TNF-A-308位点存在G/A多态性,TNF-A-857位点存在C/T多态性。
- 向瑜杨致邦李永国韩飞苏善平郭丽媛
- 关键词：基因多态性肿瘤坏死因子-Α
- 抗幽门螺杆菌特异性IgY研究进展
- 2007年
- 1 引言
1983年澳大利亚皇家佩思医院的病理科医师Warren和实习医师Marshall[1]首次成功分离出幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H·pylori),揭开了人类研究H·pylori与胃肠疾病关系的序幕.现已明确,H·pylori与慢性胃炎,消化性溃疡,胃腺癌和粘膜相关性淋巴样组织淋巴瘤密切相关.世界卫生组织已将H·pylori纳为第一类致癌因子,对H·pylori的预防与治疗已引起国内外学者的高度关注.临床上常用抗生素治疗H·pylori感染,但存在患者的依从性差,耐药菌株产生和反复感染等问题,寻找新的防治H·pylori感染的有效措施来替代抗生素疗法具有重要的现实意义.……
- 郭丽媛杨致邦
- 白介素-1和肿瘤坏死因子-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病的关系被引量：1
- 2009年
- 为探讨汉族人群中IL-1和TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病之间的关系,本文选取H.pylori阳性的38例慢性胃炎患者、30例十二指肠溃疡患者和70例健康对照者,采用PCR-限制性长度片段多态方法检测该人群中IL-1B-511、TNF-A-308、TNF-A-857位点多态性和IL-1受体拮抗剂基因多态性。结果显示在慢性胃炎组中TNF-A-308各基因型的频率与对照组比较,分布有差异,具有统计学意义(χ2=22.614,P<0.001)。在十二指肠溃疡组中TNF-A-857各基因型的频率与对照组比较,分布有差异,具有统计学意义(χ2=9.444,P=0.009)。再经Logistic回归分析,与携带TNF-A-308G/G者比较,携带TNF-A-308A/A者发生慢性胃炎的危险性为OR=22.70(95%CI:2.51-205.40);与携带TNF-A-857C/C者相比较,携带TNF-A-857T/T者发生十二指肠溃疡的危险性为OR=6.73(95%CI:1.71-26.53)。这些结果表明TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病的发生相关。为探讨汉族人群中IL-1和TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病之间的关系,本文选取H.pylori阳性的38例慢性胃炎患者、30例十二指肠溃疡患者和70例健康对照者,采用PCR-限制性长度片段多态方法检测该人群中IL-1B-511、TNF-A-308、TNF-A-857位点多态性和IL-1受体拮抗剂基因多态性。结果显示在慢性胃炎组中TNF-A-308各基因型的频率与对照组比较,分布有差异,具有统计学意义(χ2=22.614,P<0.001)。在十二指肠溃疡组中TNF-A-857各基因型的频率与对照组比较,分布有差异,具有统计学意义(χ2=9.444,P=0.009)。再经Logistic回归分析,与携带TNF-A-308G/G者比较,携带TNF-A-308A/A者发生慢性胃炎的危险性为OR=22.70(95%CI:2.51-205.40);与携带TNF-A-857C/C者相比较,携带TNF-A-857T/T者发生十二指肠溃疡的危险性为OR=6.73(95%CI:1.71-26.53)。这些结果表明TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病的发生相关。
- 向瑜杨致邦陈瀑范贵荣郭丽媛成凤
- 关键词：胃十二指肠疾病基因多态性幽门螺杆菌白细胞介素-1肿瘤坏死因子-Α
- 白细胞介素-1B和肿瘤坏死因子-α基因多态性与胃溃疡、胃癌易感性的相关性被引量：6
- 2009年
- 目的探讨人群中白细胞介素-1B(IL-1B)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因多态性与胃溃疡、胃癌易感性的相关性。方法选取幽门螺杆菌阳性的39例胃溃疡患者、35例胃癌患者和70名健康对照者,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析法检测该人群中IL-1B-511、TNF-A-308和TNF-A-857基因多态性。结果疾病组与对照组中IL-1B-511各基因型频率的分布差异无统计学意义。与对照组比较,胃溃疡组TNF-A-308各基因型的频率分布、TNF-A-857各基因型的频率分布以及胃癌组TNF-A-308各基因型的频率分布差异均有统计学意义。经Logistic回归分析,与携带TNF-A-308G/G者比较,携带TNF-A-308A/A者发生胃溃疡的危险性为OR=21.62(95%CI:2.07～226.13);与携带TNF-A-857C/C者比较,携带TNF-A-857T/T者发生胃溃疡的危险性为OR=5.37(95%CI:1.28～22.50);与携带TNF-A-308G/G者比较,携带TNF-A-308A/A者发生胃癌的危险性为OR=16.41(95%CI:1.62～116.55)。结论TNF-α基因多态性与胃溃疡、胃癌的易感性相关。
- 向瑜杨致邦陈瀑苏善平郭丽媛石海波周汛
- 关键词：白细胞介素-1B肿瘤坏死因子-Α基因多态性胃溃疡胃癌幽门螺杆菌
- 硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体的保护作用被引量：1
- 2009年
- 目的观察硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组细胞空泡毒素抗原(VacA)卵黄抗体(IgY)的保护作用,为制备能耐受胃酸和蛋白酶的IgY制剂奠定基础。方法诱导重组菌DH5α-vacA-pQE30,大量表达并纯化VacA重组蛋白,免疫洛曼母鸡,制备VacAIgY,并进行纯化。在不同pH值的IgY液中加入不同浓度的硫糖铝和不同浓度的胃蛋白酶,将含不同浓度硫糖铝的IgY反复冻融7次,将含30%硫糖铝的IgY室温放置1d～4周,ELISA法测定各实验组IgY的相对抗体活性(AT/AC)。结果在pH1.5、2.0和3.0的条件下,含30%～60%硫糖铝的IgY的相对抗体活性高于不加硫糖铝的IgY;在pH1.5条件下,60%硫糖铝可使IgY的相对抗体活性保持68.7%;在pH2.0和3.0条件下,50%和40%以上的硫糖铝几乎可完全保持IgY的相对抗体活性。在pH值为2.0和3.0时,正常胃蛋白酶浓度(0.02mg/ml)下,30%以上的硫糖铝均可有效保护IgY的相对抗体活性。30%以上的硫糖铝可增强IgY的抗冻融能力。室温放置4周后,含30%硫糖铝的IgY仍能保持80%以上的相对抗体活性。结论30%以上的硫糖铝可增强VacAIgY对低pH和胃蛋白酶的耐受能力及抗冻融能力,是较理想的IgY保护剂。
- 郭丽媛杨致邦田一玲黄伟韩飞范贵荣向瑜
- 关键词：幽门螺杆菌卵黄抗体硫糖铝抗体活性
- 幽门螺杆菌重组HpaA蛋白包涵体的切胶纯化分析被引量：4
- 2009年
- 目的探讨切胶纯化的最佳条件及纯化重组HpaA蛋白包涵体的可行性。方法克隆并表达pQE30-hpaA-DH5α工程菌,获得重组HpaA蛋白包涵体,使用切胶纯化法进行纯化,得到可溶性的重组HpaA蛋白。SDS-PAGE电泳后使用不同浓度、不同pH的醋酸钠溶液以及不同的染色时间染色电泳蛋白条带,分析切胶纯化的最佳条件。Western blot鉴定重组HpaA蛋白的抗原性。将重组蛋白免疫BALB/c小鼠,双向免疫扩散法检测血清抗HpaA抗体,鉴定重组蛋白的免疫原性。结果4 mol/L醋酸钠溶液、pH13.0、作用1 h为切胶纯化的最佳条件。经切胶纯化法获得的重组HpaA蛋白体积为6 ml,浓度为0.2942 mg/ml,蛋白量为1.7652 mg,得率为77.1%,West-ern blot显示该蛋白具有良好的抗原性。小鼠免疫血清能与重组HpaA蛋白反应,双扩效价大于等于1∶16,具有良好的免疫原性。结论切胶能够纯化重组HpaA蛋白包涵体,获得高纯度的可溶性重组HpaA蛋白,该蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,可用于进一步的科学研究。
- 范贵荣杨致邦栗俊杰郭丽媛向瑜韩飞
- 关键词：幽门螺旋杆菌粘附素
- 两种纯化幽门螺旋杆菌VacA-HpaA融合蛋白包涵体方法的比较被引量：5
- 2009年
- 目的比较Ni2+-NTA树脂和切胶纯化重组VacA-HpaA融合蛋白的纯化效果,探讨纯化蛋白包涵体的简易方法。方法克隆并表达重组pQE30-vacA-hpaA-DH5α工程菌,获得重组VacA-HpaA融合蛋白的包涵体,分别进行Ni2+-NTA树脂和切胶纯化,获得可溶性重组蛋白,Western blot鉴定其抗原性;用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清抗VacA、HpaA和VacA-HpaA的IgG水平,鉴定其免疫原性。结果两种方法均能纯化重组VacA-HpaA融合蛋白包涵体,得到可溶性的重组蛋白,Ni2+-NTA树脂纯化法获得的可溶性重组蛋白的纯度为95.8%,得率为63.5%;切胶纯化法获得可溶性重组蛋白的纯度为93.3%,得率为75.2%。Western blot鉴定纯化蛋白均具有良好的抗原性。ELISA法检测显示小鼠血清均能与重组蛋白VacA、HpaA和VacA-HpaA发生反应,两组IgG水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),均具有良好的免疫原性。结论切胶纯化重组VacA-HpaA融合蛋白包涵体是一种简单、经济的可行方法,有利于重组蛋白包涵体的纯化。
- 范贵荣杨致邦田一玲向瑜郭丽媛韩飞
- 关键词：幽门螺旋杆菌包涵体重组蛋白
- 幽门螺杆菌hp1188基因的克隆及高效表达
- 2009年
- 目的克隆并表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)hp1188基因,为研究幽门螺杆菌的黏附机制奠定基础。方法用PCR法从H.pylori标准株NCTC11637基因组DNA中扩增hp1188基因,克隆入原核表达载体pQE-30,构建重组原核表达质粒pQE30-hp1188,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析表达形式和表达量。表达蛋白经Ni2+-NTA树脂纯化,Western blot鉴定其反应原性。结果所构建的重组表达质粒pQE30-hp1188序列完整,插入的基因片段全长810bp,与GenBank中的hp1188基因同源性达98%。表达的重组蛋白相对分子质量约为30600,以1.0mmol/L IPTG诱导4h,表达量最高,破菌上清和沉淀中均有表达,可溶性蛋白表达量占全菌总蛋白的47%。重组蛋白纯化后纯度可达90%,并可被H.pylori患者血清识别。结论已成功克隆了H.pylori hp1188基因,并在大肠杆菌DH5α中获得高效表达。
- 韩飞杨致邦郭丽媛范贵荣向瑜
- 关键词：幽门螺杆菌克隆
- 抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体保护剂的探讨被引量：1
- 2009年
- 目的比较硫糖铝和多种糖类对抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体保护作用,为制备能耐受胃酸和蛋白酶的IgY制剂奠定基础。方法诱导DH5-αvacA-pQE30大量表达VacA蛋白,制备纯化的VacA IgY。在不同酸性的IgY液中加入同浓度各种保护剂,在相同酸性的IgY液中加入不同浓度的各种保护剂,然后加入不同浓度硫糖铝和正常胃内浓度或高浓度的胃蛋白酶,以ELISA法测定试验组IgY的剩余抗体活性（AR）。结果在pH2.0和3.0条件下,各保护剂均能提高IgY抗体活性,且硫糖铝对IgY抗体活性的保护作用优于糖类,在此条件下50%和40%硫糖铝均可完全保持IgY抗体活性。在pH2.0-3.0及正常或高胃蛋白酶浓度下,30%以上硫糖铝均可有效保护IgY的活性。结论低pH下硫糖铝对IgY抗体活性的保护作用优于糖类,且30%以上硫糖铝可增强VacA IgY对胃蛋白酶的耐受能力,是较理想的IgY保护剂。
- 郭丽媛杨致邦田一玲黄伟夏丽君范贵荣苏善平
- 关键词：幽门螺杆菌卵黄抗体硫糖铝抗体活性保护剂
- 幽门螺杆菌hp1188基因的原核表达及免疫学鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:构建高效表达Hp1188重组蛋白的基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,提纯重组蛋白,鉴定其抗原性和免疫原性。通过小鼠灌胃试验,验证Hp1188蛋白阻止幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)在胃内定植的作用。方法:构建重组质粒pQE30-hp1188,DNA测序分析正确后,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。表达蛋白用Ni2+-NTA树脂纯化,SDS-PAGE分析纯度,Bradford法测定浓度,Western blot鉴定对相应抗原的特异性,双向琼脂扩散实验检测效价。纯化重组蛋白和粘膜佐剂霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin subunit B,CTB)的混合液灌胃免疫接种预防组BALB/c小鼠,同时设阴性对照组和阳性对照组,免疫4周后用H.pylori NCTC 11637攻击3次,末次攻击4周后处死小鼠,进行胃组织H.pylori培养;H.pylori定植半定量、炎症程度及其炎症活动度的评分,以评价重组蛋白对胃组织H.pylori感染的免疫保护作用。结果:构建的重组表达质粒pQE30-hp1188经DNA测序证实序列完整,插入的基因片段全长810bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%,并在大肠杆菌DH5α中表达出分子量约为30kD大小的可溶性目的蛋白,表达量占全菌总量的47%,表达蛋白纯化后纯度达90%,浓度为1.0mg/ml。Western blot证实有良好抗原结合特异性,双向琼脂扩散效价为1∶16。预防组H.pylori感染率、定植及炎症程度评分均明显低于阳性对照组(P<0.05)。预防组不仅可以降低H.pylori的定植,而且能减轻H.pylori造成的小鼠胃组织的局部慢性炎症反应。结论:成功构建了基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,并高效表达了Hp1188重组蛋白,表达蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,在小鼠体内能阻止H.pylori的定植。
- 韩飞杨致邦郭丽媛范贵荣
- 关键词：幽门螺杆菌免疫原性
