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SIV H3N2亚型M1/NS1基因表达产物特性分析及其多抗的制备与应用: 猪流感病毒(Swine influenza virus，SIV)是正粘病毒科A型流感病毒属的成员，其基因组由8条分节段的负链RNA构成，共编码10种蛋白质。M1蛋白是病毒的主要结构蛋白，占流感蛋白总量的30～40％。M1...; 郭林; 关键词：猪流感病毒 H3N2亚型 NS1基因

抗伪狂犬病病毒gC抗体制备及其gC蛋白表达被引量：5: 2011年; 用纯化的重组蛋白His-gCN813制备抗PRV-gC抗体,并分析伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gC蛋白在真核细胞的表达情况。本研究以提取的病毒基因组为模板,PCR克隆PRV gC全长基因,构建gC真核表达质粒p3xFLAG-gC,在真核细胞中表达gC基因;纯化蛋白His-gCN813制备的抗体,Western blotting和间接免疫荧光(IFA)检测到p3xFLAG-gC转染真核细胞和PRV感染细胞中的gC蛋白。结果表明本试验成功构建了PRVgC基因真核表达系统,获得了特异性抗PRV gC抗体,重组gC真核表达质粒p3xFLAG-gC转染Vero细胞,表达的重组蛋白gC为72 ku,PRV感染Vero细胞,表达的gC蛋白为55、72和94 ku,主要定位在细胞浆,gC蛋白可以作为PRV感染的指示分子,为下一步研究PRV和宿主相互作用及PRV的复制奠定了基础。; 刘庆伟邱亚峰王晓杜郭林刘超沈阳李向东单虎马志永; 关键词：伪狂犬病病毒

H3N2亚型猪流感病毒NS2基因表达产物特性分析: 2014年; 采用RT-PCR方法克隆猪流感病毒H3N2亚型NS2全长基因,构建NS2基因原核表达质粒pET-28a-NS2和真核表达质粒p3xFLAG-CMVNS2,在大肠杆菌和真核细胞内表达NS2基因,并制备抗NS2多克隆抗体。用所制备的抗体分析p3xFLAG-CMV-NS2转染表达NS2蛋白和病毒感染细胞内的NS2蛋白。结果表明:经终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导后,重组蛋白NS2在大肠杆菌中得到表达。表达蛋白纯化后免疫Wistar大鼠制备抗NS2蛋白多克隆抗体,Western-blot分析表明抗NS2多克隆抗体可以识别大肠杆菌表达的NS2蛋白、转染Vero细胞表达的NS2蛋白和病毒感染细胞内的NS2蛋白。间接免疫荧光发现NS2蛋白主要定位于细胞质。本试验为进一步研究NS2蛋白在病毒复制过程中的生物学功能和猪流感病毒的复制机理奠定基础。; 郭林王晓杜刘庆伟沈阳邱亚峰李向东罗满林马志永; 关键词：猪流感病毒 NS2 克隆特性分析

伪狂犬病病毒Bartha株gC膜外区部分基因的原核表达及纯化被引量：1: 2009年; 构建伪狂犬病病毒(PRV)gC膜外区部分基因的重组质粒,原核表达并纯化目的蛋白。根据GenBank已发表的伪狂犬病病毒Bartha(PRV Ba)株gC基因的序列(NC EU719641),设计并合成了1对引物,以PRV Ba株为模板,PCR扩增出PRV gC膜外区部分基因片段;将该基因片段克隆到原核表达载体pET-28a上,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导,获得大小为35 ku的重组蛋白,命名为pET-gCN813。按照His-Bind纯化试剂盒说明书纯化表达产物,获得融合蛋白的纯化产物。; 刘庆伟邱亚峰王晓杜郭林刘超沈阳李向东单虎马志永; 关键词：伪狂犬病病毒 GC基因原核表达融合蛋白

免疫佐剂的研究进展被引量：8: 2009年; 佐剂在改进免疫应答、提高免疫效应中发挥着重要作用。佐剂可以改变正常的免疫机能,吸引大量的巨噬细胞以吞噬抗原;改变抗原的构型,使抗原物质降解并加强其免疫原性;延长抗原在组织内的储存时间,使抗原缓慢降解和缓释,并发挥免疫细胞间协同作用。就几种常用的疫苗佐剂及DNA疫苗佐剂的应用进行了综述。; 夏芳罗满林郭林刘健赵志权; 关键词：免疫佐剂疫苗免疫应答

H3N2亚型猪流感病毒M1基因克隆及表达特性分析被引量：1: 2009年; 从H3N2亚型猪流感病毒感染的鸡胚尿囊液中提取病毒基因组RNA,采用RT-PCR方法克隆M1全长基因,将M1基因亚克隆至pET-28a(+)表达载体中,构建重组表达质粒pET-28a-M1,将该重组质粒转化大肠杆菌BL21并经IPTG诱导表达。诱导产物经SDS-PAGE电泳分析显示重组蛋白M1获得大量表达,表达蛋白纯化后免疫Wistar大鼠制备多克隆抗体。Westernblotting检测结果表明制备的抗M1蛋白多克隆抗体可以识别大肠杆菌表达的M1蛋白和病毒感染细胞的病毒M1蛋白。构建M1基因真核重组质粒p3xFLAG-CMV-7.1-M1并转染Vero细胞,Western blotting检测表明抗M1蛋白多克隆抗体可以识别在Vero细胞中得到表达的M1蛋白,成功建立M1基因的真核表达系统。分析了病毒感染过程中M1蛋白的变化及其作为病毒复制指示分子的可能性。鼠源M1蛋白多克隆抗体的制备和M1基因真核重组表达质粒的构建,为进一步研究猪流感病毒的复制机理以及M1蛋白在病毒复制过程中的生物学功能奠定了基础。; 郭林王晓杜刘庆伟沈阳邱亚峰李向东罗满林马志永; 关键词：猪流感病毒克隆基因表达

抗猪伪狂犬病病毒gH抗体的制备及gH在感染细胞中表达分析: 2011年; 为检测伪狂犬病病毒(PRV)在体外细胞中糖蛋白H(gH)的表达情况,本研究构建原核表达重组质粒pET-gHN660,并在大肠杆菌中诱导表达重组蛋白,纯化的gH重组蛋白免疫实验动物制备抗PRVgH抗体,经westernblot和IFA检测到病毒感染细胞中gH蛋白的表达,病毒感染细胞后表达的gH蛋白大小为95ku,定位于细胞浆中,gH蛋白在病毒感染细胞4h可以检出,随PRV的复制gH蛋白表达增加,gH蛋白可以作为PRV复制的指示蛋白。本研究利用制备的抗体分析感染细胞中gH蛋白的表达情况,初步探讨感染细胞中PRV的复制,为PRV和宿主相互作用的研究奠定基础。; 刘庆伟邱亚峰王晓杜郭林刘超沈阳李向东单虎马志永; 关键词：伪狂犬病病毒 GH基因

猪流感病毒(A/swine/Jiangsu/2/2006(H3N2))NS1基因表达产物分析被引量：1: 2009年; 采用RT-PCR方法克隆猪流感病毒H3N2亚型NS1全长基因,构建NS1基因原核表达质粒pET-28a-NS1和真核表达质粒p3xFLAG-CMV-NS1,在大肠杆菌和真核细胞内表达NS1基因,制备抗NS1多克隆抗体。用所制备的抗体分析p3xFLAG-CMV-NS1转染表达NS1蛋白和病毒感染细胞内的NS1蛋白。经终浓度为1mmol/L的IPTG诱导后,重组蛋白NS1在大肠杆菌中得到表达。表达蛋白纯化后免疫Wistar大鼠制备抗NS1蛋白多克隆抗体,Western-blot分析表明抗NS1多克隆抗体可以识别大肠杆菌表达的NS1蛋白、转染Vero细胞表达的NS1蛋白和病毒感染细胞内的NS1蛋白。间接免疫荧光发现NS1蛋白主要定位于细胞核。结果显示,本试验成功构建了NS1基因原核和真核表达系统,获得了NS1特异性多克隆抗体,分析了NS1细胞定位,为进一步研究NS1蛋白在病毒复制过程中的生物学功能和猪流感病毒的复制机理奠定基础。; 郭林王晓杜刘庆伟沈阳邱亚峰李向东罗满林马志永; 关键词：猪流感病毒 NS1基因抗体制备

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郭林