陈克勤
- 作品数：9 被引量：63H指数：5
- 供职机构：诺和诺德(中国)研究发展中心更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 细胞因子对胰岛细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:观察肿瘤坏死因子α(TNFα)和干扰素γ(IFNγ)对大鼠胰岛细胞和小鼠βTC-3细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响。方法:应用TUNEL法检测高浓度TNFα和IFNγ培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTC-3细胞凋亡百分率,应用半定量RT-PCR(sQRT-PCR)检测培养后bcl-2、bax、c-myc、p53和fas mRNA的表达。结果:大鼠胰岛细胞经高浓度TNFα和IFNγ处理后,上清液中胰岛素浓度明显下降,由(169.69±1.62)mIU/L降为(136.1±1.44)mIU/L(P<0.01);凋亡细胞比例明显增加,由(10.25±1.71)%升为(17.25±1.71)%(P<0.01)。βTC-3细胞经高浓度TNFα和IFNγ处理后,上清液中胰岛素浓度明显下降,由(254.13±4.35)mIU/L降为(221.42±3.98)mIU/L(P<0.01);凋亡细胞比例明显增加,由(20.25±2.22)%升为(38.75±3.4)%(P<0.01)。大鼠胰岛细胞和βTC-3细胞经高浓度TNFα和IFNγ处理后,致凋亡基因bax、c-myc、fas mRNA表达明显增加(P<0.05);抗凋亡基因bcl-2 mRNA表达明显下降(P<0.05);bcl-2/bax mRNA表达比率明显下降(P<0.01);p53mRNA表达无明显改变(P>0.05)。结论:TNFα和IFNγ可能通过诱导胰岛细胞凋亡导致或加重糖尿病,其中bcl-2/bax mRNA表达比率变化可能起重要作用。
- 何庆刘铭于德民苏京王保平王晶陈克勤尹潍
- 关键词：胰岛细胞凋亡肿瘤坏死因子Α干扰素Γ基因表达
- 高浓度游离脂肪酸对胰岛细胞凋亡及相关基因表达的影响被引量：16
- 2004年
- 目的 :观察高浓度游离脂肪酸体外对胰岛细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响。方法 :应用TUNEL法检测高浓度游离脂肪酸培养后大鼠胰岛细胞和小鼠 βTc3细胞凋亡百分率 ,应用定量RT -PCR(QRT -PCR)检测培养后bcl-2、bax、c-myc、p53和fasmRNA的表达。结果 :高浓度游离脂肪酸使原代培养的大鼠胰岛细胞和βTc3的凋亡细胞比例明显增加。胰岛细胞凋亡过程中 ,诱导凋亡基因bax、c -myc、fas的mRNA表达水平明显升高 ,抵抗凋亡基因bcl-2mRNA表达水平明显下降 ,p53mRNA表达水平无明显改变。结论 :游离脂肪酸可能通过诱导胰岛细胞凋亡导致或加重糖尿病 。
- 何庆王保平刘铭苏京王晶陈克勤尹潍
- 关键词：游离脂肪酸胰岛细胞凋亡基因表达
- 抗凋亡基因bcl-2 cDNA表达型质粒的构建及序列分析被引量：2
- 2004年
- 目的 :克隆抗凋亡基因bcl-2,并构建其表达型质粒 ;进行序列分析 ,为基因转染作准备。方法 :应用PCR定向克隆技术 ,克隆SD大鼠鼠脑bcl-2全编码cDNA序列 ;应用双脱氧末端终止法进行重组质粒中bcl-2的cDNA序列分析 ;利用基因重组技术 ,将bcl-2全编码cDNA序列 ,导入pCMV -Tag -1表达型质粒。结果 :成功地克隆SD大鼠bcl-2全编码cDNA序列 ,并将其成功地导入pCMV -Tag -1表达型质粒 ;经序列分析 ,发现bcl-2全编码序列与GeneBank中的相应序列相比 ,有3个碱基出现差别 ,分别为171位a→g,233位a→c ,530位 g→a,均为同义突变。结论
- 何庆苏京刘铭王保平王晶陈克勤尹潍
- 关键词：克隆逆转录聚合酶链反应
- 高浓度葡萄糖对胰岛细胞凋亡及凋亡相关基因的影响被引量：14
- 2006年
- 目的:观察高浓度葡萄糖体外对胰岛细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响,探讨葡萄糖毒性及其分子机制。方法:应用TUNEL法检测高浓度葡萄糖培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞凋亡百分率;应用定量RT-PCR(QRT-PCR)检测培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞bcl-2和baxmRNA的表达;应用定量RT-PCR检测低剂量链脲佐菌素糖尿病大鼠胰岛bcl-2和baxmRNA的表达。结果:高浓度葡萄糖使原代培养的大鼠胰岛细胞和βTc-3的凋亡细胞比例明显增加;胰岛细胞凋亡过程中,诱导凋亡基因bax的mRNA表达水平明显升高,抵抗凋亡基因bcl-2mRNA表达水平明显下降,致使bcl-2/bax比率明显降低;对低剂量链脲佐菌素糖尿病大鼠胰岛凋亡相关基因QRT-PCR检测也显示同样的结果。结论:高浓度葡萄糖可能通过诱导胰岛细胞凋亡增加而加重糖尿病,其中bcl-2/baxmRNA表达比率变化可能起重要作用。
- 何庆刘铭苏京王保平王晶陈克勤尹潍
- 关键词：胰岛细胞葡萄糖细胞凋亡基因表达
- Bcl-x基因转录后剪切方式改变在大鼠胰岛细胞凋亡中的作用被引量：5
- 2002年
- 目的 探明 Bcl- x基因在大鼠胰岛细胞凋亡时剪切方式的变化及其该基因在胰岛细胞凋亡中的作用。方法 应用 TUNEL法检测长期高糖培养时大鼠胰岛细胞凋亡 ,应用半定量多重 RT- PCR(SQ- RT- PCR)检测了胰岛细胞凋亡时 Bcl- x基因 m RNA的表达变化情况 ;同时观察小剂量 STZ所致的糖尿病大鼠胰岛 Bcl- x基因 m RNA的表达变化。结果 2 5 .5 m M葡萄糖浓度体外培养 14天较 5 .5 m M和 11.1m M葡萄糖浓度培养 ,胰岛细胞凋亡百分率明显增加 ,分别为 31.5± 4 .5 % ,15 .4± 3.0 % ,17.4± 4 .8% ;P <0 .0 1。细胞凋亡百分率变化的同时伴有 Bcl- x基因转录后剪切方式的改变 ,表现为 Bcl- x S m RNA表达明显增加 ;低剂量 STZ所致的糖尿病大鼠胰岛 Bcl- x S m RNA表达明显增加 ,Bcl-x L与 Bcl- x S比率明显减少。结论 长期高糖可以诱导大鼠胰岛细胞凋亡 ,Bcl- x基因剪切方式的改变所致的 Bcl- x L/Bcl- x S比率的变化在高糖和
- 刘铭孙津红王凯王保平尹潍陈克勤
- 关键词：胰岛细胞BCL-X基因细胞凋亡病理
- 链脲佐菌素对胰岛细胞凋亡及相关基因表达的影响被引量：2
- 2004年
- 目的 :观察链脲佐菌素对胰岛细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响。方法 :应用放射免疫法检测了低剂量链脲佐菌素培养后大鼠胰岛细胞高糖刺激后上清液的胰岛素水平 ;应用TUNEL法检测低剂量链脲佐菌素培养后大鼠胰岛细胞凋亡百分率 ;应用定量RT -PCR(QRT -PCR)检测培养后bcl-2、baxmRNA的表达 ;应用定量RT -PCR检测低剂量链脲佐菌素糖尿病大鼠胰岛bcl-2、baxmRNA的表达。结果 :低剂量链脲佐菌素使原代培养的大鼠胰岛细胞胰岛素分泌功能明显下降 ;低剂量链脲佐菌素使大鼠胰岛细胞凋亡细胞比例明显增加 ,凋亡过程中 ,baxmRNA表达水平明显升高 ,bcl-2mRNA表达水平明显下降 ;对低剂量链脲佐菌素糖尿病大鼠胰岛凋亡相关基因QRT -PCR检测也显示同样的结果。结论 :低剂量链脲佐菌素可能通过诱导胰岛细胞凋亡导致糖尿病 ,其中bcl-2/baxmRNA表达比率变化可能起重要作用。
- 何庆苏京刘铭王保平王晶陈克勤尹潍
- 关键词：胰岛细胞链脲佐菌素细胞凋亡基因表达
- 抗凋亡基因bcl-2转染哺乳动物细胞的研究
- 2006年
- 目的:构建抗凋亡基因bcl-2的哺乳动物细胞表达型质粒并转染哺乳动物细胞293T细胞。方法:利用基因重组技术,将bcl-2全编码cDNA序列,导入pCMV-Tag1表达型质粒;应用磷酸钙共沉淀技术,将其转染293T细胞;并利用免疫沉淀和Westernblotting技术检测Bcl-2融合蛋白的表达。结果:bcl-2全编码cDNA序列成功导入pCMV-Tag1表达型质粒;在转染后的293T细胞成功地检测出bcl-2融合蛋白的表达,融合蛋白大小与预期完全一致。结论:该表达型质粒可以成功转染哺乳动物细胞,为对胰岛细胞的转染奠定了基础。
- 何庆苏京刘铭王保平王晶陈克勤尹潍
- 关键词：转染免疫印迹法
- 胰淀素对胰岛细胞凋亡及相关基因表达的影响被引量：11
- 2004年
- 目的 :观察胰淀素对胰岛细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响。方法 :应用放免法检测胰淀素培养后大鼠胰岛细胞和胰岛 β细胞瘤细胞系 (βTc3)高糖刺激后上清液的胰岛素水平 ;应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记 (TUNEL)技术检测胰淀素培养后大鼠胰岛细胞和小鼠 βTc3细胞凋亡百分率 ;应用定量RT -PCR(QRT -PCR)检测培养后bcl-2、baxmRNA的表达。结果 :胰淀素使原代培养的大鼠胰岛细胞和 βTC3胰岛素分泌功能明显下降 ,使原代培养的大鼠胰岛细胞和 βTC3的凋亡细胞比例明显增加 ;胰岛细胞凋亡过程中 ,诱导凋亡的基因baxmRNA表达水平明显升高 ,抵抗凋亡基因bcl-2mRNA表达水平明显下降。结论 :胰淀素可能通过诱导胰岛细胞凋亡导致或加重糖尿病 ,其中bcl-2/baxmRNA表达比率变化可能起重要作用。
- 何庆王保平刘铭朱铁虹苏京王晶陈克勤尹潍
- 关键词：胰淀素胰岛细胞凋亡基因表达淀粉样蛋白
- 长期高浓度葡萄糖对胰岛细胞凋亡和功能相关基因表达的影响被引量：16
- 2003年
- 目的 探明长期高浓度葡萄糖对体外胰岛细胞功能和凋亡相关基因表达的影响。方法应用放免法检测不同浓度葡萄糖培养后大鼠胰岛细胞和小鼠 βTc3细胞在葡萄糖刺激时培育上清液和细胞内的胰岛素水平 ;应用半定量多重RT PCR和Northern印迹法检测培养后IDX 1(Isletduodenalhomeobox 1) ,葡萄糖激酶 (GK ) ,葡萄糖转运子 2 (GLUT2 ) ,C/EBPβ和Bcl xmRNA的表达情况 ;应用TUNEL法检测培养后的细胞凋亡百分率。结果 ( 1)长期高浓度葡萄糖培养导致大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞对葡萄糖刺激的胰岛素分泌反应降低和细胞内胰岛素含量的减少 ;( 2 )高糖培养 14天可以使大鼠胰岛细胞IDX 1和GLUT2mRNA表达明显减少 (P <0 .0 5 ) ,C/EBPβmRNA表达明显增加 ,GKmRNA表达无明显变化 ;( 3 )高糖培养可以明显增加大鼠胰岛细胞和小鼠 βTc3细胞凋亡百分率 ;( 4 )大鼠胰岛细胞高糖培养 14天后Bcl xSmRNA水平明显增加 ,Bcl xLmRNA水平无明显变化 ,Bcl xL/Bcl xSmRNA比率明显减少 (P <0 .0 5 )。结论 ( 1)长期高糖培养可以诱导大鼠胰岛细胞和小鼠 βTc3细胞凋亡和功能缺陷 ;( 2 )IDX 1表达的变化在大鼠胰岛细胞功能缺陷中起重要作用 ;( 3 )大鼠胰岛细胞的Bcl xL/Bcl xS比率变化在高糖所致的胰岛细胞凋亡中起重要作用。
- 刘铭苏京孙津红何庆王晶王保平陈克勤尹潍
- 关键词：葡萄糖胰岛细胞凋亡基因表达
