韩科芳
- 作品数：9 被引量：35H指数：3
- 供职机构：河南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划河南省教育厅科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程农业科学生物学更多>>
- 内生枯草芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的纯化研究被引量：1
- 2013年
- 方法:采用硫酸铵盐析、乙醇沉淀和聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系法对β-甘露聚糖酶进行提纯。目的:对一株内生枯草芽孢杆菌UD-20产生的β-甘露聚糖酶进行分离与纯化。结果:硫酸铵盐析与乙醇沉淀法提纯出酶的回收率分别为15%和7.5%,纯化倍数分别为1.968和0.977;双水相法提纯β-甘露聚糖酶在最优的体系为PEG2000 22%(m/m)、(NH4)2SO416%(m/m)、NaCl 2%(m/m)条件下,酶收率高达97.16%,萃取率为99.26%,纯化倍数为2.820。结论:硫酸铵盐析与乙醇沉淀法提纯出酶的回收率很低,而双水相法提纯β-甘露聚糖酶效果较好,可用于进一步的精提纯。
- 张建新韩科芳赵杰曹金金邵亚萍赵念念
- 关键词：Β-甘露聚糖酶枯草芽孢杆菌双水相体系盐析
- β-甘露聚糖酶的研究进展被引量：15
- 2011年
- β-甘露聚糖酶属于半纤维素酶类,是一种广谱诱导型多功能酶,广泛存在于动植物和微生物中,其主要水解产物为甘露寡糖,在动物生产、饲料、食品、医药、石油开采及生物技术方面广泛应用。对β-甘露聚糖酶的来源、生产、纯化、分子特性、作用机制以及微生物诱变育种等方面的研究概况进行了综述,并对β-甘露聚糖酶的应用前景进行了分析。
- 徐扬刘起丽聂国兴韩科芳张建新
- 关键词：Β-甘露聚糖酶微生物生产分离纯化
- 内生菌产β-mannanase条件优化及底物特异性研究被引量：2
- 2013年
- 以产β-甘露聚糖酶的植物内生菌Bacillus subtilis UD-20为研究对象,通过对产酶条件优化得出最佳产酶方案为:魔芋精粉30 g/L,蛋白胨3 g/L,硝酸铵3 g/L,氯化钙3.0 mmol/L,氯化镁2.0 mmol/L,氯化钡0.2 mmol/L,2%的接种量发酵培养72 h,酶活高达213.6 U/mL,是优化前的2.4倍,通过补料发酵使酶活提高到275.1 U/mL,较补料前提高了34%。另外,静置培养也使酶活得到了很大提高。较低的Km(10.9 mg/mL)和较高Vmax(9 960.2 U/mL)显示该酶的具有较强的底物特异性,以葡甘露聚糖为底物时的酶活高达6 116.6 U/mL,是酶解槐豆胶的22.2倍,酶解瓜尔豆胶的28.2倍。
- 张建新张吨王海磊韩科芳赵杰聂国兴
- 关键词：内生菌Β-甘露聚糖酶葡甘露聚糖酶动力学
- 产β-甘露聚糖酶内生菌最适发酵条件的优化被引量：9
- 2012年
- 植物内生菌是一类种类丰富、生物学功能多样的微生物。试验研究将黄豆中筛选出的1株酶活力较高的枯草芽孢杆菌内生菌HD-1,在摇瓶发酵培养水平,对发酵pH值、温度、转速、接种量、发酵时间及培养基成分进行优化。结果表明,发酵最适培养条件为:温度35℃、pH值7.0、转速200 r/min、发酵72 h、接种量5%;发酵最适产酶培养基组成:魔芋粉3%、(NH4)2SO40.375%;最优的离子浓度分别为FeSO40.001%、NaCl 0.5%、MgSO40.01%,此时HD-1的产酶水平达到98.3 U/ml,约是初始酶活力的1.8倍,发酵罐验证试验得到酶活高达193.12 U/ml。
- 张建新韩科芳刘起丽胡文波赵丹丹赵杰
- 关键词：酶活力碳源氮源
- 内生枯草芽孢杆菌HD-1β-甘露聚糖酶基因的克隆及结构生物学分析被引量：3
- 2013年
- 采用PCR技术从一株内生枯草芽孢杆菌HD-1基因组DNA中扩增出β-甘露聚糖酶基因核苷酸编码序列.序列分析表明,该基因全长1 089bp,编码362个氨基酸和一个终止密码子,N端前27个氨基酸为其信号肽.该酶氨基酸序列与相同来源的β-甘露糖苷酶同源性最高达98.34%,具有ManB保守结构域,属于糖苷水解酶家族26的一员.通过对该酶分子三维结构的预测分析,该酶的催化域形成TIM桶状结构,Cys92和Cys112形成二硫键,它们之间的部分构成该酶的氧化还原反应的活性中心,Glu100和Glu292分别为该酶的酸碱催化位点和亲核催化位点.三维结构的分析为提高酶的催化活性的和功能方面的定向改造提供了依据.
- 张建新刘起丽胡文波聂国兴韩科芳赵杰
- 关键词：内生枯草芽孢杆菌Β-甘露聚糖酶
- 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌PCR诊断方法的建立与应用被引量：5
- 2013年
- 根据GenBank登录的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)血清1～14型的表面抗原蛋白D15和16SrRNA基因序列,设计2对特异性引物,分别扩增出637、431bp两条核苷酸片段,建立了APP的多重PCR检测方法。特异性结果表明,血清1、3、5a、8、10型能扩增出两条与预期大小的片段,而扩增的大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌、链球菌、葡萄球菌均成阴性。敏感性试验结果表明,最低检出浓度为50/μL。对临床分离的5株疑似APP菌株进行PCR,结果表明,其中4株为阳性,1株为阴性。提示,该方法的特异性和敏感性均良好。
- 张建新朱岩昆马金友赵杰余燕韩科芳
- 关键词：猪传染性胸膜肺炎RRNA
- 产β-甘露聚糖酶内生菌的诱变育种及产酶条件优化被引量：3
- 2014年
- 以刺槐豆内生菌Paenibacillus sp.CH-3为出发菌株,采用紫外-硫酸二乙酯-亚硝酸盐对其进行复合诱变,并对菌株的发酵条件进行了优化。结果表明:经过紫外线-硫酸二乙酯-亚硝酸盐复合诱变,获得一株高产β-甘露聚糖酶的突变菌株Paenibacillus sp.CH3-05,其酶活力为160.2U/mL,较出发菌株(42U/mL)提高了281.4%。其最佳发酵培养基为:酵母膏0.25%,魔芋粉3%,磷酸氢二铵0.25%,氯化钠0.1%,硫酸镁0.3%,磷酸氢二钾0.2%,CaCl22 mmol/L。最佳发酵条件为:初始pH 6.5,接种量2%,培养温度35℃,转速200 r/min,培养时间78 h,在该条件下测得酶活为233.5 U/mL,较出发菌株提高456%。
- 张建新赵杰陈泽田韩科芳曹宇聂国兴
- 关键词：内生菌Β-甘露聚糖酶诱变发酵条件
- 一株产β-甘露聚糖酶内生菌的筛选及酶学性质研究
- 本研究采用利用刚果红染色法从中富含甘露聚糖的刺槐种子中分离出1株产酶能力较高的内生菌株CH--3,其酶活力达42 U/mL。克隆并测定菌株CH-3的16S rDNA序列,采用BLAST软件在GeneBank进行16S r...
- 张建新赵丹丹韩科芳
- 文献传递
- 产β-mannanase内生菌的诱变育种和酶学特性研究被引量：3
- 2012年
- 以实验室筛选的产伊甘露聚糖酶的黄豆内生菌Bacillussubtilis HD-1（54．6U／mL）为出发菌株，分别采用紫外线，硫酸二乙酯，紫外线-光复活和紫外线．硫酸二乙酯对其进行诱变，结果表明，以紫外线-硫酸二乙酯复合诱变效果最好，获得-株高产伊甘露聚糖酶的突变菌株BacillussubtilisLID．20，酶活达89．5u／mL，比出发菌株提高了63．9D／01遗传性能稳定。该伊甘露聚糖酶的最适反应温度和pH分别为50℃和7．0，该酶在50℃以下，pH5．0-8．0之间稳定性较好，属于中性酶。亚铁离子和钴离子对酶有较强的激活作用，相对酶活分别提高了13．2％和31．7％，但锰离子对酶有强烈的抑制作用，相对酶活仅有对照组的55．6％；金属离子钾、钙、钴和钡都能增强酶热稳定性，其中钴离子的增强效果最为明显，残余酶活约是对照组的1．5倍。
- 张建新张吨王海磊胡文波韩科芳朱岩昆赵杰聂国兴
- 关键词：内生菌Β-甘露聚糖酶诱变
