黄伟坚
- 作品数：299 被引量：960H指数：15
- 供职机构：广西大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金广西壮族自治区科学研究与技术开发计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 猪肠病毒G型3C蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
- 2023年
- 为制备猪肠病毒G型(EV-G)非结构蛋白3C的多克隆抗体,本研究参考EV-G分离株CH/17GXQZ/2017的序列设计带有酶切位点的引物扩增3C全基因,通过RT-PCR扩增,将其克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组质粒pET-32a-EVG-3C。将重组质粒转化至BL21(DE3)细胞中,通过对诱导条件(诱导温度、IPTG浓度以及诱导时间)的筛选,获得重组3C蛋白的最优表达条件。将表达纯化后的3C蛋白通过皮下注射的方式免疫新西兰大白兔,制备3C蛋白多克隆抗体,通过间接ELISA测定效价,并利用间接免疫荧光试验及Western-blot进行验证。结果显示,表达的3C蛋白主要以包涵体的形式存在,相对分子质量约为38.8 ku;经间接ELISA方法测定,制备的EV-G兔抗效价达到1∶8192000;间接免疫荧光试验和Western-blot结果显示,制备的多克隆抗体能与EV-G特异性结合,具有良好的免疫原性和反应性。本研究为EV-G的诊断以及3C蛋白的功能研究提供了参考。
- 罗允燕黄诗婷曾德平洪大林米雪陈樱韦祖樟韦祖樟欧阳康
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 反向疫苗学被引量：4
- 2005年
- 反向疫苗学是利用生物信息学技术对微生物基因组序列进行分析,在不需要培养病原体的情况下,从大量的抗原中筛选出研制疫苗的侯选抗原。相对于传统疫苗学,它减少了鉴定疫苗抗原所需的时间和花费,并能提供新的解决方案。在传统方法研制疫苗失败的情况下,反向疫苗学的第一个例子就是鉴定B 群脑膜炎新抗原,并作为一种新的有效的疫苗抗原。相同的方法已开始应用于其它重要的人类病原。
- 韦祖樟黄伟坚卢桂娟尹业师
- 关键词：全基因组序列生物信息学B群脑膜炎
- 猪肠病毒G型的实时荧光定量PCR检测引物及其试剂盒
- 本发明公开了猪肠病毒G型的实时荧光定量PCR检测引物，包括上游引物qEV‑G‑F和下游引物qEV‑G‑R，它们分别具有序列表的SEQ.ID.NO.1和SEQ.ID.NO.2的碱基序列。据此，发明人建立了相应EV‑G实时荧...
- 欧阳康杨春杰刘雪婷程振孔米雪陈樱韦祖樟黄伟坚
- 文献传递
- 玉米花粉多糖对猪瘟免疫效果的研究被引量：12
- 2001年
- 本研究采用醇沉淀法从 350 g玉米花粉提取得粗提复合物 38.3 g。经用蒽酮反应、α萘酚反应、间苯二酚反应、碘化反应及高效液相色谱法鉴定 ,证实为多糖。用上述多糖作为免疫增强剂按剂量 50、 1 0 0、2 0 0 mg分别与猪瘟弱毒细胞冻干苗共同免疫猪 ,测定其免疫效果。结果表明 ,各剂量组的 IHA抗体效价均高于对照组 ;T细胞活性 E花环试验测得各剂量的活性 E花环百分率分别为 2 1 .84 %、2 5.4 6%、2 1 .92 % ,均高于对照组 1 5.91 % ;T淋巴细胞转化试验显示 ,各试验组的 T淋巴细胞转化率分别为 55.32 %、 56.39%、54.2 7% ,均高于对照组 4 7% ,上述三种方法测定的结果均显示显著差异。对 T淋巴细胞亚群的测定结果为 ,各试验组的 CD3、CD4、CD8T淋巴细胞的测定平均值均明显高于对照组 ,但 NK细胞的变化不显著。根据试验结果选取 1 0 0 mg剂量组在两个猪场进行田间扩大试验 ,测得的 IHA抗体效价亦高于对照组。研究结果表明 ,玉米花粉多糖既可增强体液免疫 ,又能增强细胞免疫。
- 陆芹章温纳相罗廷荣陈学文黄伟坚温荣辉刘芳秦爱珍梁家权余克伦
- 关键词：免疫增强剂细胞免疫体液免疫猪瘟冻干苗
- 广西某规模化猪场暴发猪流行性腹泻后紧急防控措施调查被引量：1
- 2013年
- 针对某规模化猪场暴发PED(猪流行性腹泻)后的紧急防控措施进行跟踪和调研。猪场发病仔猪共1 236头,发病率达100%,死亡率为13.9%,发病后及时确诊病原,并迅速采取一系列免疫、消毒和治疗措施,对疾病的控制起到了很好的效果。对比观察病理组织切片,首次发现PEDV可引起仔猪的胃肠道各部分病变,但对小肠的侵害最为严重,主要侵害肠黏膜引起肠绒毛短缩脱落。通过对仔猪和母猪的病原跟踪调查发现,康复的猪群在发病后10周,仍长期带毒并向外排毒。
- 陈静刘德清张宁蒋振南郭旋龙凤甘永华熊天飞黄伟坚
- 关键词：猪流行性腹泻病理切片
- 广西猪流行性腹泻病毒感染病例的确诊与病毒S基因变异分析被引量：7
- 2021年
- 旨在对广西玉林市某规模化猪场免疫猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)AJ1102疫苗株和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)二联弱毒活疫苗后,猪群发生的腹泻进行确诊。通过对发病猪群临床观察、腹泻死亡仔猪病理解剖、实验室RT-PCR检测和基因测序,最终诊断为PEDV变异株感染。对PEDV变异毒株的S基因进行了扩增测序与分析发现,该毒株与国内外参考毒株S基因核苷酸同源性为92.8%~99.5%,氨基酸同源性为91.8%~99.2%;遗传进化分析表明,该PEDV毒株属于G2-a型变异毒株;氨基酸序列比较结果显示,该PEDV变异株氨基酸在多个位点发生了变异,S蛋白在第807位与第827位疏水性氨基酸处出现了较大的变化,在抗原位点第800~813位氨基酸处发生了较为明显的变化。本研究通过该例猪流行性腹泻病毒变异株感染的临床诊断和S基因变异分析,为PEDV病原学研究以及科学防控该病提供参考依据。
- 杨春杰秦毅斌陈樱韦祖樟黄伟坚赵武欧阳康
- 关键词：猪流行性腹泻
- PRRSV广西分离株GXYL-1403全基因克隆与序列分析被引量：11
- 2016年
- 对本实验室所分离的1株猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）毒株GXYL-1403进行全基因组克隆和序列分析。参考已发表的扩增全长PRRSV序列的13对特异性引物,用RT-PCR方法对病毒基因组进行分段扩增。将扩增得到的PCR片段克隆到pMD18-T载体上,获得的重组质粒经PCR鉴定后进行序列测定。通过软件对所扩增序列进行拼接,获得GXYL-1403的全长序列,并对GXYL-1403进行比较和遗传进化分析。结果表明GXYL1403株基因序列全长为15 018bp,与国内外多株PRRSV毒株进行同源性比较发现,与VR-2332的相似性为89.1%,与TJ、JXA1、HEB1、HUB1、HUB2、TP株同源性达到了97.9%～98.1%。另外,GXYL-1403分离株nsp2蛋白含有高致病性PRRSV特异的1＋29个氨基酸的缺失。特别重要的是,在缺失29个氨基酸区域的上游,含有连续20个氨基酸缺失,在下游出现了连续74个氨基酸的缺失。遗传进化分析发现美洲型PRRSV主要分为3个亚群,GXYL-1403跟高致病性PRRSV毒株属于同一分支,证实了GXYL-1403株为美洲型PRRSV毒株。
- 林思远洪绍锋黄加滨韦莹陈樱黄伟坚韦祖樟
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传进化分析
- 携带H1N1 pdm09基因的重配猪流感病毒分子流行特征研究进展被引量：1
- 2021年
- 在2009年甲型H1N1流感(H1N1 pdm09)大流行暴发初期,该病毒就已经成功地潜入到了猪群当中,继而参与到了猪流感病毒(SIV)的进化过程,通过不断地重配和适应,促进了新型SIV变异毒株的产生。目前,世界各地的猪群中普遍流行着携带有H1N1 pdm09基因片段的新型SIV,其重配形式呈现多样化。值得一提的是,由于H1N1 pdm09毒株的内部基因具有广泛的基因相容性,不同亚型、不同谱系的人源流感病毒、禽源流感病毒和本地猪流感病毒更倾向与它们优先发生重组。重配后的子代病毒较亲本毒株容易获得选择优势,能够在猪群中建立稳定的遗传谱系。研究发现H1N1 pdm09部分独特的内部基因片段在其高效的人际间传播过程中发挥着决定性的作用。一旦这类新型SIV成功突破种间屏障,获得适应新的哺乳动物的能力,将会对人类健康造成潜在的威胁。论文综述了携带有H1N1 pdm09基因的新型重配SIV的分子流行情况,特别就H1N1 pdm09内部基因与重组病毒致病性、传播能力等相关的分子基础进行了系统地综述,为防控新型SIV的暴发和保障公共卫生安全提供依据。
- 余良政丁仰保何剑桥刘林林崔柏杨郭嘉宁曾昊郭金凡韦祖樟欧阳康黄伟坚陈樱
- 关键词：基因
- 2003～2008年广西猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株分子流行病学调查被引量：3
- 2009年
- GP5是猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）变异最大的结构蛋白，能够诱导机体产生中和抗体。2003～2008年从广西各县市采集PRRSV阳性病料，扩增得到的49株PRRSVORF5基因序列，并对序列进行比较和分析。49个毒株的ORF5分别属于美洲型的Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ亚群．推导氨基酸分析发现：在中和表位区域GXLZ-1、GXLZ-2由H^38→N^38、L^39→I^39，Ⅱ亚群所有毒株序列由L^39→I^39；在R^13和R^151毒力相关位点，GXGG-1变为Q^13，GXLZ-1和GXLZ-2变为K^151，其他毒株未发生突变，推测Ⅱ亚群广西毒株的毒力比Ⅰ、Ⅳ亚群的强；从2003—2005年和2006—2008年这2个时间段分析，在9aa、16aa、54aa、59aa、94aa、104aa、185aa出现了时间性的基因变异；遗传进化树分析发现，随着时间的推移，获得的广西毒株与CH-1a、MLV株亲缘关系逐渐发生偏离，2006年6月之后所获得毒株亲缘关系很近，相互之间同源性很高，且与国内PRRSV变异毒株JXA1高度同源，推断2006年后获得的毒株与变异株可能由同一毒株演化而来。
- 陈琼黄伟坚冯建远卢桂娟张宁何萍平秦毅斌李茂宁
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5
- 广西猪源沙门菌血清学分型及生物被膜形成能力的研究被引量：3
- 2014年
- 为了研究近年广西地区流行猪源沙门菌的血清型和生物被膜形成能力,对从广西区内不同地区规模猪场分离鉴定的35株沙门菌,用玻片凝集法进行血清学分型;应用结晶紫染色微量板定量法检测菌株的生物被膜形成能力。结果显示:试验菌株分属14种血清型,所有菌株均具有生物被膜形成能力:20株弱成膜能力,4株中等成膜能力,11株强成膜能力。其中,鼠伤寒沙门菌的成膜能力较强。
- 蹇慧黎木兰艾佛德刘芳方小文杨洋黄伟坚
- 关键词：沙门菌血清型生物被膜
