丁金萍
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 应用比较蛋白质组学技术筛查组织工程化软骨力学性能相关蛋白被引量：1
- 2013年
- 目的应用比较蛋白质组学分析方法筛选组织工程化软骨成熟过程中变化显著的细胞外基质蛋白，通过线性相关分析，研究与软骨力学性能相关的蛋白。方法分离人胎儿软骨细胞培养并扩增，接种到聚羟基乙酸／聚乳酸（PGA／PLA）支架材料，体外培养4周后随机分为3组，每组6例，A组继续体外培养6周、B组回植裸鼠体内培养6周、c组回植裸鼠体内培养12周。取材后进行大体观察、湿重及体积测定、组织学及生物力学等相关检测，比较体内外构建软骨与天然软骨形成质量上的差异。同时进行蛋白质组学分析，选择细胞外基质中比值大于2倍的蛋白与相应各组杨氏模量做相关性分析，根据相关系数筛选与软骨力学性能最相关的蛋白。结果3组均能在体内外形成透明软骨样组织，c组和B组软骨外观近似天然成人软骨，组织学显示大量成熟软骨陷窝，而A组形成的软骨组织结构较松散，组织学可见不规则肥大软骨陷窝。c组湿重和生物力学检测分别为（372．5±35．4）mg和（8．68±2．65）MPa，明显高于B组的（346±34．5）mg和（3．25±1．24）MPa（P〈0．01），而A组为（184．4±12．28）mg和（0．7±0．23）MPa。应用蛋白质组学技术检测到细胞外基质中共44个差异蛋白，选择胞外基质中C组和A组之间差异最大的6个蛋白，与相应各组杨氏模量进行线性相关分析，发现核心蛋白聚糖（Decorin）、软骨粘附素（Chondroadhefin）和纤调蛋白（Fibromodulin）与软骨力学性能变化显著相关（P〈0．05）。结论蛋白质组学技术能够提供大量的蛋白质信息，组织构建与比较蛋白质组学技术相结合，有利于进一步分析组织工程化软骨胞外基质蛋白与力学性能的关系。
- 丁金萍刘宏伟晏丹叶明亮邹汉法刘伟张文杰曹谊林周广东
- 关键词：软骨蛋白质组学
- CD204阴性人脂肪来源细胞体外成软骨潜能的初步研究
- 2012年
- 目的比较CD204+和CD204-两种人脂肪来源细胞的干细胞特性和体外诱导成软骨的能力。方法分离培养人脂肪来源细胞并进行流式细胞分选,分别获得CD204+和CD204-两种细胞。将这两种细胞培养扩增至第2代,观察其形态学特点;成脂、成骨定向诱导分化,油红O染色、茜素红染色定性;同时将两种细胞进行pellet成软骨诱导分化,比较体外诱导成软骨的能力,并以HE、Safranin O和Ⅱ型胶原免疫组化染色等进行鉴定。结果经流式细胞分选,脂肪来源细胞中CD204表达阳性率约为10%。分选后的CD204+和CD204-细胞均呈成纤维细胞样贴壁生长,但CD204-细胞具有更强的增殖能力。成脂诱导10 d后,两组细胞油红O染色均可见胞浆内有大量红染脂滴,但CD204+细胞具有更强的成脂潜能。成骨诱导2周后,两组细胞茜素红染色均可见钙结节红染,而CD204-细胞具有更强的成骨潜能。同时,细胞pellet成软骨诱导4周后,大体观可见CD204-细胞组pellet形成白色透明样软骨成分,而CD204+细胞组pellet外观微黄。HE和Ⅱ型胶原免疫组化染色均显示CD204-组pellet可见成熟软骨陷窝形成,Safranin O染色显示CD204-组软骨特异性细胞外基质沉积;而CD204+细胞组pellet则呈纤维化改变。结论脂肪组织来源的CD204-细胞具有干细胞的生物学特点,且有良好的成软骨潜能,可以成为软骨组织工程良好的种子细胞来源。
- 丁金萍孙恒赟陈谨君张文杰刘伟曹谊林周广东
- 关键词：细胞分选
