仲蕾蕾
- 作品数：6 被引量：3H指数：1
- 供职机构：重庆大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 遗传改造酿酒酵母生产植物萜类药物的策略被引量：2
- 2015年
- 植物萜类化合物广泛应用于食品、医药、化妆品、农业等行业,在人们生活中起着越来越重要的作用,但因植物资源有限、生长缓慢、提取工艺复杂、生产成本高等影响,萜类物质在应用上受到很大限制。酵母作为一种简单的真核生物,不但具有遗传背景清晰、生长快、容易操作等优点,而且其本身存在萜类合成途径。因此,酵母常被用作宿主菌,在不影响正常生长的情况下,优化其萜类合成途径,使之适合植物萜类药物的生物合成。本文就萜类的生物合成、近几年改造酵母生产萜类取得的成果和面临的一些问题及建议做一综述。
- 黄晓斌仲蕾蕾
- 关键词：酿酒酵母
- 破骨细胞钠氢转运蛋白关键位点研究
- 2012年
- 目的在酿酒酵母中异源表达人破骨细胞分化成熟潜在因子钠氢转运蛋白2,对其关键氨基酸保守位点进行突变分析,鉴定其作为盐离子载体转运Na+的功能。方法采用突变试剂盒依次把此蛋白的D278和D279 2个位点的天冬氨酸中1个氨基酸突变成半胱氨酸,得到2个不同位点突变的定点突变体;构建酵母双基因表达载体,通过电穿孔的方式转入到酵母菌株中;Western印迹检测2个定点突变基因在酵母菌株的表达;通过NaCl选择压力显示2个突变体在高盐环境中的相互作用,观察菌株的抗盐生长表型。结果成功获得适合转化酵母的多个载体;在固体和液体培养基中,经半乳糖诱导后,各个载体均可使酵母异源表达钠氢转运蛋白2;生长曲线显示2个突变体可相互作用,部分恢复酵母菌株的抗盐能力。结论钠氢转运蛋白2通过关键位点D278和D279 2,以形成二聚体的方式在细胞中发挥着钠离子转运功能。
- 黄晓斌仲蕾蕾
- 关键词：破骨细胞酿酒酵母
- 在酵母中异源表达人破骨细胞钠氢转运蛋白
- 2012年
- 目的在酿酒酵母中异源表达人破骨细胞分化成熟潜在因子钠氢转运蛋白2(HsNHA2),鉴定其作为盐离子载体转运Na+的功能,并对其在细胞中的表达进行初步定位分析。方法采用高保真PCR试剂盒扩增出HsNHA2;构建酵母表达载体,通过电穿孔的方式转入到酿酒酵母菌株中;Western印迹检测其在酵母菌株的表达;通过NaCl选择压力观察菌株在高盐环境中的生长表型,并用根皮素抑制HsNHA2观察其抗盐功能;最后用细胞原位荧光染色确定HsNHA2在细胞中的表达位置。结果 Western印迹证实HsNHA2在酵母菌株中正常表达;生长曲线显示HsNHA2可使菌株在高盐环境中生长,根皮素抑制HsNHA2表达后菌株不能在0.2mol/L NaCl培养基中生长;免疫荧光染色初步证明HsNHA2表达在细胞膜上。结论 HsNHA2作为盐离子载体在酵母细胞中主要表达在细胞膜上行使转运Na+的功能,以维持细胞正常生长。
- 黄晓斌仲蕾蕾
- 关键词：破骨细胞酿酒酵母
- 破骨细胞钠氢转运蛋白集中于线粒体中表达
- 2012年
- 目的:把RAW264.7和人外周血CD14+诱导成破骨样细胞,检测破骨细胞在成熟过程中钠氢转运蛋白2(Na+-H+An-tiporter 2,NHA2)的转录表达情况,并定位其表达位置。方法:细胞因子RANKL、M-CSF在体外诱导RAW264.7和人外周血CD14+细胞发育成破骨样细胞;RT-PCR检测NHA2在诱导过程中转录水平上所发生的变化;Western blot检测诱导前后此蛋白表达情况;细胞原位荧光染色对其表达进行细胞精确定位。结果:RAW264.7和人外周血CD14+细胞被RANKL、M-CSF诱导成破骨样细胞;RT-PCR结果显示NHA2随着破骨细胞的分化成熟转录水平不断加强;Western blot结果显示此蛋白只表达于成熟的破骨细胞中;细胞原位荧光染色结果显示这个蛋白主要表达于成熟破骨细胞的线粒体中。结论:NHA2作为盐离子载体主要表达于成熟破骨细胞的线粒体中,通过控制线粒体盐离子的代谢平衡来影响破骨细胞的发育分化。
- 黄晓斌仲蕾蕾
- 关键词：破骨细胞线粒体
- 钠氢转运蛋白2敲出小鼠破骨细胞分化研究
- 2012年
- 目的建立NHA2基因敲出小鼠模型,观察NHA2-/-小鼠骨髓细胞分化为破骨细胞的能力及生长表型变化。方法首先用NHA2+/-杂合子小鼠繁殖得到NHA2-/-纯合子小鼠;以小鼠尾巴为材料做普通PCR鉴定其基因型;用RT-PCR检测基因敲出小鼠NHA2转录情况;从小鼠中取出骨髓进行破骨细胞诱导,观察其分化能力。结果 NHA2-/-小鼠骨髓细胞体外诱导成成熟破骨细胞能力减弱;但小鼠生长表型无明显变化。结论 NHA2作为盐离子载体在体外对破骨细胞的成熟分化有一定影响,在小鼠体内可能与其它离子载体共同调节盐平衡系统。
- 黄晓斌仲蕾蕾
- 关键词：破骨细胞逆转录PCR
- 增强大肠杆菌MEP2通路发酵生产抗癌药物紫杉醇前体被引量：1
- 2017年
- 用合成生物学的方法构建模块,使大肠杆菌遗传背景发生改变,生产红豆杉次生代谢产物紫杉醇前体物质——4(5),11(12)紫杉二烯(Taxadiene)。首先,用基因工程操作手段构建MEP2(2-C-Methyl-D-Erythritol-4-Phosphate,2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸途径)模块,这个模块包括4个基因:ispC、ispE、ispH和ispG,4个基因的表达产物属于大肠杆菌固有途径中的几个酶蛋白;模块构建好后,通过电穿孔的方式把MEP2转化到已含有上游MEP1模块和下游TG模块的大肠杆菌中,改变大肠杆菌固有的遗传信息。再用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导所转入基因的表达,最后用气相色谱-质谱(GC-MS)方法检测表达情况。成功构建MEP2模块;通过与MEP1模块和TG模块的组合实验,MEP2模块能加强菌株表达紫杉二烯。结果表明,微生物大肠杆菌可以通过基因工程改造手段来生产植物天然药物紫杉醇前体物质4(5),11(12)紫杉二烯以及其他中间体。
- 黄晓斌仲蕾蕾
- 关键词：合成生物学生物发酵
