党昕
- 作品数：5 被引量：13H指数：3
- 供职机构：北京大学生命科学学院更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 一种新的纤溶酶原激活反应动力学研究方法被引量：5
- 2001年
- 在溶栓研究中 ,纤溶酶原激活剂 (plasminogen activator,PA)激活纤溶酶原 (plasminogen,Plg)反应的动力学常数的测定占有重要地位 .在前人的研究中 ,虽然进行了这项实验 ,但是并未给出一个方便、快捷的测定方法 .所以建立一种更准确 ,更适合一般的实验室条件的 PA分子激活 Plg反应动力学常数的测定方法是必要的 .在对该反应进行数学分析的基础上 ,得到由可测量表示的纤溶酶 (plasmin,Plm)生成速度 (v(Plm) )的计算公式 ,由 v(Plm)及相应已知量可进一步推导出 Km、kcat的表达式 ,最终测得相应动力学常数 .用这种方法测定的由甲醇酵母 (pichia pastoris)表达的人单链尿激酶型纤溶酶原激活剂 (human single chain urokinase- PA,scu- PA)激活 Plg的反应的 Km=0 .648μmol·L-1,kcat=0 .0 62 6s-1,与文献报导相符 (Km=0 .4～ 1 .1 μmol· L-1,kcat=0 .0 2～ 0 .0 93) s-1,说明此方法是可靠的 .又因该法只需相应底物及酶标仪且为连续测定 ,所以十分简便 .
- 党昕纪建国茹强杨晶鑫俞梅敏茹炳根
- 关键词：纤溶酶原动力学常数纯化
- 含RGD序列的双功能溶栓分子的研究
- 心血管疾病是一种当代社会的常见病、多发病,常用的主要治疗之一是溶栓疗法,构建了一种以单链尿激酶型纤溶酶原激活剂(scu-PA)为母体的具有抗血小板聚集活性的溶栓分子.通过将RGD序列引入scu-PA,从而通过RGD序列与...
- 党昕
- 关键词：RGD序列抗血小板聚集
- 纤维蛋白对尿激酶原激活纤溶酶原反应动力学的影响被引量：1
- 2001年
- 反应体系中存在的纤维蛋白 (fibrin)对尿激酶 (UK)、scu PA以及组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)激活纤溶酶原 (plasminogen)的反应有不同的作用 :UK、t PA激活 plasminogen的反应可被反应体系中存在的fibrin所加强 ;fibrin对scu PA激活 plasminogen反应的动力学常数无明显影响 ;但对小分子质量scu PA与单链抗体的嵌合分子激活 plasminogen的反应起明显的抑制作用 .为确定反应体系中存在的fibrin对scu PA的K区插入突变体 InB激活plasminogen反应的影响 ,测定了在反应体系中存在fibrin的情况下的InB激活 plasminogen反应的Kfibrinm 以及kfibrincat .Kfibrinm =4 2 μmol·L-1,远远大于无fibrin时的Km=0 379μmol·L-1,说明有fibrin存在时突变体InB与天然底物 plasminogen的亲和性降低了 .kfibrincat =0 10 7s-1,也远远大于无fibrin时kcat=0 0 16 5s-1,说明有fibrin存在时突变体InB对plasminogen的反应活性增强了 .原因可能是 :与fibrin结合的 plasminogen的构象发生了有利于被纤溶酶原激活剂水解的变化 .
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- 关键词：纤维蛋白纤溶酶原动力学
- PRGDWR-尿激酶原双功能嵌合分子的性质研究被引量：3
- 2001年
- 为赋予单链尿激酶型纤溶酶原激活剂 (singlechainurokinase typeplasminogenactivator,scu PA ,尿激酶原 )以抗血小板聚集的功能 ,在scu PA的kringle区 118位Gly与 119位Leu之间插入PRGDWR序列 (insertmutantB ,InB) .利用甲醇酵母 (Pichiapastoris)进行分泌表达 ,经金属离子螯合亲和层析与S强阳离子交换层析 ,得到纯蛋白 .实验测定InB对人工合成底物S 2 44 4的酰胺解活性为 5 90 0IU/mg ,动力学常数为 :KInBm ,S 2 4 44 =5 6 8μmol·L-1,kInBcat,S 2 4 44 =0 33s-1;水解天然底物 plasminogen的动力学常数为 :KInBm ,plg=0 397μmol·L-1,kInBcat,plg=0 0 16 4s-1.InB激活 plasminogen的反应在有fibrin存在条件下InB的活性为无fibrin条件下的 46 3% .该突变体在体外激活 plasminogen的活性与同一系统表达的野生型scu PA基本相同 .该突变体表现出较强的抗血小板聚集活性 ,IC50 =12 7μmol·L-1,而野生型scu PA无此功能 .实验表明scu PA的K区插入突变体InB是一种极具潜力的双功能溶栓分子 .
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- 关键词：尿激酶原血小板聚集
- 尿激酶原-RGDS双功能分子——构建、表达及性质研究被引量：6
- 1999年
- 利用定点突变及DNA重组技术 ,构建了在尿激酶原K区C 端的β 发夹区插入了精氨酸 甘氨酸 天冬氨酸 丝氨酸 (RGDS)片段的尿激酶原嵌合体基因 ,并利用昆虫杆状病毒表达系统通过感染Sf9细胞对嵌合体尿激酶原进行了高效表达 .用尿激酶原单抗亲和柱纯化表达产物 ,获得初步纯化的嵌合体蛋白 .对嵌合体蛋白进行血小板膜结合实验表明 ,此嵌合体具有依赖于钙离子的结合活化血小板膜的活性 .用生色底物Chromozym U测定嵌合体的酰胺解活性 ,结果显示 ,纤溶酶激活后的嵌合体比活为 62 0 0 0IU/mg,与文献报道的纤溶酶激活的尿激酶原比活 65 3 5 5IU/mg相近 .纤溶酶激活后的嵌合体激活纤溶酶原的反应符合米氏方程 ,其Km 值为 0 .97μmol/L ,与天然尿激酶的Km 值 1.64μmol/L相近 .嵌合体还显示了较强的体外抑制血小板聚集活性 .这些结果表明 ,此尿激酶原 RGDS嵌合体有可能成为一种新的双功能溶栓药物 .
- 钱斌孙迎庆郭雁党昕茹炳根
- 关键词：尿激酶原心血管疾病溶栓药物
