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卵巢上皮性癌淋巴道定向高转移细胞系的建立及其生物学特性的鉴定被引量：10: 2007年; 目的筛选卵巢上皮性癌(卵巢癌)淋巴道定向高转移恶性肿瘤细胞亚群,并对其生物学特性进行鉴定。方法将卵巢癌细胞株 SKOV3细胞接种于裸鼠爪垫皮下,待植入细胞在裸鼠体内成瘤并发生转移时,取其淋巴结转移灶中癌细胞再次接种于裸鼠爪垫皮下传代,每代均取出淋巴结转移灶中癌细胞进行培养,通过单细胞分离(克隆)培养或局部淋巴结转移灶筛选的方法建立连续传代细胞系,重复传3代后,通过裸鼠接种实验观察各代裸鼠的淋巴结转移率。利用细胞生长曲线、HE 染色、染色体分析、流式细胞分析、裸鼠接种、免疫组化等方法鉴定各代细胞的生物学特性。结果所建立的连续传代1～3代的细胞系,分别命名为 SKOV3-PM1、SKOV3-PM2和 SKOV3-PM3细胞,癌细胞在裸鼠体内传3代后,裸鼠的淋巴结转移率为100%(10/10),原代 SKOV3细胞的淋巴结转移率为10%(1/10),两者比较,差异有统计学意义(P<0.05);SKOV3-PM3细胞形成的淋巴结转移灶的数目(26/10)较 SKOV3细胞多(1/10,P<0.01);且转移灶多位于淋巴结。细胞染色体分析显示,SKOV3细胞染色体数目大多数分布在83～89条,SKOV3-PM3细胞染色体数目大多数分布在91～105条。SKOV3与 SKOV3-PM3细胞染色体数目比较,差异有统计学意义(P<0.05);转移灶中上皮膜抗原(EMA)表达呈阳性,证实转移细胞株保持着卵巢癌细胞的生物学特性;SKOV3-PM3细胞倍增时间为22.7 h,SKOV3细胞为49.6 h,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞分析显示,SKOV3-PM1、SKOV3-PM2、SKOV3-PM3细胞的淋巴结转移灶中癌细胞的 DNA 合成期和分裂期细胞的比例分别为24.2%、29.4%和36.7%,明显高于 SKOV3细胞的21.5%(P<0.05)。结论本研究成功建立了卵巢癌淋巴道定向高转移细胞系,为研究卵巢癌的淋巴结浸润转移的发病机制提供了良好的实验材料。; 阮和云黎丹戎李力冠潇张玮; 关键词：卵巢肿瘤淋巴转移细胞系肿瘤

卵巢癌淋巴结定向高转移与非定向转移细胞系间差异性表达基因和蛋白的筛选研究: 目的：人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞系SKOV3及其在裸鼠体内建立韵淋巴结定向高转移亚克隆SKOV3-pm，为卵巢癌转移分子机制的深入研究提供了细胞模型，以期寻找卵巢癌侵袭转移相关基因和蛋白，从而为卵巢癌的临床诊断和治疗提供...; 冠潇; 关键词：乳头状腺癌蛋白筛选; 文献传递

应用功能分类基因芯片筛选卵巢癌淋巴结定向高转移细胞系中差异性表达基因被引量：7: 2008年; 目的:在裸鼠体内建立以人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞系SKOV3具有淋巴结定向高转移亚克隆第二代SKOV3-pm2、第三代SKOV3-pm3细胞系,应用基因芯片技术比较这3种具有不同淋巴结定向转移能力的细胞亚系中基因表达谱的差异,寻找卵巢癌侵袭转移相关基因。方法:采用Trizol一步法抽提SKOV3、SKOV3-pm2、SKOV3-pm33种细胞总RNA;取等量RNA逆转录合成cDNA用Ampolabeling-LPR(linear polymerase re-action,线性聚合酶反应)法标记的cDNA链做探针,混合后与功能分类基因芯片[OligoTumor Metastasis Microarray Catalog No.OHS-028(人)]杂交,计算机分析后比较3种细胞中差异性表达基因,并应用RT-PCR技术对其中3个表达差异明显的基因进行验证。结果:共筛选出表达差异性基因60个,其中表达上调基因47个(ratio>3),有21个基因在SKOV3-pm2、SKOV3-pm3中共同表达上调;表达下调基因13个(ratio<0.5),有1个基因在SKOV3-pm2、SKOV3-pm3细胞中共同表达下调。结论:基因表达芯片检测与肿瘤淋巴体外转移模型相结合,为肿瘤转移研究提供了新方法、新思路。; 冠潇李力黎丹戎阮和云尹永硕张玮; 关键词：卵巢肿瘤差异表达基因

应用SELDI-TOF-MS技术筛选卵巢癌淋巴结定向高转移特性细胞株差异表达蛋白: 2008年; 背景与目的:人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3及其在裸鼠体内建立的淋巴结定向高转移亚克隆第二代SKOV3-pm2、第三代SKOV3-pm3细胞株,为卵巢癌转移分子机制的研究提供了细胞模型。本研究应用飞行时间质谱技术结合蛋白芯片分析筛选卵巢癌淋巴结定向高转移与非定向转移细胞株之间的蛋白质表达差异。方法:采用动物实验测定SKOV3、SKOV3-pm2和SKOV3-pm3三种细胞株的淋巴结转移率。应用表面增强激光解吸离子化-飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption and ionization-time of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术检测各细胞株提取的胞浆总蛋白和分泌蛋白,每种细胞分别采用CM-10型弱阳离子交换芯片和IMAC-3型固定金属亲和芯片检测。应用Ciphergen Protein Software3.2.0软件和Biomarker Wizard软件对采集3组细胞的蛋白峰进行比较,峰强度相差0.5倍以上者定义为差异蛋白。结果:动物实验显示,细胞株SKOV3及高转移亚克隆SKOV3-pm2、SKOV3-pm3的淋巴结转移率分别为20%、90%和100%,前者与后二者之间的差异有统计学意义(P<0.05)。获得CM-10和IMAC3两种蛋白芯片上SKOV3、SKOV3-pm2、SKOV3-pm3细胞株蛋白质谱图谱,对比发现:质荷比(m/z)为6971、7475、9089、9453、10103、11655的胞浆蛋白及质荷比(m/z)为4746的分泌蛋白在上述三种细胞株中存在不同程度差异表达。结论:应用SELDI-TOF-MS技术结合固定金属亲和芯片和弱阳离子交换芯片,可有效筛选卵巢癌淋巴结定向高转移特性细胞株中的特异性表达蛋白;寻找到的差异蛋白与淋巴结定向高转移潜能密切相关。; 冠潇黎丹戎王琪李力阮和云张玮; 关键词：SKOV3细胞株蛋白芯片差异蛋白

卵巢癌细胞与卵巢癌淋巴定向高转移细胞分泌蛋白差异初筛被引量：5: 2013年; 目的:分析卵巢癌细胞株(SKOV3)与卵巢癌淋巴结定向高转移细胞株(SKOV3-PM4)分泌蛋白的差异,寻找与卵巢癌淋巴定向转移密切相关的潜在诊断分子标志。方法:分别收集SKOV3与SKOV3-PM4培养上清,利用双向凝胶电泳(2-DE)及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI_T0F-MS/MS)技术筛选及鉴定差异表达的蛋白点,对其进行生物学分析后采用蛋白质印迹法验证挑选目标蛋白在细胞分泌蛋白中的表达情况。结果:二维凝胶电泳显示,SK-OV3细胞分泌蛋白质点数约为569±156,SKOV3-PM4细胞分泌蛋白质点数约为598±175。选取差异较大的7个差异蛋白点进行MS+MS/MS质谱鉴定,分别为乙二醛酶1(GLO1)、翻译后调节肿瘤蛋白(TPTC)、二磷酸核苷激酶B(ND-PK-B)、膜联蛋白(ANXA1)、热休克蛋白27(HSP)、过氧化物氧化还原(PRDX1)和磷脂酰乙醇胺结合蛋白Ⅰ(PEBP-Ⅰ)。挑选NDPK-B、ANXA1和HSP蛋白经蛋白质印迹法验证发现,SKOV3-PM4细胞中ANXA1和HSP27表达高于SKOV3细胞,而NDPK-B表达低于SKOV3细胞。与质谱分析的结果基本一致。结论:在卵巢癌细胞与卵巢癌淋巴结定向高转移细胞之间分泌蛋白存在很大的差异,其中已被鉴定的ANXA1和HSP27与卵巢癌淋巴结转移密切相关,有望成为诊断或预测卵巢癌淋巴结转移患者血清检测的标志。; 刘丽黎丹戎钟艳平李力高婷阮和云冠潇; 关键词：卵巢癌分泌蛋白二维凝胶电泳

淋巴管内皮细胞微环境对卵巢癌淋巴结定向高转移细胞上皮-间质转化的影响被引量：2: 2013年; 目的通过人卵巢癌淋巴结定向高转移的细胞株(SKOV3-PM4)与人淋巴管内皮细胞株(HLEC)的条件培养和共培养,探讨HLEC微环境对SKOV3-PM4的运动迁移能力以及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法采用transwell小室体外侵袭法,观察经HLEC的条件培养后SKOV3-PM4的侵袭、迁移能力的改变。SKOV3-PM4经HLEC的条件培养和共培养后的爬片细胞,采用免疫组化法检测转化生长因子(TGF-β1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达的变化。结果经HLEC培养基的条件培养后SKOV3-PM4细胞的侵袭率为(53±11)%,单独培养的SKOV3-PM4细胞的侵袭率为(30±5)%(P<0.05);条件培养后SKOV3-PM4细胞的迁移率为(48±5)%,单独培养的SKOV3-PM4细胞的迁移率为(34±2)%(P<0.05)。SKOV3-PM4细胞经条件培养和共培养后TGF-β1和vimentin表达上调(P均<0.05),E-cadherin表达下调(P<0.05)。结论淋巴管内皮细胞微环境可促进卵巢癌淋巴结定向高转移细胞间质化的转变,增强卵巢癌细胞的侵袭、迁移能力。; 刘丽黎丹戎钟艳平李力高婷阮和云冠潇; 关键词：微环境

血管内皮细胞对卵巢癌淋巴结定向转移细胞侵袭能力的影响被引量：2: 2012年; 目的:研究血管内皮细胞对卵巢癌淋巴结高转移细胞的运动迁移和侵袭能力的影响。方法:建立卵巢癌淋巴结高转移细胞(SKOV3-PM4)、人脐血管内皮细胞(human umbilical venous endothelial cells,HUVEC)条件培养基的交互培养体系,通过MTT法测定生长曲线,HE染色观察细胞超微结构的改变,Transwell穿膜运动实验、划痕实验、明胶酶谱分析等实验方法研究交互培养后各组细胞的侵袭转移能力的变化。结果:与同期单独培养的SKOV3-PM4、HUVEC相比,交互培养后的SK-OV3-PM4伪足增多,生长速度明显快于SKOV3-PM4,交互培养后HUVEC呈不规则形态,出现空泡化超微结构,生长速度与HUVEC相似,细胞的运动和侵袭能力增强,基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)在单独的SKOV3-PM4中低表达,在HUVEC中不表达,在共培养的SKOV3-PM4-HUVEC中高表达。结论:HUVEC上清液培养后的SKOV3-PM4的生物学行为和运动侵袭能力发生改变,推测可能与血管内皮分泌的VEGF、MMP-2等因子有关。; 高婷黎丹戎李力张玮阮和云冠潇; 关键词：卵巢癌

人淋巴管内皮细胞对卵巢癌淋巴结定向转移细胞分泌蛋白表达的分析被引量：3: 2013年; 目的:初步探讨人淋巴管内皮细胞(HLEC)对卵巢癌淋巴结定向转移细胞(SKOV3-PM4)分泌蛋白的影响。方法:将细胞体系分为4组(A组:SKOV3;B组:SKOV3+HLEC;C组:SKOV3-PM4;D组:SKOV3-PM4+HLEC),采用抗体芯片和iTRAQ-2D-LC-MALDI-TOF/TOF/MS方法检测各组细胞培养基中的蛋白,筛选出差异明显的分泌蛋白,对其行生物信息学分析,并采用ELISA方法在人血清标本和细胞培养基中进行验证。结果:抗体芯片与质谱分析结果提示,C组与A组相比、D组与C组相比Progranulin(GRN)、VEGFA表达上调,SPARC、IGFBP7表达下调。经过综合生物信息学分析,IGFBP7和VEGFA联系紧密,相互影响。与正常组血清相比,VEGFA在卵巢癌中的表达最高,IGFBP7表达最低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:淋巴结定向转移与淋巴管内皮细胞微环境关系密切,共培养后的差异蛋白涉及到基质细胞蛋白、细胞黏附作用因子等方面。其中VEGFA、GRN的表达上调及SPARC、IGFBP7的表达下调与卵巢癌淋巴结定向高转移密切相关。; 张新颖尹富强刘丽高婷阮和云冠潇卢迎新黎丹戎; 关键词：卵巢癌肿瘤微环境淋巴转移分泌蛋白

应用基因表达谱芯片筛选卵巢癌淋巴结定向高转移细胞系中差异性表达基因: 目的筛选用人卵巢癌细胞系 Skov3在裸鼠体内建立的具有淋巴结定向高转移亚克隆第二代 Skov3- pm2、第三代 Skov3-pm3细胞之间差异表达的、与卵巢癌侵袭转移相关基因。方法采用 TRIZOL 一步法抽提 Sk...; 冠潇李力黎丹戎阮和云张玮; 文献传递

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