冯洁
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 供职机构：广西医科大学附属肿瘤医院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金广西省自然科学基金广西壮族自治区卫生厅重点科研课题更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 过表达FAF1对胃癌细胞HGC-27增殖及凋亡的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:检测过表达F a s相关蛋白1(F a sassociated factor 1,FAF1)对胃癌细胞HGC-27增殖及凋亡的影响,探讨FAF1与胃癌发生发展的相关性.方法:实验分为阴性对照组(未转染组)、空载转染组(感染空载体慢病毒颗粒1.0×108TU/mL)、过表达FAF1组(感染FAF1过表达慢病毒颗粒1.0×108TU/mL).激光共聚焦显微镜观察转染效率,Western blot检测FAF1蛋白的表达情况,透射电镜观察细胞超微结构变化,流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡情况,MTT检测细胞生长情况.结果:依据GFP绿色荧光可测定细胞转染效率达95%以上;与阴性对照组和空载转染组相比,过表达FAF1组FAF1蛋白明显高表达;阴性对照组和空载转染组均细胞膜完整,细胞核正常,两者超微结构无明显差异,而过表达FAF1组胞核裂解成碎片状,可见凋亡小体形成;FAF1过表达能够抑制人胃癌细胞HGC-27的增殖,诱导细胞凋亡,改变细胞周期的分布,与阴性对照组和空载转染组相比,过表达FAF1组细胞的倍增时间显著延长,细胞凋亡率显著提高(84.66%±5.92%vs 4.60%±3.80%和7.32%±3.82%,P<0.05),G0/G1期细胞显著降低(46.43%±2.43%vs 54.93%±3.5%和54%±0.3%,P<0.05),G2/M期细胞显著增多(29.78%±3.91%vs 19.33%±3.82%和20.93%±2.46%,P<0.05),差异均有统计学意义.结论:构建的过表达FAF1慢病毒可以抑制胃癌细胞的生长,改变细胞周期的分布,促进胃癌细胞的凋亡.
- 袁燕玲刘爱群冯洁陈佳玮葛莲英
- 关键词：胃癌细胞增殖凋亡
- 幽门螺杆菌感染对人胃癌细胞HGC-27和人胃黏膜上皮细胞GES-1FAS相关因子1表达的影响被引量：4
- 2014年
- 目的 探讨Fas相关因子l（FAF1）基因表达与幽门螺杆菌感染（Hp）及胃癌发生之间的关系.方法 人胃癌细胞株HGC-27、人胃黏膜上皮细胞GES-1 8×105个与Hp标准菌株NCTC11637共培养24h,按细胞/细菌比分为3组：空白对照组、1∶100和1∶200共培养组,每组实验设3个复孔,采用噻唑蓝（MTT）比色法490 nm波长处测量吸光度值计算细胞存活率,流式细胞仪检测l×104个细胞凋亡率,荧光实时定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测细胞FAFl mRNA相对表达量,扩增片段长度为164 bp.结果 HGC-27和GES-1细胞与Hp共培养后,细胞增殖均减少,凋亡率增加.与各自空白对照组比较,FAFl mRNA在HGC-27细胞1∶100和1∶200共培养组表达量明显降低（0.67 ±0.20比0.99 ±0.27,F=11.51,P＜0.05;0.44 ±0.30比0.99±0.27,F=11.51,P＜0.01）;FAFl mRNA在GES-1细胞1∶100共培养组表达量明显升高（1.61 ±0.77比0.99 ±0.41,F=14.45,P＜0.05）,1∶200共培养组表达量明显降低（0.36 ±0.22比0.99±0.41,F=14.45,P＜0.05）.与GES-1细胞空白对照组、1∶100和1∶200共培养组比较,FAF1 mRNA在HGC-27相应各组表达量均明显降低（0.33 ±0.16比0.99 ±0.41,t =4.74,P＜0.01;0.17±0.12比1.08 ±0.53,t=5.28,P＜0.01;0.39 ±0.24比0.98±0.23,t=5.67,P＜0.01）.结论 Hp感染下调FAF1基因表达,导致细胞增殖和凋亡失衡,诱发胃癌的发生.
- 冯洁袁燕玲刘爱群葛莲英
- 关键词：胃肿瘤脱噬作用幽门螺杆菌
- 不同浓度幽门螺杆菌对胃癌细胞增殖凋亡及FAF1 mRNA表达的影响
- 2014年
- 目的研究不同浓度幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)感染对人胃癌细胞HGC-27生长及Fas相关因子1(fasassociated factor 1,FAF1)m RNA表达的影响,探讨Hp致胃癌发生的分子机制。方法人胃癌细胞HGC-27与不同浓度Hp标准菌株NCTC11637共培养24 h,根据感染复数(细胞/细菌比)分为1∶1共培养组、1∶50共培养组、1∶100共培养组、1∶200共培养组及对照组(未与Hp共培养),采用噻唑蓝(MTT)比色法测定0 h、12 h、24 h、48 h的OD值,绘制细胞生长曲线。共培养24 h后以流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(q RT-PCR)技术检测HGC-27细胞FAF1 m RNA的相对表达量,比较不同浓度Hp感染前后FAF1 m RNA表达的变化。结果经革兰氏染色及生化实验证实培养细菌为Hp。与对照组相比,共培养12 h时,1∶50共培养组细胞增殖活性升高(P<0.05),1∶1共培养组、1∶100共培养组及1∶200共培养组细胞增殖活性低于对照组(P<0.05);共培养24 h、36 h、48 h时,各共培养组细胞增殖活性均低于对照组(P<0.05)。共培养24 h时,1∶1共培养组及1∶50共培养组细胞凋亡率及FAF1 m RNA的相对表达量与对照组比较,差异无统计学意义(P均>0.05);1∶100共培养组及1∶200共培养组细胞凋亡率明显升高,FAF1 m RNA的相对表达量较对照组明显降低(P<0.05)。结论 Hp感染可导致胃癌细胞增殖凋亡失衡,下调胃癌细胞FAF1 m RNA的表达,FAF1m RNA的表达量与Hp的感染浓度有关,FAF1 m RNA的表达下调可能是Hp致胃癌发生的机制之一。
- 冯洁刘爱群袁燕玲葛莲英
- 关键词：胃肿瘤幽门螺杆菌增殖凋亡
- 过表达FAF1基因慢病毒构建及对人胃癌细胞凋亡影响被引量：2
- 2014年
- 目的:构建过表达FAS相关因子1(fas-associated factor 1,FAF1)基因的慢病毒载体,探讨其对胃癌细胞凋亡的影响。方法:RT-PCR法扩增FAF1cDNA,亚克隆至GV218质粒中,经酶切及DNA测序鉴定正确以后,把含有FAF1基因的重组质粒与pHelper1.0和pHelper2.0载体质粒转染至293T细胞包装慢病毒。用包装好的慢病毒感染人胃癌细胞HGC-27,Real time PCR和蛋白质印迹法检测转染前后FAF1基因和蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡的改变。结果:FAF1基因扩增产物长度为1 996bp,酶切及测序结果鉴定GV218-FAF1质粒构建正确,成功包装的慢病毒滴度为2×108 TU/mL。HGC-27细胞转染FAF1过表达慢病毒48h后,细胞形态由长梭形变得不规则。过表达FAF1慢病毒转染组FAF1基因mRNA表达水平2.436±0.538,是阴性对照组1.086±0.226的2.24倍,P<0.001;是空载转染组1.182±0.381的2.06倍,P<0.001。过表达FAF1慢病毒转染组FAF1蛋白相对表达水平1.515±0.377,显著高于阴性对照组的0,P<0.001;也显著高于空载转染组的0,P<0.001。过表达FAF1慢病毒转染组凋亡率(84.66±5.92)%显著高于阴性对照组的(4.60±3.80)%,P<0.001;也显著高于空载转染组的(7.32±3.82)%,P<0.001。结论:成功构建并鉴定FAF1基因过表达慢病毒载体,FAF1基因表达上调使胃癌细胞凋亡增加。
- 冯洁袁燕玲刘爱群葛莲英
- 关键词：胃肿瘤慢病毒细胞凋亡印迹法
