刘劲松
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国科学院广州生物医药与健康研究院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 重组人SNX9蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及性质分析被引量：3
- 2008年
- SNX9是近年发现的一种蛋白分选与转运蛋白,属于SNX家族。将原核表达载体pET-SNX9重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达可获得分子量为70kDa的融合蛋白,Western blotting结果证明此蛋白即为目的蛋白,经检测融合蛋白主要以可溶形式表达。表达产物通过亲和层析和分子筛层析两步纯化,可以获得纯度超过95%的SNX9融合蛋白。分子筛层析中蛋白的出峰体积显示SNX9融合蛋白是以二聚体形式存在。Native-PAGE和动态光散射实验均显示其具有良好的均一性。热稳定性实验表明SNX9蛋白在15℃以下基本稳定。这些信息对进一步研究SNX9的结构和功能具有重要的指导意义。
- 尤晓娟刘劲松
- 关键词：SORTING可溶表达纯化均一性
- A型流感病毒H5N1的M2离子通道稳定细胞株的建立
- 2008年
- A型流感病毒H5N1的M2离子通道(H5M2)基因经优化后由人工合成,适合于哺乳动物细胞中表达。通过酶切克隆于pcDNA4质粒,并在HEK293细胞中建立稳定细胞株。Western blotting和免疫荧光证实H5M2在稳定细胞中只有在四环素诱导下才能表达,并经膜片钳证实在HEK293细胞中表达的H5M2具有H+通道活性,为M2离子通道功能的研究和M2离子通道阻断剂筛选方法的建立提供了参考。
- 孙娟娟李楚芳徐伟李志远刘劲松陈凌
- 关键词：流感病毒
- 人类APPL2蛋白PTB结构域的表达纯化及其功能的研究
- 2009年
- APPL蛋白,包括APPL1和APPL2,是细胞膜与细胞核之间重要的信息传递者,同时也为细胞增殖所必需。在大肠杆菌表达体系中,表达并纯化了人类APPL2蛋白PTB结构域,然后以此为靶标,利用噬菌体展示技术筛选相互作用肽段。经过3轮筛选,随机挑取48个噬菌体单克隆,进行ELISA分析。7肽序列ERLPFFY和YLTSPKH被证明能与PTB结构域特异地结合。对P3-GST的野生型和将每个氨基酸突变为丙氨酸的突变型的ELISA检测,显示每个氨基酸均是结合所必需的。这些对有关APPL2的PTB结构域功能的进一步研究有参考意义。
- 梁宁石珠亮王东业魏国威孔祥平陈昌友刘劲松徐爱民吴东海
- 关键词：PTB纯化噬菌体展示
