刘培庆
- 作品数：20 被引量：149H指数：9
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- NO对新生大鼠心肌细胞PKC活性的影响
- 2002年
- 利用培养新生大鼠心肌细胞 ,检测NO前体L -精氨酸 (L -arginine ,L -Arg)和NO供体硝普钠 (sodiumnitroprus side ,SNP)对PKC活性的影响 ,并探讨内、外源性NO在PKC激动剂佛波指 (phorbol 12 -myristate 13-acetate ,PMA)激活PKC中的作用 .实验结果表明 :培养基中加入L -Arg ,PKC活性呈剂量依赖性降低 ;用L -Arg进行预处理 ,30min后加入PMA ,PKC活性明显降低 ,与单纯PMA组相比有显著差异 ;NOS抑制剂L -NAME本身对基础状态PKC活性无明显影响 ,但可阻断L -Arg对上述 2个效应的影响 ;培养液中加入NO供体SNP ,PKC活性呈剂量依赖性降低 ;用SNP预处理心肌细胞 ,5min后加入PMA ,PKC活性与单纯PMA组相比有显著性差异 .以上结果表明 ,内、外源性NO均具有剂量依赖性抑制PKC活性的作用 ,PKC可能是NO对心肌细胞作用的胞内信号传导通路的关键部位或重要信号分子之一 ;L -Arg通过NOS先生成NO ,NO再对PKC起抑制作用 .
- 符史干吉丽敏谢协驹刘培庆潘敬运鲁伟
- 关键词：心肌细胞培养一氧化氮蛋白激酶C佛波酯
- ERKs及细胞内游离钙在内皮素-1诱导心肌细胞肥大反应中的作用被引量：13
- 2001年
- 目的 :研究细胞外信号调节激酶 (ERKs)及细胞内游离钙 ([Ca2 + ]i)在内皮素 - 1 (ET - 1 )介导心肌细胞肥大反应中的作用及机制。方法 :利用培养的新生大鼠心肌细胞 ,①以蛋白合成速率、蛋白含量及细胞表面积为心肌肥大反应的指标 ;②用滤纸法测定ERKs活性 ;③用Fura - 2 /AM作为钙荧光指示剂测定心肌 [Ca2 + ]i浓度。结果 :①ET - 1浓度依赖性增加新生大鼠心肌细胞蛋白质含量和心肌细胞表面积、ERKs活性及 [Ca2 + ]i浓度 ,以上作用可被ETA 受体拮抗剂BQ1 2 3所完全抑制 ,被百日咳毒素 (PTX)部分抑制 ,而ETB 受体拮抗剂BQ788则无效 ;②ERKs激酶特异性抑制剂PD980 5 9可完全抑制ET - 1激活ERKs的作用 ,钙通道拮抗剂硝苯地平可明显抑制ET - 1介导的[Ca2 + ]i浓度增加 ,但二者皆仅部分抑制ET - 1介导的心肌细胞肥大反应 ;③蛋白激酶C(PKC)选择性抑制剂stau rosporine并不能明显抑制ET - 1介导的ERKs激活 ,但可抑制ET - 1介导的的 [Ca2 + ]i浓度增加及心肌细胞肥大反应。结论 :ET - 1主要通过ETA 受体并经PTX敏感的G -蛋白介导心肌细胞肥大反应 ,该作用至少涉及两条途径 :①通过PKC介导的心肌 [Ca2 + ]i浓度增加 ;②不通过PKC介导的ERKs激活。
- 鲁伟刘培庆徐江王庭槐龚素珍潘敬运
- 关键词：内皮缩血管肽类肥大蛋白激酶C
- 一氧化氮在血管紧张素Ⅱ激活蛋白激酶C中的作用被引量：9
- 2003年
- 实验在培养新生大鼠心肌细胞中检测NO前体L 精氨酸 (L Arg)和NO供体硝普钠 (SNP)对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )激活蛋白激酶C (PKC)的作用 ,以探讨心肌细胞PKC水平的信号转导途径。实验结果如下 :(1)无血清DMEM培养心肌细胞 2 4h后加入AngⅡ ,PKC活性呈剂量依赖性增高 ;(2 )培养基中加入L Arg ,PKC活性呈剂量依赖性降低 ;(3 )用L Arg 10 0 μmol/L进行预处理 ,3 0min后分别加入AngⅡ 0 1μmol/L或PMA 10μmol/L ,PKC活性均明显降低 ,与单纯AngⅡ组和单纯PMA组相比均有显著性差异 ;用NOS抑制剂L NAME预处理后 ,再加入L Arg ,可明显阻断L Arg对上述两个效应的影响 ;(4)培养液中加入NO供体SNP ,PKC活性呈剂量依赖性地降低 ;(5 )用SNP 10 μmol/L预处理心肌细胞 ,5min后分别加入AngⅡ或PMA ,PKC活性分别与单纯AngⅡ和单纯PMA组相比均明显降低。以上结果表明 ,AngⅡ能剂量依赖性激活PKC ,而NO可剂量依赖性抑制PKC活性 ;NOS参与L Arg抑制AngⅡ或PMA激活PKC的作用。这些观察提示 ,NO抑制AngⅡ对心肌细胞的作用可能是通过抑制PKC活性实现的 ,PKC可能是NO和AngⅡ在心肌细胞内信号转导的交汇点 (crosstalk)。
- 符史干谢协驹吉丽敏刘培庆潘敬运鲁伟
- 关键词：心肌细胞培养一氧化氮蛋白激酶C
- MKP-1在血管紧张素Ⅱ导致心肌肥大反应中的调控作用被引量：8
- 2000年
- 本研究主要从丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶 1(MKP 1)角度 ,研究丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)信号途径在血管紧张素Ⅱ介导的新生大鼠心肌细胞肥大反应中的作用及调控机制。实验以心肌细胞蛋白合成速率、蛋白含量及细胞表面积作为心肌肥大反应的指标 ,以凝胶内MBP原位磷酸化测定MAPK活性 ,以免疫印迹法 (Westernboltting)分别测定MKP 1及磷酸化p44MAPK、p42MAPK蛋白表达。结果发现 :(1)AngⅡ (10 -7mol/L)处理 48h ,心肌细胞 3H 亮氨酸掺入率、蛋白含量及细胞表面积明显增加 ,AngⅡ增加 3H 亮氨酸掺入的作用可被血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1受体 )拮抗剂CV11974(10 -6mol/L)明显抑制 (抑制 85 % ) ,被MAPK激酶 (MEK)特异性抑制剂PD0 980 5 9(5× 10 -5mol/L)部分抑制 (抑制 32 5 % ) ;(2 )CV11974或PD0 980 5 9可明显抑制AngⅡ介导的磷酸化MAPK蛋白表达及MAPK酶活性 (以γ 32 P ATP掺入表示 ) ;(3)以磷酸化MAPK蛋白表达反映MAPK活性 ,可见AngⅡ处理心肌细胞5min ,MAPK活性即开始增加 ,30min左右达到高峰 ,2h后基本恢复正常 ;而MKP 1蛋白表达 30min即见增加 ,持续 2h以上 ;(4 )用放线菌素D (actinomycinD)处理心肌细胞 30min可明显抑制MKP 1的表达 ,同时使AngⅡ致磷酸化MAPK蛋白表达时间延长至 2h以上。
- 刘培庆鲁伟王庭槐潘敬运
- 关键词：MKP-1MAPK
- 新生鼠心室成纤维细胞条件培养液增加心肌细胞搏动频率的作用被引量：4
- 2000年
- 目的和方法 :利用细胞培养和RT PCR技术研究新生大鼠心脏成纤维细胞增加心肌细胞搏动频率的作用。结果 :成纤维细胞条件培养液在 48h内能明显增加心肌细胞的搏动频率 ,并具有时间依赖性和剂量依赖性 ,内皮素 1(ET 1)ETA 受体拮抗剂BQ12 3 能部分阻断成纤维细胞条件培养液增加心肌细胞搏动频率作用 ,而血管紧张素ⅡATl 受体拮抗剂CV 11974和α 肾上腺素受体拮抗剂Regitin却无此效果 :RT PCR的结果显示心室成纤维细胞、心肌细胞和皮肤成纤维细胞均有 ppET 1mRNA的表达 ,心室成纤维细胞中表达的丰度大于心肌细胞和皮肤成纤维细胞。百日咳毒素 (PTX)也能部分阻断成纤维细胞条件培养液增加心肌细胞搏动频率的作用。结论 :心室成纤维细胞能分泌ET 1等生物活性物质 ,对心肌细胞具有正性变时作用 ,同时提示分泌ET 1的功能并非心室成纤维细胞所特有 。
- 龚素珍刘培庆杨丹鲁伟潘敬运
- 关键词：成纤维细胞心肌细胞搏动频率ET-1
- 心室成纤维细胞条件培养液促进成纤维细胞增殖
- 2000年
- 目的 :探讨心室成纤维细胞条件培养液促进成纤维细胞自身增殖作用。方法 :利用成纤维细胞培养、同位素掺入率测定和RT PCR方法。结果 :心室成纤维细胞条件培养液能明显增加细胞自身的 [3H] 胸腺嘧啶核苷的掺入率 ,并具有剂量依赖性 ;促进细胞自身的c fos基因的表达 ,刺激后 1h达高峰。ETA 受体拮抗剂BQ12 3能部分阻断条件培养液增加成纤维细胞增殖的作用 ,而AT1受体拮抗剂CV11974和 (α 肾上腺素受体拮抗剂regitin无此效果。结论 :心室成纤维细胞能自分泌内皮素等生物活性物质 。
- 龚素珍刘培庆潘敬运
- 关键词：成纤维细胞胸腺嘧啶核苷MRNA条件培养液C-FOS基因
- 新生大鼠心室成纤维细胞条件培养液的促心肌细胞肥大作用被引量：14
- 2000年
- 利用新生大鼠心室成纤维细胞条件培养液孵育心肌细胞 ,证实成纤维细胞条件培养液能明显增大心肌细胞的表面积 ,增加心肌细胞的蛋白含量和 [3H] 亮氨酸 ( [3H] Leu)的掺入 ,上述作用以第 3天的条件培养液作用最强 ,具有剂量依赖性。ETA 受体拮抗剂BQ12 3能部分阻断成纤维细胞条件培养液促进心肌细胞肥大的作用 ,而AT1受体拮抗剂CV11974和α 肾上腺素受体拮抗剂regitin却无此效果。结果提示 :成纤维细胞条件培养液中含有促使心肌细胞肥大的物质 ,这些物质可能是内皮素 (ET 1)等。百日咳毒素 (PTX)和staurosporine也能部分阻断成纤维细胞条件培养液促进心肌细胞肥大作用 。
- 龚素珍刘培庆鲁伟符史干潘敬运
- 关键词：成纤维细胞心肌细胞肥大
- 一氧化氮抑制AngⅡ介导的心肌肥大反应的信号机制被引量：18
- 2002年
- 本文主要利用培养的新生大鼠心肌细胞 ,从细胞学及分子生物学角度研究一氧化氮 (NO)信号系统在AngⅡ介导的心肌肥大反应中的作用及机制。实验以心肌细胞蛋白合成速率、心房钠尿肽 (ANP)的表达作为心肌肥大反应的指标 ,以硝酸盐及亚硝酸盐含量反映心肌细胞NO水平 ,以免疫印迹法测定MKP 1蛋白表达 ,以RT PCR测定eNOSmRNA水平。结果发现 :(1)L 精氨酸 (L Arg) 10、10 0 μmol/L分别增加心肌细胞NO水平 16 %及 31%,L Arg (10 0 μmol/L)还可增加心肌细胞eNOSmRNA表达 ,其作用可被NOS抑制剂 L NAME所抑制 ;(2 )L Arg (10 0 μmol/L)可降低AngⅡ (0 1μmol/L)诱导的心肌细胞ANPmRNA表达水平和蛋白合成速率 ,而在L Arg处理之前用针对MKP 1的反义寡核苷酸转染心肌细胞 ,蛋白合成速率明显增加 ,可取消L Arg的抑制作用 ,甚至超过AngⅡ组 ;(3)L Arg (10 0 μmol/L)明显增加MKP 1蛋白表达 ,比对照组增加 2 2 5 %,NOS抑制剂L NAME及蛋白激酶G(PKG)抑制剂KT 5 82 3皆可抑制L Arg诱导的MKP 1蛋白表达 ,分别抑制 88%、83%,而AngⅡ能增加L Arg诱导的MKP 1的表达 ,较对照组增加 36 5 %,增强了L Arg的作用。以上结果表明 ,NO抑制AngⅡ介导心肌肥大反应的机制可能是通过激活PKG ,促进MKP 1的表达 。
- 刘培庆鲁伟潘敬运
- 关键词：心肌细胞一氧化氮精氨酸
- 一氧化氮在17-β雌二醇抑制血管平滑肌细胞增殖和原癌基因c-fos表达中的作用被引量：7
- 2002年
- 实验利用大鼠血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecells ,VSMC)作为模型 ,观察 17 β雌二醇 (E2 )对VSMC增殖和原癌基因c fos表达的影响 ,并探讨VSMC源性一氧化氮 (NO)在其中的作用。检测指标包括NO释放的测定、细胞计数、3 H Tdr掺入、噻唑蓝 (MTT)测定和c fosmRNA表达。结果显示 ,E2 ( 10 12 ～ 10 -8mol/L)呈浓度依赖性地促进VSMC中NO的释放 ;10 -8mol/LE2 能明显抑制 10 %小牛血清 (FCS)和 10 -7mol/L内皮素 1(ET 1)诱导的细胞增殖和DNA合成 ,E2 的抑制作用均可被雌激素受体 (ER)拮抗剂tamoxifen ( 10 -7mol/L)和一氧化氮合酶抑制剂L NAME( 10 -6 mol/L)明显减轻 ;E2 ( 10 -8mol/L)可明显抑制 10 -7mol/LET 1诱导的VSMCc fos表达 ,这种抑制作用可被L NAME ( 10 -6 mol/L)明显减轻。这些结果提示E2 能抑制VSMC增殖和原癌基因c fos表达 ,这和促进VSMC的NO释放密切相关 。
- 杨丹谈智刘培庆潘敬运王庭槐
- 关键词：血管平滑肌细胞一氧化氮C-FOS原癌基因表达细胞增殖
- 醛固酮促进心室成纤维细胞增殖作用被引量：3
- 2001年
- 探讨醛固酮促进心室成纤维细胞增殖作用。方法 :采用 [3H] TdR掺入率测定和RT PCR。结果 :醛固酮 (1× 10 -9～ 1× 10 -6)mol/L能明显促进心室成纤维细胞的 [3H] TdR掺入率 ,且呈剂量依赖方式 ;醛固酮孵育 15min ,可见c fosmRNA的表达 ,至 1h表达达高峰 ,以后逐渐降低 ,醛固酮受体拮抗剂螺旋内酯能阻断醛固酮的作用。结论 :醛固酮能促进心室成纤维细胞增殖 。
- 龚素珍刘培庆鲁伟谈智符史干潘敬运
- 关键词：醛固酮螺旋内酯C-FOSMRNA增殖作用
