刘旭东
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中山大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- DC-SIGN与病原体感染的研究进展被引量：1
- 2007年
- DC-SIGN是主要分布在树突状细胞(DC)表面的一个外源性凝集素超家族分子,通过依赖Ca2+的碳水化合物识别区域(CRD)形成寡聚体,增强与抗原的结合能力。DC-SIGN主要与细胞间黏附分子(ICAM)-2、ICAM-3相互作用,介导细胞之间的相互接触,同时也参与DC细胞对病原体的识别和摄入。DC-SIGN对人类免疫缺陷病毒(H IV)、丙型肝炎病毒(HCV)的感染和传播起到重要作用,不仅是病原体结合的一个受体,还使病毒藏匿于DC细胞逃避溶酶体的降解,促进病毒传播。同时,DC-SIGN可以与多种病原体结合,在多种感染性疾病中发挥重要作用。对病原体和DC-SIGN之间的相互作用及DC功能的进一步研究将有助于抗感染治疗。本文就DC-SIGN与感染性疾病的相关研究进展作一综述。
- 刘旭东李刚
- 关键词：DC-SIGNC型凝集素病原体感染
- 含阿德福韦耐药基因的HBV全基因组载体的构建及鉴定
- 2008年
- 阿德福韦酯口服后可迅速水解为阿德福韦而发挥抗病毒作用。阿德福韦在体外具有抗HBV、其他逆转录病毒和疱疹病毒等广谱抗病毒活性。对HBV的抑制效果不如拉米夫定和恩替卡韦。但是阿德福韦可作为上述两种药物耐药后的备选药物。同其他核苷类药物一样，阿德福韦基因耐药后出现的序列变异也在HBV多聚酶的逆转录酶区，但位点不同。rtN236T和rtAl81V变异是与阿德福韦耐药有关的常见变异位点。耐药的产生会导致氨基转移酶、病毒载量的升高和病情的进展，但这些变化的机制并不清楚。本研究构建含阿德福韦耐药位点的HBV全基因组质粒，以建立稳定的耐药细胞模型，为进一步研究耐药机制等奠定基础。
- 项凤梅卢建溪江一平李永伟王强刘旭东李刚
- 关键词：基因突变抗药性阿德福韦酯
- 含恩替卡韦耐药基因的HBV全基因组逆转录病毒载体的构建及包装被引量：1
- 2009年
- 目的:构建含恩替卡韦耐药基因的HBV全基因组逆转录病毒载体,同时进行逆转录病毒载体的包装,为进一步产生含恩替卡位耐药基因的假病毒,进一步感染肝源性细胞,进行耐药机制的研究做准备。方法:采用基因扩增、重组和克隆的方法,从构建好的含恩替卡位耐药基因的重组质粒中,扩增出含恩替卡位耐药基因的HBV全基因组,然后插到pLEGFP-N1载体上,再进行重组质粒的转化、提取、纯化和测序,然后将测序成功的重组质粒扩大培养,并转染PT67细胞,最后通过荧光倒置显微镜观察和提取细胞培养上清进行病毒DNA提取。结果:凝胶电泳分析血清HBVDNA扩增可见3.2kb条带,HBVDNA和pLEGFP-N1载体连接后可见10.1kb目的条带,该重组质粒双酶切后可见3.2kb和6.9kb目的条带。突变前质粒测序显示含有HBV基因型为C型血清型adr的全基因组,突变后测序证实存在HBV逆转录酶169、184、202、250位点的预期碱基突变。荧光倒置显微镜显示,转染后的PT67细胞有明显的荧光表达,培养上清DNA提取后,经过核酸分析仪检测,最后换算结果显示培养上清假病毒颗粒可达104-105/cfu。结论:成功构建了含恩替卡韦耐药基因的HBV全基因重组质粒,并进行了包装,产生了含恩替卡位耐药基因的假病毒颗粒。
- 项凤梅卢建溪王强李永伟陈伟刘旭东李刚
- 关键词：肝炎病毒乙型恩替卡韦药物耐受病毒
- HBV全基因组逆转录病毒载体的构建及鉴定
- 2008年
- 目的构建HBV全基因组逆转录病毒载体,并进行酶切鉴定和测序。方法用合适的引物,通过PCR方法扩增pBlue Script sk(-)-HBV载体上的HBV全基因组,分别用HindⅢ和SalⅠ进行PCR产物和pLEGFP-N1载体的双酶切,用连接酶将HBV DNA和载体进行连接,转化连接产物后,进行质粒提取、酶切和测序鉴定。结果PCR产物凝胶电泳可见3.2 kb条带。pLEGFP-N1-HBV重组质粒酶切结果电泳后,可看见6.9 kb和3.2 kb的条带,测序结果表明重组质粒含有HBV全基因组。结论成功构建了HBV全基因组逆转录病毒载体,为下一步形成稳定的细胞模型奠定基础。
- 项凤梅卢建溪顾琳陈伟王强李莉李永伟刘旭东李刚
- 关键词：HBV逆转录病毒载体全基因组
- 含拉米夫定耐药基因的乙型肝炎病毒全基因组载体的构建及鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的建立含拉米夫定耐药基因的乙型肝炎病毒(HBV)全基因组载体,为进一步建立耐药细胞模型奠定基础。方法采用基因扩增、重组和克隆的方法,提取HBV-DNA进行扩增,插入pBluescript-SK(-)载体,酶切和测序鉴定重组质粒含有HBV-DNA全基因组后,以该重组质粒的多聚酶逆转录酶区为模板,设计引入突变位点的引物,聚合酶链反应(PCR)进行定点突变,突变产物经DpnⅠ消化后,转化到感受态细胞DH5α,最后将提取的突变质粒进行测序鉴定。结果凝胶电泳分析血清HBV-DNA扩增可见3.2kb条带,HBV-DNA和pBluescript-SK(-)载体连接后可见6.9kb目的条带,该重组质粒双酶切后可见3.2kb和2.9kb目的条带,突变PCR产物经DpnⅠ消化后可见明显条带。突变前质粒测序显示含有HBV基因型为C型血清型为adr的全基因组,突变后测序证实存在HBV逆转录酶173、180、204位点的预期碱基突变。结论通过测序鉴定,成功构建了拉米夫定耐药HBV全基因组载体。
- 项凤梅卢建溪王强李永伟陈伟刘旭东李刚
- 关键词：乙型肝炎病毒全基因组定点突变拉米夫定耐药
