刘毅
- 作品数：28 被引量：60H指数：5
- 供职机构：江西师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省自然科学基金江西省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程自动化与计算机技术更多>>
- 氯溴异氰尿酸对斑马鱼胚胎发育及免疫毒性的影响
- 尽管氯溴异氰尿酸已被广泛用作农业除草剂,但其对水生生物的有害毒性仍然很少见。在这项研究中,斑马鱼胚胎在受精后10至96小时(hpf)暴露于几种浓度的氯溴异氰尿酸(0、30、40和50毫克/升)。暴露于氯溴异氰尿酸后,体长...
- 刘毅郭静杨凤洁邓云云彭宇阳孟云龙刘文晋程波付建平廖信军陆辉强
- 关键词：氯溴异氰尿酸发育毒性免疫毒性氧化应激斑马鱼
- 中华鳖IRF4基因克隆及免疫功能研究被引量：1
- 2019年
- 干扰素调节因子IRF4基因仅表达于免疫相关细胞,在先天性免疫和特异性免疫中发挥重要作用。本研究根据中华鳖高通量测序预测的IRF4基因序列(GenBank登录号:XM_014581444),设计特异性引物扩增片段验证其编码区;通过荧光定量检测IRF4基因在健康中华鳖中组织表达情况以及脂多糖、聚肌胞苷酸诱导后在外周血淋巴细胞中的表达情况;构建真核表达载体p3xflag-IRF4,检测过表达IRF4基因后细胞对中华鳖虹彩病毒的敏感性,以及对干扰素启动子、NF-κB启动子的活性。试验结果显示,IRF4基因编码区和GenBank中序列完全相同,其推测的氨基酸序列含有1个DNA结合结构域和1个IRF相关结构域;荧光定量结果分析显示,IRF4基因表达于所检测的组织和器官,其中在血液、肝、脾中表达较高,脂多糖和聚肌胞苷酸均能诱导外周血淋巴细胞中IRF4基因的表达;过表达IRF4基因后降低细胞对中华鳖虹彩病毒的敏感性,过表达IRF4基因能显著诱导干扰素启动子活性,抑制NF-κB启动子活性。上述结果为更深入研究中华鳖IRF4参与机体免疫应答提供基础。
- 付建平陈丹婷赵昕刘毅
- 关键词：中华鳖干扰素NF-ΚB
- 塔里木河流域绿洲城镇发展与水土资源效益的时空格局演化研究
- 通过Global Moran's I指数和Getis-Ord Gi指数并构建协调发展度模型对塔里木河流域绿洲城镇1995、2000、2005和2008年四个时间点的土地资源效益、水资源效益和城镇化水平的集聚扩散状...
- 杨宇刘毅张小雷董雯
- 热休克、Poly I:C上调草鱼GRP78基因表达被引量：4
- 2009年
- 葡萄糖调节蛋白78(GRP78)是细胞内一种应急蛋白,它通过对细胞内、外胁迫因子产生强烈的应答而调节内质网稳态.草鱼(Ctenopharyngodon idellus)GRP78克隆于草鱼肝肾cDNA文库,全长2490bp.其中,5'非编码区为155bp,含有7个热休克元件,3'非编码区为373bp,最大开放阅读框为1962bp,编码653个氨基酸.序列分析表明,草鱼GRP78的N端包含3个HSP70家族的签名序列,C末端为内质网蛋白滞留信号KDEL,草鱼GRP78与人及其它动物的同源性很高.适应性进化分析也显示GRP78非常保守,受到强烈的功能约束,说明该蛋白质在进化中非常重要.RT-PCR分析表明,相对于本底水平,34℃热激和Poly I:C诱导后,草鱼GRP78在肝、肾等组织中的表达明显上调.
- 吴初新刘毅马梅生王丽坤胡成钰
- 关键词：热休克POLYGRP78草鱼胁迫
- 福尔马林灭活柱状黄杆菌对草鱼免疫相关基因表达的影响被引量：11
- 2008年
- 在本研究中,将福尔马林灭活的柱状黄杆菌菌苗(FKG4)经腹腔注射免疫草鱼,以注射灭菌PBS作对照,分别在免疫后1、7、15和28d,提取受免鱼和对照鱼肝脏、脾脏和头肾3种组织中的总RNA并反转录成cDNA,利用Real-time PCR方法对不同组织中C-反应蛋白(CRP)、主要组织相容性复合体I(MHCⅠ)、肿瘤坏死因子(TNFα)、白介素1(IL-1β)、白介素8(IL-8)、Ⅰ型干扰素(IFNⅠ)等6种免疫相关基因的表达进行定量分析。结果发现CRP在受免鱼肝脏中的表达于免疫后1、7d显著高于对照鱼,而在脾脏与头肾中的表达未出现显著差异;MHCⅠ在受免鱼3种组织中的表达于免疫后1、7、15d都显著高于对照鱼;TNFα在3种组织中的表达水平都较低,但都于免疫后1、7d显著高于对照鱼;IL-1β在3种组织中的表达于免疫后1d都显著高于对照鱼,但只有在头肾中的表达在免疫后7d时仍保持显著差异;IL-8在3种组织中的表达都只是于免疫后1d显著高于对照鱼;TNFα、IL-1β及IL-8等3种炎症因子的基因表达在免疫后15d都恢复到对照鱼的水平;而IFNⅠ在3种组织中的表达与对照组之间未出现显著差异。结果表明,FKG4注射免疫可以显著提高草鱼3种组织中与抗菌免疫相关的基因表达,从而增强鱼体抵抗细菌性病原的免疫力。
- 刘毅隗黎丽李莉李楠姚卫建聂品
- 关键词：柱状黄杆菌草鱼免疫相关基因实时荧光PCR
- 翘嘴鳜髓过氧化物酶基因克隆及重链序列的原核表达被引量：2
- 2009年
- 利用RT-PCR和RACE-PCR方法，从翘嘴鳜中克隆出髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）cDNA全长。其开放阅读框有2292个核苷酸，编码763个氨基酸的蛋白。虽然序列相似性分析发现该蛋白与哺乳动物MPO相似性为64％-65％，但分子质量大小相近。翘嘴鳜含有1个与人MPO相似的血红素基，1个保守的Ca^2＋结合位点，6个分子内二硫键，以及6个糖基化位点。由此推测翘嘴鳜MPO蛋白的空间结构及催化机制可能与哺乳动物的相似。将翘嘴鳜MPO的部分cDNA序列连接到pEF-32a-c（＋）载体上，成功构建了1个重组表达质粒pET-MPO，该质粒在大肠杆菌（DE3）中获得了高效表达。另外，利用重组蛋白N末端带有的6×His标签，通过Ni2-NTA柱纯化获得了翘嘴鳜MPO重组蛋白。
- 胡宝庆刘毅文春根
- 关键词：髓过氧化物酶基因克隆翘嘴鳜原核表达
- 可信计算授权数据管理与安全协议研究
- 针对TCG规范TPMv1.2的密钥管理、授权机制和授权协议存在的管理复杂、功能重叠以及密钥同步问题,提出了一种新的授权数据管理方案,一个授权数据对应多个实体,简化了管理复杂性,同时,构造授权数据列表,解决了密钥同步问题,...
- 张兴张晓菲刘毅沈昌祥
- 关键词：可信计算密钥管理授权机制安全协议通信数据
- 文献传递
- 三角帆蚌热休克蛋白70基因克隆及其表达分析被引量：3
- 2017年
- 对三角帆蚌HSP70基因序列进行全长克隆及其分子生物学分析,并检测其在不同水温刺激下鳃组织中的表达变化。通过高通量转录组测序获得三角帆蚌HSP70基因(Hc HSP70)长片段,采用3′RACE对其进行了3′末端克隆,经拼接得到Hc HSP70 c DNA全长序列。采用多种分子生物学软件对Hc HSP70 c DNA全长序列进行了特征分析,采用实时荧光定量PCR技术检测了其组织分布,并结合Western-blot技术检测蚌鳃中该基因m RNA与蛋白经不同水温刺激后的表达变化。结果显示,Hc HSP70 c DNA全长为2298 bp,其中开放阅读框为1974 bp,编码657个氨基酸。预测分子量大小为71.6 Ku,p H7.0时的理论等电点为5.61。氨基酸序列分析表明,Hc HSP70氨基酸序列含HSP70家族的3个标签序列(I9DLGTTYS16、I197FDLGGGTFDVSIL210和I336VLVGGSTRIPKVQK350),与长牡蛎及泥蚶的HSP70同源性最高(91%)。实时荧光定量PCR检测结果显示,Hc HSP70在鳃、性腺、肝胰腺、外套膜及肌肉等5种被检组织中均有表达,以肝胰腺中的表达水平最高。实时荧光定量PCR与Western-blot技术检测皆表明,蚌鳃组织中Hc HSP70基因与蛋白的表达量在37℃时达到最高,而在40℃水温刺激下表达水平下调至正常值,表明其在适应高温刺激时发挥了重要作用。
- 吴圣楠隗黎丽李海军付建平刘毅
- 关键词：三角帆蚌热休克蛋白70基因表达
- 黄颡鱼PGRP-L基因克隆及其对爱德华氏菌的反应(英文)被引量：2
- 2016年
- 为了研究肽聚糖识别蛋白家族(Peptidoglycan recognition proteins,PGRPs)在黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)先天免疫应答中发挥的作用,根据NCBI中斑马鱼(Danio rerio)和虹鳟(Oncorhynchus mykiss)PGRP-L的基因信息,采用简并引物和RACE方法从黄颡鱼肝脏中克隆得到了一个长型PGRP(Pf PGRP-L)基因.Pf PGRP-L基因的全长c DNA序列大小为1617 bp,其中5′和3′非翻译区的长度分别为135和72 bp,开放阅读框为1410 bp,编码469个氨基酸.同源性和系统进化分析表明,黄颡鱼PGRP-L与虹鳟的同源性为60%,与脊椎动物的PGLYRP2或PGRP-L聚在一起.半定量RT-PCR分析发现Pf PGRP-L基因在黄颡鱼鳃、胸腺、肝脏、脾脏、肠道、肾脏、头肾、心脏、血液和肌肉组织中均有分布,但在肠道和脾脏中的表达量较为丰富,而在肌肉和血液中表达则很少.用爱德华氏菌刺激后,Pf PGRP-L在肝脏、脾脏、肠道及头肾中的表达明显上调.结果表明,Pf PGRP-L在黄颡鱼抵抗病原菌中具有重要作用.
- 隗黎丽刘毅吴华东周秋白
- 关键词：克隆爱德华氏菌黄颡鱼
- 鮰爱德华氏菌灭活疫苗对黄颡鱼免疫效果被引量：7
- 2014年
- 为建立一种环境友好型防治黄颡鱼鮰爱德华氏菌病的方法,利用从患病黄颡鱼脑部组织分离出的致病菌株JXHS制备黄颡鱼鮰爱德华氏菌的灭活疫苗。以平均体重为15~20g的健康黄颡鱼为实验对象,免疫组腹腔注射0.2mL浓度为3.0×109 CFU·mL-1的免疫原,对照组注射等量0.65%灭菌生理盐水,分别在注射7、14、21、28d后随机从两组各取30尾实验鱼,尾静脉采血,检测免疫鱼的血清凝集抗体效价、白细胞吞噬活性(PP)、吞噬指数(PI)、溶菌酶(LSZ)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)等免疫指标的变化。结果表明:鮰爱德华氏菌灭活疫苗对黄颡鱼具有较强的免疫原性,与对照组相比,血清凝集抗体效价在免疫14、21和28d显著升高;PP、PI和LSZ在所有采样时间点均显著上升;LSZ在免疫7、14、21和28d均显著上升;AKP在免疫14、21和28d活力显著上升;ACP在免疫7、14和21d活力显著上升。血清凝集抗体效价、PP、PI、LSZ和AKP均在21d达到峰值,而ACP在免疫7d后达到峰值。免疫30d后鮰爱德华氏菌攻毒结果表明,鮰爱德华氏菌灭活疫苗对黄颡鱼有较高的免疫保护作用,免疫保护率达到70.2%。由此可见,利用从病鱼体内分离的鮰爱德华氏菌菌株制备的灭活疫苗可提高黄颡鱼的免疫力并有效抵御鮰爱德华氏菌的攻击。
- 隗黎丽刘毅周秋白熊六凤吴华东
- 关键词：黄颡鱼灭活疫苗免疫保护
