刘铭
- 作品数：11 被引量：30H指数：3
- 供职机构：山西医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山西省青年科技研究基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 心肌细胞中微小核糖核酸let-7c对肌营养素基因表达的调控作用
- 2016年
- 目的:探讨心肌细胞中微小核糖核酸(mi R)let-7c(mi R-let-7c)对肌营养素基因表达是否具有调控作用以及可能的作用机制。方法:首先构建携带肌营养素基因3'非编码区(3'-UTR)片段的荧光素酶报告基因载体,与mi R-let-7c前体共转染Hela细胞,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性以验证mi R-let-7c与肌营养素基因的靶向调控关系。进而培养大鼠心肌细胞H9c2,Taqman实时定量聚合酶链式反应(PCR)法检测mi R转染效果,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测mi R-let-7c及mi R-let-7c抑制物转染心肌细胞后肌营养素蛋白表达,以及心肌肥厚相关信号通路分子核转录因子-κB(NF-κB)的活性变化。结果:荧光素酶活性实验结果表明,与重组荧光素酶报告基因表达载体(p MIR-MTPN)+mi R前体阴性对照组相比,p MIR-MTPN+mi R-let-7c前体组荧光素酶活性显著降低[(59.30±9.90)%vs(98.10±15.10)%]。Western blot结果表明,mi R-let-7c前体组与mi R阴性对照组相比,肌营养素蛋白表达水平显著降低([0.28±0.05)vs(0.90±0.09)],此外,NF-κB蛋白水平显著降低([0.25±0.06)vs(0.75±0.07)];相反,mi R-let-7c抑制物组与抑制物阴性对照组相比,肌营养素蛋白表达水平显著升高[(1.14±0.09)vs(0.44±0.09)],同时,NF-κB蛋白水平也显著升高[(1.09±0.05)vs(0.71±0.06)],差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-let-7c能够通过作用于3'UTR区域,抑制肌营养素基因表达,并影响心肌肥厚关键信号通路分子NF-κB的活性。
- 王玉瑶王玉璇翟翔刘铭解军
- 关键词：微小核糖核酸核转录因子-ΚB
- miR-132-3p过表达对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响被引量：3
- 2020年
- 背景:机械牵引力能够影响MC3T3-E1细胞的增殖分化过程,并引起细胞内miR-132-3p的差异表达。然而,牵引力是否通过调控miR-132-3p的表达来影响成骨细胞增殖分化仍需进一步研究。目的:明确12%牵引力作用下MC3T3-E1细胞中成骨分化标志因子及miR-132-3p表达变化,并进一步探讨miR-132-3p对细胞增殖分化的影响。方法:MC3T3-E1细胞分别加载0%,12%牵张应力,检测应力加载后碱性磷酸酶活性、骨钙蛋白及miR-132-3pmRNA的表达水平;细胞内瞬时转染miR-132-3p模拟物及其阴性对照,qRT-PCR检测转染后碱性磷酸酶、骨钙蛋白、Runt标志转录因子2mRNA的表达,CCK-8法检测miR-132-3p对细胞增殖能力的影响。结果与结论:①12%牵张应力作用下,MC3T3-E1细胞中碱性磷酸酶活性、骨钙蛋白mRNA表达水平下调(P<0.01),miR-132-3p表达水平显著升高(P<0.05);②细胞内转染miR-132-3p后,miR-132-3p模拟物组成骨分化标志因子碱性磷酸酶、骨钙蛋白、Runt标志转录因子2mRNA表达水平显著降低(P<0.05);③相比于阴性对照组,miR-132-3p模拟物转染24,48,72h后细胞增殖能力明显降低(P<0.001),且在转染48h后降低最明显;④结果说明12%周期性循环牵张应力能够通过过表达miR-132-3p负向调节MC3T3-E1细胞的增殖和成骨分化。
- 孙芬刘名燕刘铭孙心旖冯云霞
- 关键词：MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶骨钙蛋白细胞增殖
- TRAP1在结肠癌组织中的表达与病理特征和患者预后的关系及其可能的机制被引量：1
- 2023年
- 目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)在结肠癌组织和细胞中的表达及其与临床病理特征和患者预后的关系和相关分子机制。方法:通过TCGA和GEO数据全面分析TRAP1在结肠癌中的表达及其与临床病理特征和患者预后的关系,选取2020年10月至2021年03月间在山西医科大学第一医院手术切除的10例结肠癌组织及相应癌旁组织标本,用IHC染色法检测中国人结肠癌组织中TRAP1的表达进行验证,运行R包(survival和survminer)进行Kaplan-Meier生存分析;在线分析TRAP1蛋白的信号肽及穿膜结构域,通过基因富集分析软件进行GO分析和KEGG分析。培养结肠癌SW480和SW620细胞,将si-NC和si-TRAP1转染结肠癌细胞,实验分为空白对照组、si-NC组和si-TRAP1组,采用qPCR法检测转染后各组结肠癌细胞中TRAP1的表达,FCM检测转染后各组细胞的细胞周期和凋亡情况。结果:与癌旁组织比较,TRAP1在结肠癌组织中呈高表达(P<0.01),TRAP1表达水平与淋巴结转移有关联(P<0.05),TRAP1高表达组结肠癌患者5年OS率较低(P<0.05)。TRAP1蛋白属于细胞质蛋白,功能富集结果显示TRAP1及其相关分子与细胞周期、核糖体生物发生等信号通路有关(均P<0.01),TRAP1高表达组的结肠癌代谢重编程基因簇和线粒体蛋白输入基因簇水平升高(均P<0.01)。敲减TRAP1后,结肠癌细胞周期阻滞于G1期,细胞凋亡水平显著升高(均P<0.01)。结论:TRAP1在结肠癌组织中呈高表达,且与患者淋巴结转移和低OS率相关联,敲减TRAP1可阻滞结肠癌细胞周期并促进其凋亡。
- 畅靖嘉吴昊张文桃张昕彤胡艳芬刘铭李莉朱剑军
- 关键词：结肠癌SW480细胞SW620细胞
- 七年制医学生医学遗传学教学改革初探被引量：2
- 2014年
- 为适应现代教育理念,结合医学遗传学学科特点,对七年制医学生医学遗传学教学改革进行了初步探讨。教学中,采用传统讲授与PBL教学相结合的教学模式,提高了学生的学习兴趣,由原来的"学会"转变为"会学"的学习状态,极大的调动了学生自主学习的积极性和主动性,培养了学生分析判断的能力和综合素质。
- 张娟李莉刘铭杨建一
- 关键词：医学遗传学教学改革PBL教学
- 基于数据库分析HRH3在肝癌中的功能作用及临床意义被引量：1
- 2021年
- 目的通过公共数据库,分析组胺受体H3(histamine receptor H3,HRH3)在HCC中的表达水平,及其在HCC发展中的作用和临床预后的意义。方法基于ULACAN数据库,分析HRH3在肝细胞癌组织和正常肝组织中的表达水平;基于STRING数据库分析HRH3蛋白互作网络、基因功能注释和KEGG信号通路富集;基于Kaplan-Meier Plotter数据库,分析HRH3表达水平与HCC患者临床生存预后的关系。结果与正常肝组织相比,HRH3在HCC中表达水平显著升高(P<0.05)。HRH3表达水平与HCC患者性别、肿瘤分期、分化、淋巴结转移和TP53突变无关。HRH3与5-羟色胺受体家族成员和代谢型谷氨酸受体家族成员等有相互作用,其作为G蛋白偶联受体分子在细胞内传递信号。高表达HRH3与早期HCC患者良好预后相关,高表达HRH3与晚期HCC患者不良预后相关。结论在HCC组织中HRH3呈显著高表达,其作为G蛋白偶联受体在细胞内发挥生物学功能。HRH3在HCC早期发生阶段可能发挥抑癌作用,而在HCC晚期阶段发生促癌功能,具体作用机制有待进一步研究。
- 胡艳芬张文桃朱剑军吴昊刘铭
- 关键词：肝细胞癌公共数据库
- G蛋白耦联受体C家族6组A亚型在前列腺癌细胞增殖和凋亡中的作用被引量：5
- 2019年
- 目的前列腺癌(PCa)在我国的发病率逐年上升。G蛋白耦联受体C家族6组A亚型(GPRC6A)是近年来发现的PCa易感基因。文章探讨GPRC6A及其介导的细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)在前列腺癌LncapC4?2细胞增殖与凋亡中的作用。方法实验分为LncapC4?2 PCDH组(仅转染空载体pCDH)、LncapC4?2 GPRC6A组(仅转染pCDH?GPRC6A)和LncapC4?2 GPRC6A+U0126组(转染pCDH?GPRC6A并加入U0126处理),通过CCK8检测细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡改变以及Western blot方法检测细胞周期与凋亡相关蛋白的变化。结果 Western blot法结果表明,与LncapC4?2 PCDH组比较,LncapC4?2 GPRC6A组的GPRC6A和P?ERK表达增加(P<0.05);与LncapC4?2 GPRC6A组比较,LncapC4?2 GPRC6A+U0126组的P?ERK的表达明显降低(P<0.05)。CCK8检测表明LncapC4?2 GPRC6A组相较LncapC4?2 PCDH组增殖加快(P<0.05),而LncapC4?2 GPRC6A+U0126组相较LncapC4?2 GPRC6A组增殖明显减慢(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示LncapC4?2 GPRC6A组的G1/(S+G2)值较LncapC4?2 PCDH组明显降低(P<0.05);LncapC4?2 GPRC6A+U0126组的G1/(S+G2)值较LncapC4?2 GPRC6A组明显升高(P<0.05)。Western blot结果中LncapC4?2 GPRC6A组的CyclinD1蛋白表达(0.88±0.04)较LncapC4?2 PCDH组(0.66±0.02)明显升高(P<0.05),而LncapC4?2 GPRC6A+U0126组的CyclinD1蛋白表达(0.71±0.02)较LncapC4?2 GPRC6A组明显降低(P<0.05)。流式细胞仪检测凋亡结果表明,LncapC4?2 GPRC6A组的凋亡比例(3.64%)较LncapC4?2 PCDH组(9.00%)和LncapC4?2 GPRC6A+U0126组(19.57%)明显降低(P<0.05)。同时Western blot检测结果表明,LncapC4?2 GPRC6A组的Bcl2的表达比LncapC4?2 PCDH组高,活化Caspase3的表达则降低(P<0.05);LncapC4?2 GPRC6A+U0126组相对于LncapC4?2 GPRC6A组Bcl2的表达降低,活化Caspase3的表达则增高(P<0.05)。结论 GPRC6A可能通过ERK信号通路促进PCa细胞增殖,抑制细胞凋亡,而参与PCa的发展过程。
- 孙心旖盛彬陈瑶李莉杨建一杜圣家刘铭
- 关键词：前列腺癌细胞外信号调节蛋白激酶
- 环氧化物水解酶2在肝细胞癌中的表达水平与功能作用被引量：1
- 2022年
- 本研究通过公共数据和实验数据,全面分析环氧化物水解酶2(epoxide hydrolase 2,EPHX2)在肝细胞癌中的表达情况、功能作用以及预后意义。利用GEO和MitoCarta数据集,筛选肝细胞癌中呈差异表达的线粒体相关基因;利用TCGA数据库分析EPHX2及其相关基因在肝细胞癌中的表达水平;运行R包绘制Kaplan-Meier生存曲线和功能富集分析;基于STRING和GSEA构建蛋白质互作网络和基因集富集分析;荧光定量PCR和GEO数据集验证EPHX2在肝细胞癌中的表达水平。本研究共筛选得到15个在肝细胞癌中呈差异表达的线粒体相关基因。EPHX2在肝细胞癌组织中的表达水平显著降低(P<0.01)。EPHX2表达水平与肝癌患者性别、分期和级别有关,而与年龄、T分期等因素无关。与EPHX2低表达组肝癌患者相比,EPHX2高表达组肝癌患者预后较好。功能富集结果显示,EPHX2与补体途径、脂肪酸降解等信号通路有关。蛋白质互作网络结果显示,EPHX2与HAO1、AGXT、ACOX1、GSTκ1、SCP-2、CAT、CYP2C8,CYP2C9,CYP2B6,和CYP2J2等密切相关。GSEA结果显示,EPHX2低表达组与肝癌细胞增殖、肝癌复发等基因集正相关。荧光定量PCR和GEO数据集验证结果显示,EPHX2在肝细胞癌组织和肝癌细胞株中呈显著低表达。EPHX2在肝细胞癌中呈显著低表达,提示其可能在肝细胞癌发生发展过程中发挥抑癌基因作用,但具体作用机制还需进一步验证。
- 张文桃胡艳芬吴昊刘铭李莉杜根来朱剑军
- 关键词：肝细胞癌公共数据库
- 伴PTEN突变前列腺癌细胞株PC-3细胞增殖机制的研究被引量：2
- 2020年
- 目的通过蛋白激酶抑制剂敏感性分析揭示伴PTEN突变前列腺癌细胞株PC-3细胞增殖的分子机制。方法选择9种关键激酶抑制剂作用于PC-3细胞,CCK8法检测蛋白激酶抑制剂对PC-3细胞增殖的影响;PTEN基因经RT-PCR扩增后测序检测PC-3细胞中PTEN的突变;Western blot分析PI3K和mTOR抑制剂对PC-3细胞信号通路中关键激酶表达水平的影响;细胞经蛋白激酶抑制剂处理后,采用Annexin V-FITC和溴化丙啶染色,荧光显微镜观察PC-3细胞的凋亡情况。结果GSK2126458、AZD6482、Rapamycin和OSI-027可明显抑制PC-3细胞增殖,且AZD6482和Rapamycin对PC-3细胞增殖具有协同抑制作用;测序结果显示PC-3细胞存在PTEN第78位氨基酸错义突变;Western blot结果表明,与对照组和AZD6482单药组相比,Rapamycin单药以及AZD6482联合Rapamycin作用于PC-3细胞后AKT蛋白磷酸化水平明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。药物作用于细胞48和72 h后,AZD6482单药组、Rapamycin单药组和AZD6482+Rapamycin联合组的细胞凋亡比例较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PI3K/AKT信号通路在伴PTEN突变的PC-3细胞增殖和凋亡过程中起关键作用,从而参与前列腺癌的发展过程。
- 徐凝馨曹琼李小文李文龙孙心旖林晓雨刘铭覃艳红李莉
- 关键词：蛋白激酶抑制剂PC-3细胞PI3K/AKT信号通路
- GPRC6A过表达前列腺癌细胞株构建及EMT相关研究被引量：4
- 2017年
- 目的:构建GPRC6A基因过表达的前列腺癌LncapC4-2细胞株,检测细胞迁移和侵袭能力改变及EMT相关基因表达,为研究GPRC6A介导的EMT在前列腺癌发生发展过程中的作用奠定基础。方法:构建过表达GPRC6A的慢病毒载体pCDH-GPRC6A,人胚肾293T细胞包被病毒并感染Lncap C4-2细胞株,Puromycin筛选获得稳定过表达GPRC6A的细胞株。RT-PCR和Western blot验证细胞GPRC6A的过表达情况。划痕和transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,qPCR检测EMT相关基因表达。结果:成功构建GPRC6A表达的慢病毒载体,RT-PCR和Western blot检测LncapC4-2 GPRC6A过表达细胞株中GPRC6A的mRNA和蛋白质表达增高,与对照相比较,在过表达GPRC6A的LncapC4-2细胞中,细胞迁移和侵袭能力增强,并且EMT相关基因E-cadherin表达降低而SNAIL表达增高。结论:成功构建过表达的GPRC6A的前列腺癌细胞株,肿瘤细胞中的GPRC6A可能通过增强细胞迁移和侵袭能力并促进细胞EMT而参与前列腺癌发生发展过程。
- 盛彬杨帆孙心旖陈瑶李莉杨建一杜圣家刘铭
- 关键词：前列腺癌上皮间质转化
- CYP27A1对肝细胞癌预后的影响及生物学作用
- 2024年
- 目的分析细胞色素P450家族27亚家族A成员1(CYP27A1)对肝细胞癌(HCC)预后的影响及生物学作用,并初步探讨其影响HCC生长的分子机制。方法基于癌症基因数据库(TCGA)分析CYP27A1在HCC中的表达情况及其与HCC患者预后的关系;基于CYP27A1表达量中位值,将样本分为CYP27A1高表达组(n=170)与CYP27A1低表达组(n=170),利用基因集富集分析(GSEA)分别对两组进行基因集富集分析;免疫荧光染色检测及数据库查找CYP27A1蛋白亚细胞定位;构建过表达CYP27A1质粒,转染HCC细胞MHCC-97H和HCCLM3,设置阴性对照组(转染空载质粒)与CYP27A1过表达组(转染过表达CYP27A1重组质粒)。采用CCK-8法、流式细胞仪、活性氧(ROS)荧光探针等检测过表达CYP27A1对HCC细胞活力、凋亡及ROS生成的影响;结合生物信息学分析CYP27A1与ROS生成相关基因及HCC增殖相关基因表达的相关性。结果与正常肝组织比较,HCC组织中CYP27A1 mRNA表达量明显降低(P<0.01)。CYP27A1表达与HCC患者性别、T分期、肿瘤分级和肿瘤分期有关(P<0.05)。CYP27A1低表达组总生存率明显低于高表达组(P<0.01)。GSEA富集分析结果显示,CYP27A1低表达组HCC“干性”亚类和“增殖”亚类基因集水平升高。在MHCC-97H和HCCLM3细胞中,CYP27A1主要定位于细胞核;在HepG2细胞中,CYP27A1主要定位于线粒体。与阴性对照组比较,过表达CYP27A1后,HCC细胞活力下降(P<0.01)、ROS水平降低(P<0.05),而细胞凋亡水平无明显改变(P>0.05)。CYP27A1与抑制ROS生成相关基因表达呈正相关(P<0.05),抑制ROS生成相关基因与HCC增殖相关基因表达呈负相关(P<0.05)。结论CYP27A1在HCC中呈低表达,下调CYP27A1可能通过促进ROS生成促进HCC恶性生长。
- 张昕彤吴昊胡艳芬张文桃畅靖嘉朱剑军李莉刘铭
- 关键词：肝细胞癌
