吴稚伟
- 作品数：26 被引量：16H指数：3
- 供职机构：南京大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程农业科学更多>>
- 人CCR5基因真核表达质粒的构建及其鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的:构建人CCR5基因的真核表达质粒并对其进行功能鉴定。方法:PCR扩增人CCR5基因,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1内,构建含人CCR5基因的真核表达质粒pcDNA3.1-CCR5。使用RT-PCR、流式细胞术和HIV假病毒感染实验的方法,鉴定CCR5在真核细胞中的表达和功能。结果:克隆的人CCR5基因与GenBank中已登记的基因序列100%同源。瞬时转染真核细胞后,RT-PCR在预期的位置检测出目的条带,流式细胞术检测到约25.6%的细胞表达CCR5蛋白,且该蛋白能介导HIV假病毒的感染。结论:成功构建了含人CCR5基因的真核表达质粒。
- 程林宋红勇吴喜林吴稚伟
- 关键词：CCR5基因质粒真核表达人类免疫缺陷病毒
- mTSLP-V1/V2融合蛋白的真核表达与鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的:将鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(mouse thymic stromal lymphopoietin,mTSLP)与人免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)B亚型分离株BAL的gp120 V1/V2结构域在293F真核细胞表达体系中进行融合表达。方法:以真核表达质粒pCEP-Pu为载体,构建mTSLP与gp120BALV1V2融合基因的重组蛋白表达质粒pCTV1V2BAL。限制性酶切电泳与测序验证质粒构建正确后,使用PEI瞬时转染293F悬浮细胞,表达产物以SDS-PAGE与Western blot进行分析,并对纯化后重组蛋白的V1/V2抗原表位进行了ELISA分析。结果:SDS-PAGE、Western blot分析显示,在表观分子量35 kD至55 kD的范围内存在一条不均一的糖蛋白条带,并且能与抗mTSLP多克隆抗体和抗His标签单克隆抗体发生反应。HIV-1阳性病人血清能够识别mTSLP-V1/V2BAL上的HIV-1V1/V2抗原表位。结论:在293F中成功表达了mTSLP-V1/V2BAL融合蛋白,该蛋白具有HIV-1gp120BALV1/V2区的抗原表位,能够用于HIV-1 gp120 V1/V2亚单位疫苗的研究。
- 楚鹰王亭亭芮昱文宋思维苏艾荣程林宋红勇郑大同吴稚伟
- 关键词：人免疫缺陷病毒1型融合蛋白
- HIV-1阳性血清抗体交叉反应
- 现有研究已经证明HIV-1阳性血清中存在中和抗体,少数血清甚至存在广谱中和抗体,这些抗体可以中和多种HIV-1毒株.本文用ELISA法检测三种HIV-1 GP120 V3多肽与阳性血清的反应,从而筛选交叉反应性血清.
- 刘忠聂超吴稚伟
- 关键词：HIV-1血清ELISA
- 文献传递
- 中国HIV-1B'亚型流行株gp120蛋白的表达与纯化被引量：1
- 2013年
- 目的:表达纯化中国HIV-1 B'亚型流行株gp120蛋白。方法:将gp120基因克隆至真核表达载体pTriEx-3 hygro,构建真核表达质粒pTriEx-3-gp120,转染CHO-K1细胞,96 h后收取上清,利用金属螯合层析的方法纯化该重组蛋白,并通过SDS-PAGE以及Western blotting验证重组蛋白的表达。结果:酶切及测序结果表明真核质粒表达构建正确,表达的重组蛋白可以被His标签抗体以及HIV-1阳性血清所识别,并从细胞转染上清中成功纯化了该蛋白。结论:我们成功构建了一个可用于免疫检测、疫苗设计以及其它相关研究的HIV-1免疫原。
- 楚鹰宋红勇吴稚伟
- 关键词：HIV-1GP120蛋白表达纯化
- 靶向HIV-1细胞受体基因CCR5的不对称siRNA的稳定性和体内分布研究
- 2011年
- 目的:探讨靶向HIV-1细胞受体基因CCR5的不对称siRNA(asiRNA)在血清和动物体内的稳定性和在动物体内分布情况。方法:用内皮抑素同脂质胶束联合递送asiRNA,琼脂糖凝胶电泳法检测asiRNA的血清稳定性,ELISA法和活体荧光成像法检测asiRNA的体内分布。结果:改变合适的实验条件和asiRNA的修饰,可提高asiRNA的血清稳定性。用ELISA法检测出静脉给药15 min后双链asiRNA在血液、肝、肺和肾内浓度较高,用活体荧光成像法检测出静脉给药24 h后asiRNA向肾内汇集排泄,两种检测方法测得asiRNA在脾内浓度较低。结论:两种检测方法方便实用,灵敏度不同,均可用于阳离子脂质体递送asiRNA的体内分布检测。
- 张昌栋殷妍郭佳佳梁晓飞段友容吴稚伟王建军徐根兴
- 关键词：CCR5SIRNAELISA
- 木质素磺酸盐的用途及其药物组合物
- 本发明公开了木质素磺酸盐的用途及其药物组合物，其中木质素磺酸盐在体外具有较强的抗HIV-1的活性，其作用机制主要是阻断HIV-1病毒与靶细胞结合，从而阻断其感染。同时对于CD4依赖与非依赖型的HIV-1感染，木质素磺酸盐...
- 吴稚伟楚鹰邱敏王芹宋红勇孙亦彬蒋海燕
- 文献传递
- 羟丙基-β-环糊精包合物中尼非韦罗含量测定和稳定性考察被引量：1
- 2011年
- 目的尼非韦罗是一种新型抗艾滋病药物,羟丙基-β-环糊精(hydroxypropyl-β-cyclodextrin,HP-β-CD)包合物增加尼非韦罗的水溶性和稳定性。文中采用反相高效液相色谱法测定环糊精包合物中尼非韦罗含量及考察其相关稳定性。方法采用GL Sciences Inertsil ODS柱(4.60×250 mm,5μm),检测波长265 nm,柱温30℃。以甲醇(A相)-复方醋酸缓冲液(B相,pH4.5)(65∶35,v/v)为洗脱流动相,采用等速度洗脱,流速为1 ml/min,采用外标法定量。结果尼非韦罗与各有关物质分离良好。在20.10~180.90μg/ml的浓度范围内,尼非韦罗峰面积与浓度具有良好线性关系(r=0.9999);重复性好[相对标准差(relative standard deviation,RSD)<1.5%];稳定性好(RSD<1.5%);加样回收率为100.5%(n=9)。结论此方法检测包合物中尼非韦罗含量操作简便、准确、灵敏度高、可靠。尼非韦罗经HP-β-CD包合后相关稳定性有明显提高。
- 郝彬彬王芹任勇王勇吴稚伟
- 关键词：高效液相色谱法羟丙基-Β-环糊精稳定性
- 2-氨基嘌呤-6（H）硫酮在制备单纯疱疹病毒的抑制剂中的应用
- 本发明涉及医药技术领域，具体涉及2‑氨基嘌呤‑6(H)硫酮在制备单纯疱疹病毒的抑制剂中的应用，同时提供了2‑氨基嘌呤‑6(H)硫酮在制备预防和/或治疗由单纯疱疹病毒感染导致的疾病的药物中的应用。通过实验证明了2‑氨基嘌呤...
- 吴稚伟陈德燕刘烨张芳
- 阴道用尼非韦罗凝胶的大、小鼠急性毒性和家兔刺激性研究
- 2011年
- 目的:研究阴道用尼非韦罗凝胶的大、小鼠急性毒性和家兔刺激性。方法:取60只小鼠腹腔注射不同浓度(199、229、263、302、348、400mg·kg-1)的尼非韦罗凝胶进行全身急性毒性实验,计算半数致死量(LD50),观察14d内小鼠死亡数;对30只大鼠进行阴道急性毒性实验,分别阴道内给予尼非韦罗凝胶(5mg·kg-1)、空白凝胶,并设阴性对照,观察14d内大鼠体重变化、死亡数及生殖道形态学变化;对12只性成熟家兔进行阴道刺激性实验,分组为机械刺激组(生理盐水)、参比对照组(3%壬苯醇醚)、尼非韦罗凝胶组(1mg·kg-1)、空白凝胶组,阴道给予相应药物,连续给药10d,按Eckstein刺激性评价标准,以充血、水肿、炎性细胞浸润及上皮脱落为指标进行阴道刺激性评分。结果:尼非韦罗凝胶的小鼠LD50为303.37mg·kg-1,95%可信限为278.7～333.29mg·kg-1;大鼠14d内无死亡,体重无明显变化,生殖道未见异常分泌物;4组家兔阴道刺激性总分值比较无显著差异,刺激程度均在轻度以下。结论:尼非韦罗凝胶的全身急性毒性属中等毒性,阴道急性毒性和刺激性均在可接受范围内,总体评价较为安全,可作为阴道凝胶剂进行临床试验。
- 郝彬彬王芹王勇吴稚伟
- 关键词：半数致死量小鼠家兔阴道急性毒性刺激性
- 4-苯乙烯磺酸马来酸酐共聚物抑制HSV-2感染研究被引量：1
- 2012年
- 目的:探索4-苯乙烯磺酸马来酸酐共聚物(PSM)对单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)感染细胞或小鼠的抑制作用。方法:建立Vero-ICP10细胞系,通过Luciferase检测不同浓度PSM对感染细胞中HSV-2的抑制作用,并通过In cell western技术检测HSV-2 gD蛋白表达,确定不同PSM浓度对HSV-2 gD蛋白表达的抑制作用;建立HSV-2阴道感染小鼠模型,观察PSM对HSV-2经生殖道感染小鼠的抑制作用。结果:Luciferase实验和In cell western实验结果均表明PSM具有抗HSV-2感染细胞的作用;小鼠模型中,5%的PSM能有效防止小鼠感染HSV-2(P<0.001)。结论:PSM在体内和体外模型中均可以抑制HSV-2感染。
- 陈钰宋思维邱敏吴稚伟
- 关键词：单纯疱疹病毒2型抗病毒
