周科
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
- 供职机构：广东出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目广东省重大科技专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 不同H9N2亚型鸭流感病毒NS1基因克隆和功能进化分析
- 2009年
- [目的]为进一步研究NS1蛋白在流感病毒跨宿主传播中的作用机制奠定基础。[方法]采用常规的血清学试验和特异性RT-PCR方法,从广东不同地区的12~20日龄正常番鸭群中分离鉴定出多株H9亚型水禽禽流感病毒株,对其中4株分离于正常番鸭的禽流感病毒毒株A/duck/ZQ/303/2007（H9N2）（简称A3）、A/duck/FJ/301/2007（H9N2）（简称C1）、A/duck/NH/306/2007（H9N2）（简称D6）和A/duck/SS/402/2007（简称E2）和1株来源于病死番鸭的H9N2亚型鸭流感病毒A/duck/ZC/1/2007（H9N2）（简称L1）的NS1基因进行克隆测序,并与GenBank中收录的其他NS1序列进行比较,分析NS1基因的进化关系。[结果]4株分离于不同地区正常番鸭群的流感病毒株NS1基因与GenBank中注册的H9N2 AIVNS1基因核苷酸同源性为99%~100%,氨基酸同源性为95%~100%。而分离于病死鸭的流感病毒株与H9N2 AIVNS1基因核苷酸同源性为94%~97%,氨基酸同源性为93%~99%。遗传进化结果表明：分离于正常鸭群的4株流感病毒NS1基因独成一分支,而L1株与2003年的鸡源AY66473株亲缘关系最近。DNAstar软件分析表明：与L1、AF523514（鸭源）、AY664743（鸡源）、EF155262.1（鹌鹑）相比,A3、C1、D6、E2 4株正常鸭H9N2 AIV毒株的NS1基因核苷酸序列在21（R→Q）7、07、1（KE→EG）8、6（A→S）1、24（V→M）、225（S→N）位点处发生改变,NS1基因的双股RNA依赖性蛋白激酶（dsRNA-dependent protein kinase,PKR）结合区（1~100位氨基酸）39、70、71和86位氨基酸发生变化,导致NS1蛋白潜在的抗原决定簇及其特定区域位于蛋白表面的可能性发生明显变化。[结论]NS1蛋白PKR结合区氨基酸序列变化与病毒的致病性有一定关系。
- 谢青梅张祥斌吴志强冀君周科毕英佐
- 关键词：H9N2亚型鸭流感病毒NS1基因PKR进化分析
- 不同H9N2亚型鸭流感病毒NS1基因克隆和功能进化分析(英文)
- 2009年
- 禽流感病毒（AIV）在高免疫压力情况下会发生变异而逃避免疫系统的监视。其NS1蛋白共有230个氨基酸，其中前73个氨基酸残基以二聚体形式存在，包含了所有RNA的结合活性。NS1的氨基端1—73位是mRNA的结合区，氨基端1—100位是双股RNA依赖性蛋白激酶（PKR）的结合区。PKR抗病毒作用机制如下：病毒侵染宿主细胞时，在宿主干扰素的诱导下，双股RNA与PKR结合，同时真核翻译启动子α亚单位发生磷酸化，导致PKR的激活。激活的PKR能同时抑制宿主细胞和病毒mRNA的翻译，从而最终抑制入侵病毒在细胞中的有效繁殖和扩散。
- 谢青梅张祥斌吴志强冀君周科毕英佐
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型氨基酸残基宿主细胞
- 四环素类药物残留放射免疫受体分析检测试验被引量：2
- 2012年
- 应用放射免疫分析法(Charm Ⅱ)检测动物组织及尿样中残留四环素类药物,对猪的组织及尿样进行了金霉素标准品添加验证试验.选取6个样品进行添加并对每个样品检测3次,结果显示猪尿样在加标点1 000μg/L,稀释因子50的条件下,其检测值在同一样品中变异系数0.50%～2.63%,样品间变异系数5.05%;猪的组织(猪瘦肉)在加标点100μg/kg,稀释因子4的条件下,其检测值在同一样品中变异系数0.49%～7.44%,样品间变异系数18.33%.对猪尿样降低稀释因子由说明书要求的150降到50,结果表明在稀释因子50的条件下,增大了的样本背景干扰对试剂盒检测基本无影响.应用该方法进行四环素类药物残留的大类筛选,其结果检测稳定性良好.
- 曾碧健陈茹周科刘志玲
- 关键词：四环素类药物残留
- 四种重要致病性分枝杆菌DHPLC检测鉴别方法的建立被引量：8
- 2010年
- 目的运用多重核酸扩增（PCR）联合变性高效液相色谱（denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC）分析技术原理,针对结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、禽分枝杆菌以及副结核分枝杆菌建立多重PCR-DHPLC快速检测方法,实现同时检测鉴别四种重要致病性分枝杆菌。方法根据四种分枝杆菌特异基因序列分别设计菌种特异核酸扩增引物,通过筛选优化试验建立四重核酸扩增体系,对核酸扩增产物采用DHPLC设备进行检测分析,每一菌种的核酸扩增产物分别形成DHPLC特征峰图。对结核分枝杆菌等51株分枝杆菌标准株和分离株样品以及沙门氏菌等22株常见微生物样品进行特异性检测试验 对四种分枝杆菌特异的核酸扩增产物分别制备克隆质粒,通过对梯度稀释的阳性质粒的检测试验,进行多重PCR-DHPLC灵敏度测试 对疑似病人痰液样品和疑似发病牛的组织样品进行检测,并与细菌分离培养法进行比较以验证临床检测效果。结果该方法能快速检测鉴别上述四种分枝杆菌,检测灵敏度达到102~103基因拷贝,从131份疑似病人临床样品中检出91份结核分枝杆菌阳性,从40份来自疑似发病牛群的临床样品中检出31份牛分枝杆菌阳性,检出率均高于细菌分离培养法。结论研究表明所建立的多重PCR-DHPLC方法能快速检测鉴别四种重要致病性分枝杆菌,为人畜结核、副结核病诊断提供一种新型分子生物学技术手段。
- 陈茹毕英佐刘志玲刘志辉马静云曾碧健吴晓薇周科林志雄
- 关键词：变性高效液相色谱结核分枝杆菌牛分枝杆菌副结核分枝杆菌多重PCR
- 牛流行热病毒LUX^(TM)荧光RT-PCR检测方法的建立被引量：2
- 2010年
- 采用LUXTM荧光PCR技术原理,以牛流行热病毒(BEFV)糖蛋白抗原G基因保守序列为模板设计特异荧光PCR扩增引物,建立BEFV LUXTM实时荧光RT-PCR快速检测方法。试验结果显示,所建立的荧光RT-PCR可特异检测牛流行热病毒RNA,而对蓝舌病病毒、牛病毒性腹泻-粘膜病病毒、水泡性口炎病毒、口蹄疫病毒、牛白血病病毒以及与BEFV同种属的狂犬病病毒核酸检测呈阴性反应。敏感性试验表明LUXTM荧光RT-PCR对BEFV RNA的检测敏感性比常规RT-PCR方法提高达100倍以上。该LUXTM荧光RT-PCR的批内检测变异系数0.64%-1.17%,批间检测变异系数均小于2%,表明检测体系稳定、重复性好。通过人工添加灭活病毒液的方法制备30份模拟感染牛血清样品,采用上述所建立的BEFV LUXTM荧光RT-PCR方法检测均呈阳性。
- 刘志玲陈茹邱索平马静云曾碧健周科
- 关键词：牛流行热病毒实时荧光RT-PCR
