周青松
- 作品数：9 被引量：17H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 慢病毒介导survivin体外转染MSCs及功能测定被引量：3
- 2011年
- 目的:探讨存活素(Survivin,Svv)基因修饰的骨髓间充质干细胞(MSCs)在离体微环境中延长生存能力的机制,为新的干细胞抗凋亡移植策略提供理论依据。方法:制备Svv重组慢病毒和空白对照病毒,测定病毒滴度及转染率大于90%时的MOI值;分别进行转染后成骨诱导分化测定;RT-PCR比较转染前后survivin表达变化情况。结果:成功包装出Svv慢病毒和空白病毒,实验组病毒滴度为7.1×107TU/mL,空白病毒组为8.3×107TU/mL;转染率大于90%时的MOI值Svv慢病毒和空白病毒分别为28.4和8.3;转染后的Svv慢病毒和空白病毒均能向成骨分化;同时RT-PCR结果显示转染后明显过表达survivin。结论:慢病毒成功转染MSCs且具有其分化功能,同时过表达survivin,为体内研究靶细胞的存活时间提供了实验基础。
- 周青松苟欣何卫阳张龙波
- 关键词：SURVIVIN慢病毒转染
- 前列腺特异性抗原密度在前列腺癌恶性程度中的意义被引量：2
- 2012年
- 目的探讨血清中前列腺特异性抗原密度(PSAD)测定值在前列腺癌(Pca)恶性程度中的意义。方法回顾分析该院85例Pca并进行Pca根治术后的患者,分析比较术前前列腺特异性抗原(PSA)、PSAD和Gleason评分在Pca恶性程度中的意义。结果手术切缘有浸润者36例,PSAD平均值为(0.36±0.34)ng/mL;手术切缘无浸润者49例,PSAD平均值为(0.34±0.40)ng/mL,PSM阳性组明显高于PSM阴性,差异有统计学意义(P<0.01)。精囊有浸润者13例,PSA平均值为(19.1±22.8)ng/mL、PSAD平均值为(0.54±0.59)ng/mL;精囊无浸润者72例,PSA平均值为(10.8±6.6)ng/mL,PSAD平均值为(0.32±0.32)ng/mL,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。淋巴结有转移者7例,Gleason评分平均值为6.92±0.98;淋巴结无转移者46例,Gleason评分平均值为6.71±1.28,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 PSAD对于Pca恶性程度的判断比较准确,同时还可以作为预测Pca预后的一项指标,若同时联合三项指标可显著提高预测结果。
- 何如钢周青松
- 关键词：前列腺肿瘤前列腺特异抗原前列腺特异抗原密度GLEASON评分
- 骨髓间充质干细胞移植在小鼠急性肾损伤肾内的存活与分化情况研究被引量：2
- 2011年
- 为探讨急性肾损伤后,移植骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)在损伤肾内的存活能力及分化情况,通过复苏、扩增培养已完成鉴定、经慢病毒EGFP转染的MSCs,观察备用MSCs的EGFP(enhanced green fluorescent protein)表达情况,采用雄性C57BL/6J小鼠12只建立小鼠肾脏缺血再灌注损伤模型后(结扎双侧肾蒂40 min后开放血流并经尾静脉注射MSCs),分别于第1、3、7、14 d处死3只小鼠,采集小鼠左侧肾脏制作石蜡切片,倒置荧光显微镜下观察MSCs在肾内的存活及分化情况,定量分析每个时间点存活于肾内的数目的差异.结果表明复苏、扩增培养出的MSCs增殖活力旺盛,成功建立小鼠肾脏缺血再灌注损伤模型.移植的细胞随时间的延长,存活于肾脏内的数量显著减少(第14 d存活于肾内的细胞数量仅为移植后第1d的1/5),第1、3、7、14 d表达EGFP的MSCs主要分布于肾小球周围、肾脏小血管内壁、肾小管与肾小管之间的间质而肾小管内壁未见到表达EGFP的MSCs分布.这说明移植的MSCs在缺血再灌注损伤后肾脏内能够存活,但肾脏内的微环境限制了移植细胞的存活能力.在肾小管内壁未观测到表达EGFP的MSCs,提示MSCs对肾脏修复的途径不是直接向肾小管内皮细胞分化而另有其它途径.
- 齐玉增苟欣周青松杨平
- 关键词：缺血再灌注存活分化
- 小鼠survivin基因慢病毒表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2011年
- 背景:间充质干细胞体内有限的存活能力严重制约其用于体内治疗方面的应用,因此寻找一种能延长存活能力的实验方法是间充质干细胞进行体内实验的重要前提。目的:应用pLV.Des3d.P/hygro构建小鼠survivin基因的慢病毒表达载体。方法:采用Oligo核酸软件对Genbank上所发表的小鼠survivinmRNA序列进行分析,设计一对survivin基因上下游引物,利用Gateway克隆方法,分别在其两端添加attB重组位点,运用PCR扩增mSurvivin和IRES/EmGFP,将PCR产物进行BP反应然后转化到Stbl3感受态菌,通过卡那霉素抗性筛选、PCR鉴定,选取鉴定正确的pDown-mSurvivin和pTail-IRES/EmGFP克隆测序。将pDown-mSurvivin和pTail-IRES/EmGFP与pLV.Des3d.P/hygro混合进行LR反应,构建慢病毒载体pLV.EX3d.P/hygro-EF1A>mSurvivin>IRES/EmGFP,再次进行PCR、测序的鉴定。结果与结论:显示基因序列克隆正确,成功构建了含有小鼠survivin基因的重组慢病毒表达载体。说明慢病毒表达载体pLV.EX3d.P/hygro-EF1A>mSurvivin>IRES/EmGFP构建成功,为下一步研究survivin在间充质干细胞中抗凋亡作用奠定基础。
- 杨平苟欣周青松何卫阳余昆
- 关键词：骨髓间充质干细胞病毒SURVIVIN小鼠
- 小鼠髓源性树突状细胞的体外扩增及生物学特性的鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的以小鼠骨髓细胞为前体,建立一种高效、简便的体外扩增、分离培养树突状细胞(DC)的方法。方法实验分为GM/4组和GM/4-α组,以重组鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组鼠白介素-4(rmIL-4)对小鼠骨髓细胞联合诱导培养,GM/4-α组在第5天添加rmTNF-α继续培养48 h,GM/4组不加并于第5天时终止培养;分别收集第5天、第7天的悬浮及疏松贴壁细胞,扫描电镜观察细胞形态,流式细胞仪测定细胞表面分子,同种异体混合淋巴细胞反应(MLR),检测2组细胞刺激同种异体T细胞增殖的能力。结果所收集的2组细胞均具有典型DC形态,细胞表面高表达小鼠髓源性DC相对特异性标志CD11c,表达率达75%以上;GM/4组DC细胞表面CD40、CD86、MHC-Ⅱ的表达率分别为30.5%、34.2%、45.1%,GM/4-α组则分别为78.7%、88.3%、96.7%;MIR中GM/4组DC刺激同种异体T细胞活化增殖的能力不如GM/4-α组强。结论此种方法能于体外定向诱导和扩增出大量髓源性DC,这为后续研究DC在器官移植后诱导机体免疫耐受的机制奠定了基础。
- 余昆苟欣周青松杨华安仲伟营夏阳
- 关键词：树突细胞免疫耐受小鼠
- GATA6、ROR2和STAT3在膀胱移行细胞癌的表达及其意义被引量：3
- 2011年
- 目的:探讨核转录因子GATA6、发育调节激酶ROR2和信号转导因子STAT3在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测72例膀胱移行细胞癌(Bladder transitional cell carcinoma,BTCC)组织中GATA6、ROR2和STAT3的表达,并将结果与病理分级、临床分期、肿瘤复发等临床病理资料进行统计学分析。结果:GATA6、ROR2和STAT3在BTCC的表达分别为:22.2%、61.1%、79.2%。不同病理分级和临床分期组间GATA6的表达差异无统计学意义(P>0.05),但复发组与未复发组间其表达差异有统计学意义(P<0.05);不同病理分级、临床分期,复发组与未复发组间ROR2的表达差异有统计学意义(P<0.05);不同病理分级组间STAT3表达差异有统计学意义(P<0.05),不同临床分期、复发与未复发组间差异无统计学意义(P>0.05)。(2)ROR2、STAT3在BTCC中的表达具有统计学相关性(rs=0.443,P<0.05);GATA6在BTCC中的表达与ROR2、STAT3无统计学相关。结论:STAT3、ROR2和GATA6可能都参与了BTCC的进展;ROR2与STAT3可能存在共同的信号通路;检测GATA6、ROR2和STAT3可能对判断BTCC的进展和预后有一定价值。
- 张龙波苟欣何卫阳周青松
- 关键词：膀胱移行细胞癌STAT3
- 小鼠survivin基因重组真核表达载体的构建及鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的:应用质粒pEGFP-N1构建含小鼠survivin基因的重组真核载体。方法:采用Oligo核酸软件对Genbank上所发表的小鼠survivin mRNA序列进行分析,自行设计一对分别含有HindⅢ、BamHⅠ酶切位点的survivin基因上下游引物,利用PCR扩增出该基因的全序列cDNA,并将其定向克隆入pEGFP-N1的多克隆位点,构建pEGFP-N1/survivin重组真核表达载体。然后通过卡那霉素抗性筛选、双酶切及PCR鉴定,选取鉴定正确的克隆测序。结果:双酶切与测序结果表明目的基因序列克隆正确,成功构建了含有小鼠survivin基因的重组真核表达载体。结论:重组真核表达载体pEGFP-N1/survivin构建成功,为下一步研究sur-vivin在未成熟树突状细胞中诱导分化与致耐受作用奠定基础。
- 余昆苟欣杨华安周青松夏阳
- 关键词：SURVIVINPEGFP-N1未成熟树突状细胞
- 小鼠骨髓间充质干细胞的培养、鉴定和Survivin的表达研究被引量：4
- 2010年
- 为培养及鉴定小鼠来源骨髓间充质干细胞,并测定细胞中Survivin的表达情况,采用全骨髓培养法获取骨髓间充质干细胞,绘制生长曲线,流式细胞仪检测细胞表面标志物,行成骨、成脂检测,RT-PCR测定Survivin表达情况.结果表明培养出的细胞呈长梭状成纤维细胞样,经流式细胞仪检测细胞表面高表达CD29、CD34、CD44、SCA-1,低表达CD117;细胞曲线显示传代细胞培养1～3d生长缓慢,第4d生长加快并于第7d达到高峰;成骨诱导20d经茜素红染色呈红色结节,成脂诱导14d油红O染色显示有大量脂质沉淀;RT-PCR结果显示Survivin mRNA阳性表达.经全骨髓培养法可以培养出大量骨髓间充质干细胞,同时Survivin在小鼠骨髓间充质干细胞中正常表达,提示可能参与骨髓间充质干细胞抗凋亡过程.
- 周青松苟欣
- 关键词：骨髓间充质干细胞SURVIVIN
- Survivin在小鼠髓源性树突状细胞不同分化阶段中的差异性表达被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨不同分化阶段的树突状细胞(DC)sur-vivin的差异性表达。方法:制备骨髓细胞作为DC前体,以rmGM-CSF联合rmIL-4对前体细胞诱导培养,第5天时添加rmTNF-α继续孵育48 h以进一步刺激DC分化成熟。分别收集0、5、7 d的细胞(其中第5天的细胞为添加rmTNF-α前收集),扫描电镜观察DC形态、流式细胞术鉴定DC表型,RT-PCR、Western blot检测不同分化阶段DCsurvivin的表达。结果:扫描电镜下不同分化阶段的细胞均具有典型DC形态;流式细胞术分析表明,不同成熟阶段的DC均高表达小鼠髓源性DC相对特异性标志CD11c,经rmTNF-α刺激后的DC其细胞表面CD40、CD86、MHC-Ⅱ等分子呈高水平表达;RT-PCR、Western blot检测结果显示,随着DC的分化成熟,sur-vivinmRNA及蛋白的表达水平呈上升趋势。结论:不同诱导条件下,获得的DCsurvivin表达有差别,随着DC成熟,sur-vivin表达增加。
- 余昆苟欣杨华安周青松仲伟营郑军
- 关键词：SURVIVIN树突状细胞免疫耐受骨髓
