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他克莫司后处理对缺血再灌注脊髓组织炎性反应的抑制作用被引量：2: 2014年; 目的探讨他克莫司后处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后组织炎性反应的抑制作用。方法成年雄性SD大鼠90只,随机分为假手术(SO)组、缺血再灌注(IR)组和他克莫司后处理(TP)组。采用经股动脉置管球囊扩张制备脊髓缺血模型,缺血20分钟后抽出球囊中液体行再灌注。再灌注15分钟、1、6、24小时切取相应脊髓节段,采用邻联二茴香胺法检测髓过氧化物酶(MPO)活性,再灌注24小时应用干湿差重法测定伤段脊髓组织水含量,同时制备组织切片行原位末端标记法(TUNEL)染色观察神经细胞凋亡。结果 SO组大鼠脊髓组织MPO活性在7.20~8.03 U/mg之间,与之相比IR组大鼠再灌注各时间点MPO活性升高明显(P<0.01),TP组大鼠再灌注15分钟、1、6、24小时时MPO活性均显著低于IR组(P<0.01)。SO组大鼠脊髓组织水含量为(61.17±1.49)%,再灌注24小时时IR组大鼠高达(69.34±0.91)%,而TP组脊髓组织水含量为(65.09±0.61)%,显著低于IR组(P<0.01)。SO组大鼠脊髓神经细胞凋亡率为(5.44±1.31)%,再灌注24小时时IR组和TP组的凋亡率分别为(32.76±6.67)%和(20.40±5.43)%,TP组显著低于IR组(P<0.01)。结论他克莫司后处理能抑制缺血脊髓再灌注后的中性粒细胞聚集和组织炎性水肿,减轻神经细胞凋亡,从而发挥神经保护作用。; 潘峰祝成亮陶凤华李章华陶海鹰贺斌余铃戢鹏唐欢; 关键词：脊髓缺血过氧化物酶

成骨细胞特异性转录因子Cbfa1重组腺病毒质粒的构建与鉴定被引量：6: 2014年; 目的:构建成骨细胞特异性转录因子——核心结合因子α1(Cbfa1)重组腺病毒载体,为后期应用Cbfa1基因治疗股骨头坏死、骨折和骨缺损等疾病奠定基础。方法:以目的基因Cbfa1全长cDNA为模板进行PCR扩增,将扩增产物克隆到pShuttle-CMV载体的相应酶切位点,获得目的基因载体pShuttle-CMV-Cbfa1,在大肠杆菌BJ5183中和pAdEasy-1同源重组,筛选阳性克隆,经酶切、PCR及测序鉴定,线性化后用脂质体法转染HEK293细胞进行包装、扩增,用报告基因GFP对病毒滴度和感染效率进行监测,酚氯仿抽提纯化病毒,AdEasy1/Cbfa1感染间充质干细胞(MSC)后检测Cbfa1的表达。结果:测序、酶切及PCR证实Cbfa1基因重组腺病毒载体构建成功,AdEasy1/Cbfa1感染MSC后Cbfa1的表达显著升高。结论:构建了含Cbfa1基因的重组腺病毒载体,该基因能促进MSC向成骨细胞分化,预示其可作为治疗基因应用于股骨头坏死、骨折和骨缺损的治疗。; 李章华赵强唐欢许海甲廖文潘峰刘农乐; 关键词：核心结合因子Α1 腺病毒

活性氧簇介导他克莫司后处理对丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶信号途径的调控作用: 2014年; 目的探讨他克莫司后处理对缺血再灌注脊髓组织中丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（Akt）信号途径的影响及活性氧簇（ROS）在其中的意义。方法采用Taira法制备脊髓缺血再灌注损伤模型。雄性SD大鼠80只随机分为4组：假手术组（SO组）、缺血再灌注组（IR组）、他克莫司后处理组（TP组）、缺血后处理＋氧自l扫基清除剂N-乙酰半胱氨酸组（TP＋N组）。IR组在脊髓缺血20min后再灌注；TP组在再灌注即刻，经左颈总动脉一次性注射他克莫司0．5mg／kg，余操作同IR组；TP＋N组在脊髓缺血前5min经左颈总动脉注射N-乙酰半胱氨酸150mg／kg，余操作同TP组；SO组仅行股动脉置管。再灌注15min取材，采用2’，7’-二氯荧光素乙酰乙酸盐（DCFH—DA）荧光分光光度法观察ROS的生成水平；运只JWesternblot法观察磷酸化Akt（p-Akt）表达水平。再灌注24h截取相应脊髓节段，应用流式细胞术检测神经细胞凋亡。再灌注7d取材，行神经元尼氏染色观察病理学变化。结果SO组和再灌注15min时IR、TP、TP＋N组大鼠脊髓组织ROS水平分别为49．0±3．5、145．3±11．7、79．0±6．3和12．8±0．9，TP组ROS水平明显低于IR组（P〈0．01），TP＋N组ROS水平显著低于其他3组（P〈0．01）。SO组和再灌注15min时IR、TP、TP＋N组大鼠脊髓组织p-Akt表达分别为0．54±0．06、0．34±0．03、0．42±0．07和0．28±0．05，IR组p-Akt表达显著低于s0组（P〈0．01），TP组明显高于IR组（P〈0．05），TP＋N组显著低于SO组（P〈0．01）和TP组（P〈0．01）。SO组和再灌注24h时IR、TP、TP＋N组大鼠脊髓组织凋亡率分别为（7．5±1．8）％、（31．4±5．5）％、（22．3±4．0）％和（33．3±3．1）％，IR组和TP＋N组凋亡率均明显高于TP组（P〈0．01），IR组和TP＋N组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。再灌注7d时脊髓组织切片显示SO组无明显病理改变，TP组病理变; 潘峰祝成亮程艳香李章华陶凤华陶海鹰贺斌余铃戢鹏唐欢; 关键词：脊髓缺血他克莫司活性氧簇

营养动脉结扎和液氮冷冻对股骨头内局部氧分压的影响: 2013年; 目的:观察营养动脉结扎和液氮冷冻对股骨头内局部氧分压的影响,为后期制作极度低氧股骨头缺血坏死模型打下基础。方法:9只雄性大耳白兔随机平均分为对照组、液氮冷冻组和动脉结扎+液氮冷冻组,对照组动物不做任何处理,液氮冷冻组动物行股骨头液氮冷冻使其发生缺血坏死,动脉结扎+液氮冷冻组动物先结扎旋股内外侧动脉,再对股骨头进行液氮冷冻。造模后立刻活体观察股骨头内氧分压变化。结果:液氮冷冻组股骨头内氧分压较对照组下降一半左右,2组比较有显著性差异(P<0.05);动脉结扎+液氮冷冻组动物股骨头内氧分压进一步下降到对照组的1/8左右,与其他2组相比有显著性差异(P<0.05)。结论:液氮冷冻和旋股内、外侧动脉结扎均可明显降低股骨头内氧分压,两者合用具有重叠效应,可共同促使股骨头内氧分压下降。; 李章华廖文吴丽平李超群唐欢潘峰郭义; 关键词：液氮冷冻低氧氧分压股骨头

他克莫司后处理对缺血-再灌注脊髓氧化应激损伤的保护作用被引量：3: 2013年; 目的观察他克莫司后处理是否通过上调内源性抗氧化物酶活性、抑制氧自由基生成以减轻大鼠脊髓缺血-再灌注损伤。方法90只雄性SD大鼠随机分为3组：缺血-再灌注（IR）组、他克莫司后处理（TP）组和假手术（SO）组。采用经股动脉置管球囊扩张制备脊髓缺血模型。IR组在脊髓缺血20min后再灌注；TP组在脊髓缺血20min后再灌注即刻，经左颈总动脉一次性注射他克莫司0．5mg／kg，余操作同IR组；SO组仅行股动脉置管。再灌注15min取材，采用2’，7’-二氯荧光素乙酰乙酸盐（DCFH-DA）荧光分光光度法观察活性氧簇（ROS）的生成水平；再灌注15min、1、6、24h检测脊髓组织脂质过氧化产物丙二醛（MDA）的含量及内源性抗氧化物酶（SOD、CAT、GSH—PX）的活性；再灌注14d采用BBB评分法检测大鼠后肢运动功能。结果再灌注15min时TP组ROS水平明显低于IR组（P〈0．01）；TP组抗氧化物酶SOD活性在再灌注各时间点均显著高于IR组（P〈0．05或P〈0．01），CAT和GSH—PX活性在再灌注1、6h时明显高于IR组（P〈0．05，P〈0．01）；再灌注各时间点rrP组MDA含量均显著低于IR组（P〈0．05或P〈0．01）；TP组再灌注14d时后肢运动功能评分明显优于IR组[（14．1±1．1）分比（10．g±1．5）分]，（P〈0．01）。结论他克莫司后处理可上调内源性抗氧化物酶活性，减少氧自由基生成，抑制脂质过氧化反应，加速缺血．再灌注损伤后的脊髓功能恢复。; 潘峰程艳香陶凤华祝成亮李章华陶海鹰贺斌余铃刘阳唐欢; 关键词：脊髓缺血氧化性应激

Runx2基因对骨代谢调控的研究进展被引量：25: 2014年; 人体骨代谢是一个复杂的过程,是破骨细胞(osteoclast,OC)吸收旧骨和成骨细胞(osteoblast,OB)形成新骨的动态平衡的过程。Runx2(core binding factor alphal 1,核心结合因子a1)是调控成骨细胞和破骨细胞的分化促进骨形成的关键调控因子,通过调控成骨细胞特异性细胞外基质蛋白基因的表达和成骨细胞周期参与成骨细胞的分化过程,促进骨形成和抑制骨吸收。本文就Runx2在骨代谢中的作用作一综述。; 唐欢许海甲侯煜东方卫军李章华; 关键词：RUNX2 成骨细胞破骨细胞骨代谢

兔骨髓间充质干细胞Runx2基因特异siRNA的设计和沉默作用被引量：1: 2014年; 目的探讨应用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)特异性抑制兔骨髓间充质干细胞内Runx2基因表达,筛选高效特异性siRNA。方法根据siRNA设计原则,针对Runx2基因序列特征设计Runx2特异siRNA(1-3),转染兔骨髓间充质干细胞,用QPCR和Western blot方法检测siRNA对Runx2基因的抑制效果。结果 Runx2 siRNA-2可有效抑制骨髓间充质干细胞中Runx2基因的表达。随siRNA-2终浓度由50 nmol/L增加到100 nmol/L及200 nmol/L,抑制效率逐渐增强(P<0.05);siRNA-2以终浓度200 nmol/L转染后48 h抑制效果最强,72 h逐渐减弱,但仍明显抑制(P<0.05)。结论应用RNA干扰技术可抑制骨髓间充质干细胞中Runx2基因的表达,其抑制作用具有明显的时间、浓度依赖性。; 唐欢李章华许海甲; 关键词：RNA干扰骨髓间充质干细胞

Micro-CT评价Runx2基因修饰的骨髓间充质干细胞静脉移植促进缺血性股骨头坏死兔坏死股骨头修复效果被引量：4: 2015年; 目的:应用Micro-CT评价Runx2基因修饰的骨髓间充质干细胞(MSC)静脉移植促进兔坏死股骨头修复效果。方法:24只大耳白兔经缺血性股骨头坏死造模4周后随机分为4组,A组静脉移植1×107个Runx2基因修饰的MSC,B组静脉移植1×107个Runx2 si RNA修饰的MSC,C组单纯植入1×107个MSC,D组静脉植入等量生理盐水,细胞移植后2、4、6、8周取出股骨头标本行Micro-CT检测,评价股骨头坏死修复情况。结果:2周后各组动物股骨头关节面模糊,骨密度降低,骨小梁数量及厚度均下降,骨小梁结构紊乱,但组间差异不明显;4、6周后,A、B、C组动物股骨头内骨密度和骨小梁结构未明显变化,但可见修复反应,而D组动物股骨头内骨小梁结构破坏进一步加剧;8周后,D组动物股骨头关节面塌陷,骨小梁严重缺失形成较大空洞,A、B、C组股骨头可见明显修复反应,关节面完整度、关节面下骨密度、骨小梁体积及数量、骨小梁连续性表现为A>C>B>D组。结论:MSC静脉移植可有效治疗股骨头坏死,且过表达Runx2基因修饰后能有效提升MSC移植后的治疗效果。; 许海甲李章华侯煜东方卫军唐欢; 关键词：MICRO-CT 股骨头坏死

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唐欢

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