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唐珂: 作品数：45 被引量：184H指数：9; 供职机构：中南大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学一般工业技术更多>>

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鼻咽癌细胞中表达上调的新基因NAG23(FBXO30)的克隆与分析被引量：9: 2001年; 目的:分离位于6号染色体长臂鼻咽癌高频等位基因不平衡位点D6S1581(6q25.3-27)附近与鼻咽癌相关的新基因。方法:运用差异RT-PCR检测定位于D6S1581附近的11个表达序列标签(expressedsequencetags,EST)在正常人鼻咽上皮细胞和鼻咽癌细胞系中的表达水平,并对其中一个表达上调的EST在鼻咽癌组织和正常鼻咽组织中的表达情况进行分析。用Northern杂交验证其表达差异并检测其在多脏器中的表达及其所代表基因的转录本大小。利用生物信息学资源克隆并获得其全长cDNA,对该序列进行初步分析。结果:获得了一个位于6q25.3-27的在鼻咽癌中表达上调的新基因,命名为NAG23(FBXO30)(GenBank收录编号:AF248640)。该基因在68.9%的鼻咽癌活检组织中表达上调,cDNA全长3301bp,预测其开放阅读框编码一个含390个氨基酸的胞浆蛋白,该蛋白含一个F-box基序。结论:NAG23基因是一个在鼻咽癌中表达上调的新基因,很可能编码一新的F-box蛋白。NAG23可能参与了鼻咽癌的发生发展。; 李忠花曹利向娟娟张必成向秋唐珂周鸣李小玲李伟芳李桂源; 关键词：鼻咽肿瘤基因克隆 F-BOX蛋白

BRD7核输出信号序列的定位与功能鉴定被引量：1: 2011年; 目的:定位和鉴定BRD7核输出信号序列所在区域,探讨其在介导异源蛋白核输出功能中的作用。方法:以绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)做为研究模型,通过步移法对BRD7进行区段分析,探讨BRD7的不同区段对GFP核输出功能的影响,初步确定BRD7核输出信号序列所在的区域;进一步通过氨基酸序列的比对分析,确定该序列中氨基酸的含量特征及核输出信号潜在的位置。结果:BRD7的B7C1(219-450)具有介导异源蛋白GFP胞浆定位的功能,且其核输出功能在核输出信号阻滞剂Leptomycin B(LMB)的诱导下受到阻滞。该区段疏水氨基酸残基含量比较丰富,但没有发现具有典型亮氨酸聚集特征的核输出信号。结论:初步确定了BRD7核输出信号序列所在的区域为aa219-450。; 周鸣郭驰李夏雨何佳瑾徐晓杰王贺冉唐珂曹利李小玲李桂源; 关键词：BRD7 亚细胞定位

LRRC4融合蛋白的构建与表达研究被引量：4: 2002年; 在前期工作中 ,采用EST介导的定位候选克隆策略 ,克隆了一个在脑瘤中表达下调的脑特异表达新基因LRRC4 ,为进一步研究其结构与功能的关系 ,构建了含LRRC4基因全长编码区的 pGEM TEasy质粒 ,在此基础上通过亚克隆构建了LRRC4融合蛋白的绿色荧光蛋白 (pEGFP C1)表达质粒 ,瞬时转染哺乳动物细胞 ,结果发现表达的LRRC4融合蛋白定位于活细胞的细胞膜上 .同时 ,构建了LRRC4全长和截短型原核表达 pGEX 4T 2质粒 ,成功而高效地在大肠杆菌BL2 1中表达LRRC4融合蛋白 .上述工作为制备多抗。; 王洁如董利蒋明谭琛李小玲向娟娟范松青彭聪唐珂李桂源; 关键词：LRRC4 融合蛋白 EGFP GST 生物信息学

pcDNA3.1表达载体转染对细胞生长的影响被引量：6: 2001年; 为了探讨真核表达载体转染对细胞生长的影响，通过脂质体介导将ｐｃＤＮＡ３．１（＋）表达载体ＤＮＡ转染鼻咽癌细胞系ＨＮＥ１，Ｇ４１８筛选后，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定稳定表达细胞株，以ＨＮＥ１细胞为对照，观察ｐｃＮＡ３．１（＋）／ＨＮＥ１克隆细胞的生物学特性；结果显示，在ｐｃＤＮＡ３．１（＋）／ＨＮＥ１阳性克隆中，一株细胞克隆培养过程中发生自溶性死亡，一株细胞生长明显受到抑制，另一株细胞生长无明显影响，揭示在宿主细胞中ｐｃＤＮＡ３.１（＋）ＤＮＡ与宿主基因组ＤＮＡ发生了随机整合，从而表现不同的细胞生物学改变。; 余鹰周鸣曹利唐珂李伟芳李桂源; 关键词：真核表达系统哺乳动物细胞

基于一个肝癌相关长链非编码RNA基因的克隆及序列分析研究: 我们在生物学研究过程中，经常需要进行序列同源性分析，就为了确定新测序列的生物属性，主要方法就是将新序列加入到一组与之同源，但来自不同物种的序列中进行多序列同时比较，以确定该序列与其他序列间的同源性大小。这是理论分析方法中...; 唐珂; 关键词：肝细胞癌长链非编码RNA 基因克隆; 文献传递

UBAP1蛋白在鼻咽癌细胞中的表达和定位被引量：1: 2005年; 目的:研究泛肽相关新基因编码产物的特性和在鼻咽癌细胞内定位与表达。方法:利用生物信息学分析编码蛋白的一般性质并预测其定位,构建增强型绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent prote in,EGFP)与UBAP1融合基因的真核表达载体pEGFP-C2-UBAP1,通过脂质体介导转染人鼻咽癌细胞系HNE1,荧光显微镜观察UBAP1基因编码蛋白在HNE1活细胞内定位。结果:融合蛋白可在HNE1细胞中高表达,主要定位在细胞核,有较为明显的核膜聚集现象。结论:UBAP1基因编码产物在HNE1中的表达差异可能是NPC发生的原因之一。; 曾朝阳钱骏熊炜周艳宏张文玲李小玲唐珂李伟芳李桂源; 关键词：鼻咽癌绿色荧光蛋白细胞定位

在基于BAC的EB病毒基因组中引入突变被引量：4: 2008年; 为了在Epstein-Barr病毒(EBV)172kb的基因组中引入突变以研究基因功能,建立了一种简单有效的基因操作方法。在载体pcDNA3.1(+)上操作,将两端含有重组蛋白FLP识别位点(FRT)的卡那霉素筛选标记基因(kan)与鼻咽癌(NPC)来源的、包含LMP1基因全长ORF的gDNA"无缝"连接(无外源序列插入)。连接后的kan-LMP1线性DNA片段经转化、由λ噬菌体中redαβγ系统介导在E.coli中发生同源重组(ET克隆),用kan-LMP1替代了BAC-EBV(p2089)中相应的LMP1基因区域,然后经过重组蛋白FLP对FRT-kan-FRT特异性的识别,切除了引入的kan基因,留下一个69bp的FRT"疤痕"。通过抗性筛选和对菌液进行PCR扩增可以鉴定突变子。这种经改进并程序化的方法,也适应于引入其它突变或在其它BAC-疱疹病毒基因组中引入突变。; 卢建红唐运莲周鸣武明花欧阳珏高建明张荔茗李丹陈琼熊炜李小玲唐珂李桂源; 关键词：EB病毒突变同源重组

稳定转染NOR1抑制5-8F细胞片状伪足形成和Wnt信号通路被引量：2: 2012年; 细胞骨架是真核细胞中的蛋白纤维网络结构,不仅与保持细胞形态结构有关,而且影响细胞黏附和细胞运动.NOR1是从鼻咽癌中克隆得到的新基因,在鼻咽癌组织和细胞系中表达下调.本研究建立了NOR1稳定表达的鼻咽癌5-8F细胞系.过表达NOR1引起高转移性鼻咽癌5-8F细胞形态改变,抑制片状伪足形成、细胞表面积缩小、细胞聚集性增强.扫描电镜检测发现,NOR1抑制了5-8F细胞膜微绒毛的数量,引起细胞膜表面改变.细胞骨架染色发现,NOR1过表达导致5-8F细胞actin骨架连续性破坏,应力纤维增加.Realtime RT-PCR检测发现,NOR1引起5-8F细胞Wnt/β-catenin信号通路分子Wnt5A受体FZD5、FZD7表达下调,抑制了β-catenin蛋白入核.提示NOR1抑制Wnt/β-catenin信号通路激活,破坏细胞骨架连续性,抑制细胞膜微绒毛与伪足形成.; 向波王卫李文娟唐珂曾朝阳李小玲李桂源; 关键词：鼻咽癌 WNT信号通路

NGX6基因对高转移鼻咽癌细胞株5-8F细胞的影响被引量：11: 2005年; NGX6是一个新克隆的鼻咽癌候选抑瘤基因.为进一步研究其功能,在构建NGX6的真核表达载体NGX6/pcDNA3.1(+)基础上,通过脂质体转染方法将NGX6基因导入鼻咽癌细胞株SUNE-1的亚株5-8F细胞(具高成瘤高转移潜能)中,并用RT-PCR和RNA印迹鉴定,建立了稳定表达NGX6基因的5-8F细胞系.借助细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验对转染细胞的生物学行为进行了检测,同时采用包含1176个与肿瘤学相关的基因cDNA微阵列,分析了NGX6基因转染对5-8F细胞基因表达谱的影响.结果显示:转染了NGX6基因的5-8F细胞的生长速度明显减慢,在软琼脂中集落形成率较对照组显著下降(P<0.05),发现NGX6基因的转染能够上调5-8F细胞中p19、cateninα2、desmoglein1等基因的表达,同时下调EphB4、TIE2、vitronectin等基因的表达.综上所述,NGX6基因可以抑制5-8F细胞的恶性生物学行为,并影响一些与细胞周期、细胞黏附和血管生成有关的基因的表达.上述结果为鼻咽癌转移分子机制的阐明提供了重要的线索.; 王莉莉张秋红马健彭聪曹利唐珂李小玲李桂源; 关键词：NGX6基因鼻咽癌肿瘤转移 CDNA微阵列

裂解性复制诱导产生可视化重组Epstein Barr病毒: 本文为了在病毒的整个基因组中研究基因的功能,分析基因与基因之间的相互作用,将含有野生型的整个EB病毒(EBV)基因组的BAC-EBV质粒(p2089)转染至EBV阴性的HEK293细胞,经潮霉素筛选建立了HEK293/p...; 唐运莲唐珂李桂源卢建红武明花黄琛曹利彭淑平周艳宏李小玲周鸣; 关键词：EB病毒基因功能病毒重组; 文献传递

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