夏丽敏
- 作品数：13 被引量：39H指数：5
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省卫生厅青年科技人才基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- TGF-β1诱导的上皮间质转化对肝癌细胞系中边缘群细胞的调控被引量：6
- 2010年
- 目的:观察转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的上皮间质转化(EMT)对SMMC-7721中SP细胞的影响.方法:常规培养人肝癌细胞系SMMC-7721和HepG2,利用流式细胞术分析肝癌细胞系中SP细胞的含量并分选出SP细胞,Western blot检测ABCG2蛋白的表达.TGF-β1诱导肝癌细胞SMMC-7721,动态观察细胞形态学变化,Western blot和免疫荧光检测EMT相关指标钙粘蛋白(E-cadherin)的表达,通过流式细胞仪分析TGF-β1诱导前后SP细胞含量的变化.结果:利用流式细胞术成功建立了肝癌SP细胞分选体系.检测发现,SMMC-7721中SP细胞含量为4.3%,Western blot显示该SP细胞ABCG2蛋白表达明显上调.而HepG2中未能检测出SP细胞.TGF-β1诱导72h后SMMC-7721细胞发生上皮间质转化,Western blot和免疫荧光检测发现E-cadherin蛋白的表达下调,同时SP细胞含量也明显降低.结论:不同肝癌细胞系中SP细胞含量的差别可能与细胞系的遗传背景和性质不同有关.EMT可能抑制了肿瘤干细胞的增殖,促进肿瘤细胞向侵袭和转移的方向发展.
- 王波夏羽佳晏维夏丽敏刘梅田德安
- 关键词：转化生长因子Β1上皮间质转化肿瘤干细胞肝癌
- 过表达SATB1对人原发性肝癌细胞HepG2增殖的促进作用被引量：4
- 2011年
- 目的研究核基质结合蛋白SATB1对人原发性肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法脂质体介导pEGFP1-SATB1真核表达全长基因质粒转染人原发性肝癌HepG2细胞,分为实验组(pEGFP1-SATB1)、对照组(pEGFP1空载体)及空白对照组。RT-PCR、Western blot检测转染后SATB1mRNA和蛋白表达变化情况,噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪检测SATB1全长基因转染对人原发性肝癌HepG2细胞生长、增殖的影响。结果与空白对照组及对照组比较,转染pEGFP1-SATB1后,HepG2中SATB1mRNA和蛋白表达明显增加,细胞生长曲线检测结果表明转导入pEGFP1-SATB1细胞增殖明显加快,细胞数明显增多;流式细胞仪检测结果表明,细胞周期中G0/G1期细胞明显减少,S、G2/M期细胞明显增多。结论 SATB1能明显促进HepG2细胞增殖,其机制可能与参与调控细胞周期各期DNA复制、转录有关。
- 罗敏涂炜刘永健邓欢周珍珍朱倩林海华夏丽敏晏维田德安
- 关键词：SATB1细胞增殖
- 缺氧环境中黏着斑激酶对SMMC-7721细胞侵袭能力的影响被引量：4
- 2009年
- 目的研究缺氧对人肝癌细胞SMMC-7721黏着斑激酶（FAK）表达的影响以及FAK表达对SMMC-7721细胞侵袭能力的影响。方法通过1％体积分数O2的低氧培养建立人肝癌细胞SMMC-7721物理缺氧模型，Western blot检测FAK的表达。构建针对FAK mRNA的干扰质粒pshRNA-FAK及阴性对照质粒pGensil-2，并将其转染至SMMC-7721细胞，G418筛选稳定转染细胞株。Western blot检测FAK蛋白表达的变化，细胞迁移和侵袭实验检测缺氧条件下细胞迁移和侵袭能力的改变。在正常条件下将FAK真核表达质粒pcDNA3-FAK转染至SMMC-7721细胞，观测其侵袭能力的改变。根据数所资料的不同分别采用f检验、单因素方差分析、LSD法及Dunnett法进行统计学处理。结果低氧培养的SMMC-7721细胞FAK蛋白表达水平逐渐升高，24h后较0h时明显升高（JP〈0．01）。SMMC-7721细胞稳定转染pshRNA-FAK后，FAK蛋白表达显著下降，抑制率达74．6％±5.1％，在正常及缺氧条件下都对FAK表达有显著抑制作用。细胞迁移实验结果显示，缺氧显著促进SMMC-7721细胞迁移能力（t=18．66，P〈0．01），侵袭实验结果与迁移实验结果一致。转染pshRNA-FAK对促进SMMC-7721细胞在缺氧环境中的迁移能力有显著抑制作用，透膜细胞数（353±36）个较对照组（392±31）个明显降低（F=173．983，P〈0．05）；细胞侵袭实验显示，转染pshRNA-FAK对促进SMMC-7721细胞侵袭能力有显著抑制作用，透膜细胞数（160±12）个较对照组（194±13）个明显降低（F=59．674，P〈0．05）。同时转染真核表达质粒pcDNA3-FAK显著促进SMMC-7721细胞侵袭能力。结论缺氧促进SMMC-7721细胞侵袭可能与FAK表达水平升高相关，FAK表达的上调可能是缺氧促进肝癌细胞侵袭转移的机制之一。
- 晏维田德安付妤廖家智夏丽敏罗敏朱倩
- 关键词：肝细胞黏着斑激酶RNA干扰缺氧
- 靶向Pokemon基因shRNA重组质粒的构建及其对HepG2细胞生长的影响被引量：6
- 2009年
- 目的:观察携带shRNA的重组质粒对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响,并初步探讨其分子机制.方法:设计3对针对Pokemon基因不同位点的shRNA片段的真核表达载体,脂质体介导转染肝癌细胞株HepG2细胞.RT-PCR及Western blot检测转染前后Pokemon mRNA及蛋白质的表达,MTT和流式细胞仪分析转染后细胞增殖及凋亡的变化,RT-PCR检测其可能的下游因子β-catenin及H-ras的表达.结果:成功构建含shRNA片段的重组质粒,依次命名为pshRNA1、2、3.转染HepG2细胞后,Pokemon基因的mRNA及蛋白质表达水平明显下调,以pshRNA2最强,抑制率分别为75.2%(RNA水平)和72.61%(蛋白质水平).MTT显示pshRNA2可明显抑制细胞增殖;流式细胞仪测定转染后细胞凋亡增加;RT-PCR显示下游因子H-ras的表达明显降低(P<0.05),而β-catenin的表达没有变化(P>0.05).结论:采用RNAi技术可以特异性阻断Pokemon基因的表达;Pokemon基因有促进肝癌细胞株增殖及抑制其凋亡的作用,该效应可能与下调其下游因子H-ras的表达有关.
- 王波张全乐晏维夏丽敏刘梅田德安
- 关键词：POKEMON短发夹状RNAH-RAS
- 肝癌细胞系SMMC-7721中边缘群细胞在低氧诱导的上皮间质转化调控下的表达
- 2010年
- 目的:探讨低氧状态下上皮间质转化对SMMC-7721中边缘群细胞的影响.方法:低氧培养SMMC-7721细胞,动态观察细胞形态学变化,Westernblot和免疫荧光检测上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关指标钙粘连蛋白(E-cadherin)的表达,通过流式细胞仪分析诱导前后边缘群(side population,SP)细胞含量的变化.结果:低氧诱导72h后SMMC-7721细胞逐渐由原来的多角形变成类似于成纤维样的长梭形,排列松散,E-cadherin的表达下调,其相对定量值与正常培养相比,差异具有显著意义(0.41±0.23vs2.03±0.43,P<0.01),SP细胞含量也明显降低(4.3%vs0.0%,P<0.01).结论:低氧能够诱导肿瘤细胞SMMC-7721发生EMT,同时SP细胞的含量下降.EMT可能抑制了肿瘤干细胞的增殖,促进肿瘤细胞向侵袭和转移的方向发展.
- 王波夏羽佳晏维夏丽敏田德安
- 关键词：低氧上皮间质转化肿瘤干细胞肝癌
- 抑制HSP70-2基因表达诱导肝癌细胞G_2/M期阻滞的机制研究被引量：3
- 2008年
- 目的探讨HSP70-2在肝癌组织中的表达,以及抑制HSP70-2表达对肝癌细胞生长和周期影响的详细作用机制。方法免疫组织化学检测HSP70-2在45例肝癌组织和癌旁组织中的表达,Western blot检测HSP70-2在5种肝癌细胞株中的表达。设计合成针对HSP70-2基因的特异性shRNA,构建真核表达载体HSP70-2 shRNA1和HSP70-2 shRNA2。转染肝癌细胞后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot检测HSP70-2表达及细胞周期相关蛋白p-Cdc2(Tyr15)、Cdc25C、Cdc2和cyclinB1的表达变化。结果免疫组织化学检测显示,45例肝癌组织中有33例(73.3%)HSP70-2蛋白表达阳性,45例癌旁组织中仅4例(8.9%)表达阳性,表达差异有显著性(P<0.05)。HSP70-2蛋白在HepG2、Bel-7402、Huh-7、Hep3B、SMMC-7721肝癌细胞中的表达明显高于其在L02细胞中的表达。HSP70-2 shRNA1和shRNA2均能有效抑制肝癌细胞HepG2和Bel-7402中HSP70-2的表达。与control shRNA组相比,转染HSP70-2 shRNA1和shRNA2组HepG2和Bel-7402细胞生长增殖速度均明显减慢,细胞周期表现为处于G2/M期的细胞比例显著增加。Western blot检测发现,转染HSP70-2 shRNA1和shRNA2后肝癌细胞中磷酸化的p-Cdc2(Tyr15)表达增加,Cdc25C、Cdc2和cyclinB1表达显著减少。结论HSP70-2在肝癌中过表达,抑制HSP70-2表达可以显著抑制肝癌细胞的增殖,诱导细胞周期阻滞,其诱导G2/M期阻滞的机制是通过影响Cdc25C-Cdc2/cyclinB1通路来实现的。
- 夏丽敏田德安张琼晏维周珍珍朱倩罗敏张全乐
- 关键词：肝癌RNA干扰细胞周期
- 抑癌基因Smad4对HepG2生长的影响及其机制探讨被引量：1
- 2008年
- 目的研究抑癌基因Smad4对人肝癌细胞株HepG2生长的影响,并探讨其作用机制。方法采用脂质体瞬时转染法转染PFTX-5 Smad4质粒至人肝癌细胞株HepG2(实验组),以转染空质粒PFTX-5的HepG2细胞为对照组,野生型HepG2细胞为空白组,利用免疫印迹(Western blot)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Smad4及血管内皮生长因子(VEGF)表达的变化;用MTT法检测细胞增殖及用FITC-Annexin V、碘化吡啶(propidiumiodide,PI)双染后流式细胞仪(FCM)检测细胞周期和凋亡情况,Westernblot检测细胞周期素D1(Cyclin D1)表达差异。结果PFTX-5 Smad4瞬时转染到肝癌细胞后,实验组与对照组和空白组相比,Smad4 mRNA和蛋白表达明显上升(P<0.05),而VEGF mRNA和蛋白的表达显著降低(P<0.05)。实验组细胞CyclinD1表达明显下降(P<0.05),细胞周期时相分布出现合成前期(G0/G1期)阻滞。实验组细胞凋亡率明显升高(P<0.01),增殖受到明显抑制。结论Smad4高表达可能通过降低肝癌细胞中VEGF的表达,抑制cyclinD1转录合成,并诱导强烈的G1期阻滞和细胞凋亡,对细胞的增殖有明显的抑制作用,为进一步研究肝癌生长增殖机制提供了实验基础。
- 刘萍田德安夏丽敏晏维徐倩徐湖波
- 关键词：肝细胞HEPG2细胞SMAD4基因
- 沉默热休克蛋白70-2基因经线粒体依赖通路介导肝癌细胞凋亡被引量：5
- 2008年
- 目的探讨沉默热休克蛋白（HSP）70—2对肝癌细胞生长、凋亡的影响，以及诱导肝癌细胞凋亡的详细作用机制。方法Western blot、免疫细胞化学法检测HSP70—2在4种肝癌细胞和正常肝细胞中的表达。设计合成针对HSP702基因的特异性短发夹状RNA（shRNA），构建真核表达载体HSP70-2 shRNA1和HSP70—2 shRNA2。转染肝癌细胞后，四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖，膜联蛋白／碘化丙啶双染法检测细胞凋亡情况，罗丹明染色检测细胞线粒体跨膜电位变化，Western blot检测多聚ADP-核糖聚合酶、caspase3、caspase-9蛋白切割情况，以及细胞色素C、Bax、Bcl-2蛋白的表达变化。结果HSP702在4种肝癌细胞中均高表达，在L02细胞中仅有微量表达。HSP70-2 shRNA1、shRNA2均能有效抑制肝癌细胞中HSP70—2的表达。沉默HSP70-2基因显著抑制肝癌细胞生长，诱导肝癌细胞凋亡；转染48h后，shRNAl和shRNA2诱导HepG2细胞的凋亡指数分别为55．8％±1．8％和57．1％±1．6%；诱导Huh细胞凋亡指数分别为54．9%±1．1％和60．2％±2．6%，与对照组相比，差异均有统计学意义，P值均〈0．01。转染HSP70—2 shRNA48h后，肝癌细胞线粒体跨膜电位显著下降，细胞色素C从线粒体释放到胞质中，caspase3、caspase-9激活，多聚ADP核糖聚合酶被剪切降解，抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少，促凋亡蛋白Bax表达明显增加。结论沉默HSP70-2能通过激活线粒体凋亡通路导致肝癌细胞凋亡。
- 夏丽敏田德安张琼晏维王波刘梅黎培员陈斌
- 关键词：热休克蛋白细胞凋亡RNA干扰
- 核转录因子FoxH-1参与人α2（Ⅰ）型胶原基因的转录调控
- 2007年
- 核转录因子FoxH-1是DNA结合蛋白winged helix转录因子家族的新成员。在TGFD信号通路中，FoxH-1能结合到TGF β下游基因（如MIX．2）启动子区域，导致基因激活转录，表明FoxH-1在TGF β信号通路中起到转录调节的作用。TGF β能刺激HSC分泌Ⅰ型胶原，这是肝脏发生纤维化的主要环节，
- 夏丽敏田德安王波黄文杰林菊生梁扩寰
- 关键词：转录
- 人肝癌组织中原癌基因Pokemon的表达及其临床意义被引量：8
- 2010年
- 目的探讨肝癌组织中Pokemon基因的表达,并分析其与肿瘤的大小、分化程度、TNM分期等临床资料的相关性。方法收集30例原发性肝癌患者的肿瘤及其癌旁组织,用逆转录酶聚合链反应(RT-PCR)及免疫印迹(Western blot)的方法分别从核酸及蛋白水平检测标本中Pokemon基因的表达,并对其与患者的性别、肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分化程度、肿瘤的TNM分期等临床资料进行统计分析。结果RT-PCR检测肝癌和癌旁组织mRNA表达的相对强度分别为0.71±0.03、0.17±0.01。Western blot检测蛋白水平的相对表达强度分别为10.64±0.92、1.06±0.18,两者比较有统计学意义(P<0.05),肝癌组织中Pokemon的表达与肿瘤的大小有关,而与患者的年龄、肿瘤的分化程度、淋巴结转移及肿瘤TNM分期等无关。结论Pokemon的表达上调在肝癌的增殖中可能发挥重要作用。
- 王波田德安张全乐夏丽敏晏维王颖刘梅
- 关键词：POKEMON肝癌原癌基因
