孔斌
- 作品数：21 被引量：26H指数：3
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- 卵巢移植对去势大鼠海马神经元和雌激素膜受体GPR30表达的影响被引量：2
- 2015年
- 目的观察去势大鼠卵巢移植后海马神经元形态、尼氏体数量和雌激素膜受体GPR30表达的变化,评价卵巢移植对海马神经元功能的保护作用。方法成年雌性SD大鼠分为对照组、去势组和卵巢移植组。对照组行假手术,去势组行双侧卵巢切除,卵巢移植组在切除双侧卵巢7 d后,肾被膜下移植出生3 d内乳鼠的卵巢。于移植后的7、14、21和28 d,尼氏染色观察海马神经元形态、尼氏体数量;免疫组织化学法和Western blot检测GPR30蛋白的表达。结果去势组随去势时间延长,海马神经元排列散乱,胞体皱缩,核固缩深染,神经元尼氏体数量减少(P<0.05),GPR30表达减少(P<0.05)。卵巢移植组随移植时间的延长,细胞形态逐渐好转并与正常形态接近,海马神经元内尼氏体数量和GPR30蛋白表达逐步恢复,并接近对照组。结论卵巢移植可以逆转去势所致神经元形态改变,并提高GPR30蛋白的表达,促进海马神经元蛋白合成功能的恢复。
- 刘芳黑常春孔斌常青郑小敏吴凯周文献朱万平赵承军
- 关键词：卵巢去势卵巢移植海马神经元GPR30
- 卵巢移植对去势大鼠海马神经元的抗凋亡作用被引量：1
- 2014年
- 目的评价卵巢移植的海马神经保护效果。方法将(200±20)g的SD大鼠在动情间期去除其双侧卵巢,7 d后一组在其肾被膜下移植出生3 d内的SD乳鼠卵巢;一组给予隔天腹腔注射己烯雌酚1 mg/kg。分别于干预后的4 d、7 d、14 d和28 d,免疫组化检测海马神经元Bax、Bcl-2表达。结果卵巢移植组除移植4 d后,Bax的阳性表达有所下降,降幅虽不及同期己烯雌酚腹腔注射组,但BCL-2的阳性表达同时提高,Bcl-2/Bax比值随移植时间的延长,增高明显,尤其移植28 d后明显高于同期给药组(P<0.05)。结论卵巢移植不仅通过降低Bax阳性表达及提高BCL-2的阳性表达抑制去势大鼠海马神经元的凋亡;己烯雌酚腹腔注射组仅通过降低Bax阳性表达抑制去势大鼠海马神经元的凋亡,卵巢移植对去势大鼠海马神经元的抗凋亡效果优于单纯己烯雌酚替代组。
- 孔斌黑常春刘芳蔡玉芳朱万平余建强王燕蓉赵承军
- 关键词：卵巢移植去势凋亡海马神经元
- 热应激对雌性小鼠发情周期及生殖激素分泌的影响
- 2019年
- 全球气候变暖导致许多动物生育力下降.本研究旨在探索热应激对小鼠发情周期及各发情阶段生殖激素的影响.本研究选择48只12周龄雌性小鼠随机分为热应激组和对照组饲养7 d,阴道外观和涂片法记录小鼠发情周期,利用ELISA方法检测各发情阶段血清中FSH、LH、E2和P4的变化.结果显示,热应激导致小鼠发情后期和总发情周期显著延长(P<0.05),发情期LH浓度和E2浓度极显著降低(P<0.01),发情后期P4浓度显著降低(P<0.05).暗示热应激可能通过抑制不同发情阶段生殖激素的水平和延长小鼠发情周期来影响小鼠的生育力.
- 徐海瑾孔斌刘晓兵宋辉李卉
- 关键词：热应激小鼠发情周期生殖激素
- β-巯基乙醇和枸杞多糖对胎儿卵巢组织冷冻保存的影响
- 为了改善卵巢组织的冷冻保存和移植效果,并比较β-巯基乙醇(β-ME)和枸杞多糖(LBP)在胎儿卵巢快速冷冻方面的保护作用,本实验通过观察冷冻保存的胎儿卵巢组织异种移植到裸鼠肾被膜下的发育情况,探索LBP和β-ME在卵巢组...
- 蔡玉芳王燕蓉孔斌崔岫沈新生
- 干扰FoxO1慢病毒包装及稳转大鼠骨髓间充质干细胞株的建立
- 2023年
- 目的建立干扰叉头状转录因子O1(FoxO1)的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)稳转株,为研究BMSCs定向分化提供条件。方法提取大鼠原代BMSCs。构建FoxO1干扰载体,扩增后进行测序鉴定。FoxO1质粒瞬转293T细胞后,通过Western blot验证其干扰效果,并选择干扰效果最好的质粒载体。然后通过三因子慢病毒包装系统将FoxO1质粒和两个辅助质粒共转染293T细胞,包装慢病毒,组名为sh1,sh2,sh3,Vector。包装的干扰慢病毒和阴性对照病毒感染大鼠BMSCs,通过Western blot和RT-qPCR检测其表达效果。结果成功提取大鼠原代BMSCs;测序结果显示,重组FoxO1质粒构建成功;重组FoxO1质粒瞬时转染293T细胞48 h,细胞荧光明显,表明EGFP表达良好;Western blot结果显示,载体中标签蛋白表达成功,并筛选到干扰效果最佳的目的质粒sh1-FoxO1;干扰FoxO1慢病毒滴度为1×10^(8) TU·μL^(-1);包装完成的慢病毒感染BMSCs,经嘌呤霉素筛选后,Western blot结果显示,与Vector组相比,sh1组FoxO1的蛋白相对表达量降低(P<0.05);RT-qPCR结果显示,与Vector组相比,sh1组FoxO1的mRNA相对表达量降低(P<0.01),得到干扰FoxO1的大鼠BMSCs稳转株。结论成功构建了FoxO1干扰BMSCs稳转株,为进一步研究FoxO1在诱导BMSCs定向分化为IPCs过程中的作用及其潜在机制奠定了基础。
- 徐海瑾徐彧孔斌李雄李建宁李卉曹婷婷宋辉
- 关键词：糖尿病骨髓间充质干细胞慢病毒载体
- 卵巢摘除对急性肝损模型鼠脑血管内皮细胞凋亡的影响被引量：1
- 2011年
- 目的研究卵巢摘除对于急性肝损伤模型鼠脑血管内皮细胞功能的影响。方法对去势(卵巢摘除)与未去势小鼠分别给与四氯化碳制备急性肝损伤模型,另设单纯卵巢摘除组及空白对照组;免疫组织化学法观察各组小鼠脑血管内皮细胞Bax及Bcl-2的表达。结果发现各组小鼠嗅脑及皮层等脑区毛细血管内皮细胞Bax阳性表达结果类似;而Bcl-2表达存在明显差异,急性肝损伤组嗅脑及皮层等各脑区毛细血管内皮细胞Bcl-2阳性表达呈强阳性;而去势+急性肝损伤组各脑区Bcl-2的阳性表达均偏弱。结论卵巢摘除或卵巢功能退化会影响脑血管内皮细胞应对化学毒性损伤时的抗凋亡功能,从另一个侧面揭示了卵巢相关激素的脑保护作用。
- 郑小敏崔岫赵承军黑常春党玲吴凯沈新生蔡玉芳周文献孔斌杨文娟王燕蓉
- 关键词：卵巢摘除血管内皮细胞凋亡
- 卵巢移植对去势大鼠海马神经元形态及BDNF表达的影响被引量：8
- 2012年
- 目的:观察卵巢移植后大鼠海马神经元形态变化及BDNF的表达,评价卵巢移植对海马神经元的保护效果。方法:制作去势SD大鼠模型,卵巢移植干预组在其肾被膜下移植出生3 d内的SD乳鼠卵巢,外源性激素干预组隔天给予腹腔注射乙烯雌酚1 mg/kg。分别于干预后的4、7、14和28 d,电镜观察海马神经元形态及免疫组化观察BDNF的表达情况。结果:卵巢移植后随着移植时间的延长血清雌激素和孕酮水平都逐步升高,乙烯雌酚组仅雌激素水平升高;各组海马神经元形态逐渐好转,移植14 d和28 d组海马神经元的形态改善优于同期给药组。卵巢移植组和乙烯雌酚组BDNF的表达在各区均有所升高,卵巢移植14 d和28 d组CA3区尤为明显(P<0.05)。结论:卵巢移植可以恢复卵巢内分泌功能,对海马神经元形态有改善作用及促进BDNF的表达,其神经元保护作用优于单纯乙烯雌酚干预组。
- 孔斌刘芳张文华黑常春张焱王燕蓉赵承军
- 关键词：卵巢移植去势海马神经元
- 小鼠卵巢玻璃化冻融过程中FSH干预对血管生成相关因子表达的影响被引量：2
- 2015年
- 目的在小鼠卵巢玻璃化冻融过程中给予重组人卵泡雌激素(r FSH)干预,通过观察其对卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSH-R)及与血管生成相关的Integrinαvβ3、Angpt-2、Kindlin-2蛋白表达的影响,提供FSH干预对卵巢血管生成相关因子影响的依据。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢随机分为新鲜对照组(FCG)、玻璃化冻存对照组(VCG)、0.3IU·m L-1FSH干预玻璃化冻存组(FSH-VG)。对3组卵巢内各级卵泡进行计数;通过免疫组化方法观察并分析各组FSH-R、Angpt-2、Kindlin-2在卵巢不同细胞中的定位;观察粘附分子Integrinαvβ3在各组卵巢细胞中表达,并进行亚基表达量的分析。结果FSH-VG组的原始卵泡、初级卵泡、正常卵泡及总卵泡数均高于VCG组,但低于FCG组(P均<0.05),闭锁卵泡数VCG组高于FCG及FSH-VG组(P均<0.05);FSH-R与Angpt-2阳性表达呈现FSH-VG与VCG组均低于FCG组(P<0.05),但FSH-VG组高于VCG组(P<0.05);Kindlin-2阳性表达在FSH-VG组与FCG组之间差异无统计学意义(P>0.05),但均高于VCG组(P<0.01或<0.05);Integrinβ3蛋白表达量FCG与FSH-VG组间差异无统计学意义(P>0.05),但均高于VCG组(P<0.05),Integrinαv的表达3组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论玻璃化冻融过程中添加FSH可以上调FSH-R及粗血管生成的相关因子Integrinβ3、Angpt-2和Kindlin-2蛋白的表达,提高正常卵泡数。
- 张红马文叶杨延周裴秀英常青马会明马文智孙苗于佳蔡玉芳王红燕黑常春赵承军孔斌王燕蓉
- 关键词：小鼠卵巢RFSH玻璃化冻存ΑVΒ3
- 雷帕霉素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护效应及其机制研究
- 2020年
- 目的探讨雷帕霉素对大鼠脑缺血再灌注损伤模型的保护效应及其机制。方法将SD大鼠双侧颈动脉结扎10 min后再通,造成大鼠前脑缺血再灌注损伤模型,分别于术前3 d和术后24 h给予雷帕霉素干预。32只大鼠分为假手术组(NC)、模型组(N7d)、雷帕霉素预给药组(Pre-NR7d)和雷帕霉素治疗组(Post-NR7d),术后7 d取大鼠海马组织进行常规病理和Tunel染色观察缺血再灌注后海马神经元坏死和凋亡情况;蛋白印记检测凋亡启动因子细胞色素酶C(cytochrome c,Cyt c)和自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Beclin-1,观察凋亡和自噬情况。结果病理结果显示N7d组大鼠海马CA1区神经元出现坏死性改变,坏死神经元细胞百分比为(89.83±2.91)%,而Pre-NR7d组[(19.48±2.68)%]和Post-NR7d组[(67.80±5.55)%]均降低了大鼠海马坏死神经元细胞数量(P均<0.01),Pre-NR7d组效果优于Post-NR7d组(P<0.01)。Tunel染色结果显示,N7d组大鼠海马CA1区阳性细胞占(54.35±6.18)%,较NC组[(4.62±0.98)%]升高(P<0.01),而Pre-NR7d组[(4.22±0.61)%]和Post-NR7d组[(47.72±6.08)%]均降低了大鼠海马CA1区Tunel阳性细胞数(P均<0.01),Pre-NR7d组较Post-NR7d组凋亡细胞减少(P<0.01)。缺血再灌注引起大脑海马Beclin-1和LC3-Ⅱ的升高及Cyt c由线粒体释放入胞浆,而雷帕霉素抑制Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达并减少Cyt c在胞浆的释放(P均<0.01),Pre-NR7d组较Post-NR7d组抑制效果更为显著(P<0.05或<0.01)。结论大鼠脑缺血再灌注后大脑海马组织坏死、凋亡、自噬均存在,雷帕霉素可通过降低自噬和凋亡,减轻脑缺血再灌注损伤,预防性给药效果优于术后24 h给药。
- 高芙蓉黑常春杨笑张晨阳孔斌赵承军常青
- 关键词：雷帕霉素脑缺血再灌注损伤自噬凋亡
- 双氢睾酮调节原代培养大鼠Sertoli细胞GDNF的表达
- 2015年
- 目的观察双氢睾酮对原代培养大鼠Sertoli细胞GDNF及相关细胞信号通路关键蛋白的表达,探讨Sertoli细胞GDNF表达调控的机制。方法原代培养出生后20 d大鼠Sertoli细胞,给予双氢睾酮干预,免疫荧光检测GDNF在细胞中定位和表达强度,Western blot检测GDNF,ERK和CREB蛋白的表达及磷酸化情况,并用ERK和c AMP/PKA信号通路抑制剂干预。结果 GDNF表达在Sertoli细胞质中,双氢睾酮干预可增加GDNF的表达(P<0.05),并使ERK和CREB磷酸化水平增高(P<0.05),使用ERK和c AMP/PKA信号通路抑制剂可减低双氢睾酮诱导的GDNF表达(P<0.05)。结论双氢睾酮通过激活ERK信号通路诱导Sertoli细胞GDNF的表达。
- 常青王丽梅黑常春蔡玉芳吴凯孔斌朱万平沈新生赵承军
- 关键词：双氢睾酮SERTOLI细胞GDNFERK信号通路
