孙宏亮
- 作品数：6 被引量：16H指数：3
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人用狂犬病脂质体疫苗的免疫效果被引量：5
- 2007年
- 目的对狂犬病脂质体疫苗进行免疫效果评价。方法用狂犬病脂质体疫苗和无佐剂疫苗分别免疫小鼠，以NIH法检测保护效力，RFFIT法检测中和抗体，流式细胞仪检测淋巴细胞表面标记，体外实验法检测淋巴细胞增殖能力，乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞活性，ELISA检测试剂盒检测免疫后小鼠IL-2和IFN水平。结果狂犬病脂质体疫苗与无佐剂疫苗相比，可提高效力2—3倍，脂质体疫苗组中和抗体水平明显高于无佐剂疫苗组，两组之间差异有显著意义。狂犬病脂质体疫苗可增强细胞免疫，小鼠CD4^＋／CD8^＋比例、淋巴细胞增殖指数、NK细胞活性、IL-2及IFN活性与无佐剂疫苗相比，差异均有显著意义。结论狂犬病脂质体疫苗可同时增强细胞免疫和体液免疫。
- 郭秀侠杨倩刘岩苑志刚孟时孙宏亮福泉于洪涛盛军
- 关键词：狂犬病毒脂质体细胞免疫体液免疫
- 森林脑炎病毒Vero细胞适应株的全基因组序列分析
- 2015年
- 目的对森林脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)森"张"株在Vero细胞上的适应株(以下称SZV株)进行全基因组测序,并与TBEV远东亚型的其他毒株、欧洲亚型毒株进行比较。方法设计TBEV的特异性引物,提取SZV株病毒总RNA,以其为模板,采用RT-PCR方法分段扩增序列并测序,应用Vector NTI 9.0软件进行拼接,并与森"张"株、Gen Bank中报道的TBEV远东亚型Oshima 5-10株、Sofjin-HO株及欧洲亚型263株、Neudoerfl株的全长基因序列进行比对分析。结果 SZV株的全基因组由10 782个核苷酸组成,仅编码1个开放阅读框,长度为10 245个核苷酸,共编码3 414个氨基酸。SZV株与TBEV远东亚型的Oshima5-10株和Sofjin-HO株ORF区编码的氨基酸序列同源性分别为95.0%和94.6%,与TBEV欧洲亚型的典型毒株263株和Neudoerfl株ORF区编码的氨基酸序列同源性分别为91.1%和91.0%。结论对TBEV Vero细胞适应株SZV进行了全基因组序列测定及分析,为研制基于Vero细胞基质的森林脑炎疫苗奠定了基础。
- 孙宏亮王伟刘双军麻红梅张朔邢坤鹏李野王涛宋宗明
- 关键词：森林脑炎病毒VERO细胞
- 森林脑炎病毒包膜E蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性初步评价被引量：2
- 2020年
- 目的原核表达及纯化森林脑炎病毒(tick-bome encephalitisvirus,TBEV)包膜E蛋白,并初步评价其免疫原性。方法采用RT-PCR法扩增TBEV E蛋白基因,克隆至载体pET-28a,构建重组原核表达质粒pET-28a-TBEV E,转化感受态E.coli BL21(DE3),挑取阳性克隆,扩增后经终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导,表达产物经12%SDS-PAGE及Western blot鉴定。将鉴定正确的重组蛋白采用镍柱亲和法纯化,铝佐剂吸附后,经小鼠左侧腹腔注射,0.5 mL/只,间隔1周加强免疫1次,末次免疫后7、14、21、28、35、42、49 d,经小鼠眼眶采血,分离血清,ELISA法测定小鼠血清抗体水平。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒pET-28a-TBEV E构建正确。表达产物相对分子质量约55000,主要以包涵体形式表达,表达量约22.3%,且可与小鼠抗TBEV血清发生特异反应,纯化后纯度达90%。末次免疫后21 d,小鼠血清抗体效价达最高,为1∶6400。结论经原核表达系统成功表达并纯化了TBEV E蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性,本实验为TBEV诊断制剂及基因工程疫苗的研发奠定了基础。
- 邴振虹王兰菊周永飞常东英张健锋王伟韩顺子常军亮孙宏亮曹玉锋邹勇
- 关键词：森林脑炎病毒基因重组原核表达免疫原性
- 应用篮式生物反应器制备森林脑炎灭活疫苗(Vero细胞)被引量：3
- 2015年
- 目的探讨篮式生物反应器制备森林脑炎灭活疫苗（Vero细胞）。方法应用14 L篮式生物反应器,以Vero细胞作为森林脑炎病毒增殖的细胞基质,采用片状载体对Vero细胞进行高密度培养,探讨不同细胞接种浓度对生物反应器内细胞密度及病毒产量的影响。连续收获的森林脑炎病毒液经超滤浓缩、1∶4 000（v/v）β-丙内酯灭活、柱层析纯化后,获得疫苗原液,按照《中国药典》三部（2010版）进行相关检测。结果用（5-7.5）×105个/ml细胞浓度接种Vero细胞培养森林脑炎病毒可连续收获30 d以上,平均病毒滴度为8.4 lg LD50/ml;1∶4 000（v/v）β-丙内酯灭活24 h可完全灭活病毒,3批病毒浓缩液灭活验证试验均未检出残余活病毒;柱层析纯化后杂蛋白去除率可达89.56%;疫苗原液经无菌检查合格,其他各项质量指标均符合《中国药典》三部（2010版）规定。结论应用篮式生物反应器培养Vero细胞制备了合格的森林脑炎灭活疫苗,该工艺适用于森林脑炎灭活疫苗的规模化生产。
- 刘岩松王华孙宏亮安继新纪权邢坤鹏张朔刘梦妮邹勇
- 关键词：生物反应器VERO细胞
- 生产场地变更后双价肾综合征出血热灭活疫苗的动物安全性被引量：1
- 2015年
- 目的观察生产场地变更前、后双价肾综合征出血热灭活疫苗(简称出血热疫苗)的肌肉刺激性,评价该疫苗的动物安全性。方法采用同体左、右侧自身对比法,经新西兰白兔左、右侧大腿股四头肌肌内分别注射氢氧化铝佐剂和出血热疫苗(生产场地变更前、后各3批),均1.0 ml/只,给药1次。于注射后第3天进行大体剖检及病理组织学检查。结果新西兰白兔的出血热疫苗与氢氧化铝佐剂注射侧肌肉刺激性损伤相似,生产场地变更前、后的局部肌肉组织的病理变化无明显差异。结论生产场地变更后的出血热疫苗具有可靠的动物安全性。
- 杨红育赵红丽戴龙刘智慧张雪楠刘辉赵亚力孙宏亮宋宗明
- 关键词：双价肾综合征出血热灭活疫苗病理组织学
- 冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)冻干保护剂的筛选被引量：5
- 2017年
- 目的筛选适用于冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的冻干保护剂。方法用同一批冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液在同一冻干条件下,改变右旋糖酐40、海藻糖及人血白蛋白3种保护剂主要成分的含量,组合成6种保护剂配方,分别制备成半成品。冻干后检测成品外观、疫苗效力及热稳定性,确定最佳冻干保护剂配方。以最佳保护剂配方制备6批成品进行适用性验证,并选择3批成品进行长期稳定性验证。结果确定最佳冻干保护剂的配方为4%海藻糖、3%右旋糖酐40、1%蔗糖、0.5%甘露醇、2%人血白蛋白。以该配方制备的6批成品的各项检测指标均符合《中国药典》三部(2010版)的要求,其中3批成品经2~8℃保存12个月后的效价较稳定。结论筛选获得了最佳冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的冻干保护剂,且具有良好的稳定性。
- 李春艳赵淑洁孙宏亮闫峰郑华赵博柴博雅杨屹
- 关键词：冻干保护剂稳定性
