底妍
- 作品数：8 被引量：19H指数：2
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- 磷酸二酯酶4B在脂多糖诱导大鼠小胶质细胞炎性因子释放中的作用被引量：1
- 2013年
- 目的 评价磷酸二酯酶4B（PDE4B）在脂多糖诱导大鼠小胶质细胞炎性因子释放中的作用.方法 采用随机数字表法,将原代大鼠小胶质细胞分为5组（n=24）：对照组、脂多糖组、单纯载体组、错配小干扰RNA组（siRNA）组和PDE4B-siRNA组.对照组和脂多糖组不转染;单纯载体组给予脂质载体1 μl;错配siRNA组和PDE4B-siRNA组分别加入错配siRNA 2μl、PDE4B-siRNA 2 μl与脂质载体1μl（加入100μl无血清培养基中,siRNA终浓度为20 nmol/L）,各组转染或培养48 h后,采用Western blot法和RT-PCR法分别测定PDE4B蛋白与mRNA的表达,除对照组外其余各组加入含有脂多糖100 ng/ml的无血清培养基,培养24 h后采用ELISA法测定TNF-α及IL-1β释放水平,采用Western blot 法检测小胶质细胞细胞外调节蛋白激酶（ERK）、磷酸化ERK（p-ERK）的蛋白表达.结果 与对照组相比,其余4组TNF-α和IL-1β释放水平升高,小胶质细胞p-ERK表达上调,PDFB-siRNA组小胶质细胞PDE4B蛋白及其mRNA表达下调（P＜0.05）,脂多糖组、单纯载体组和错配siRNA组差异无统计学意义（P＞0.05）;与脂多糖组相比,PDE4B-siRNA组TNF-α和IL-1β释放水平降低,p-ERK表达下调（P＜0.05）,单纯载体组和错配siRNA组差异无统计学意义（P＞0.05）.5组小胶质细胞ERK表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 PDE4B可促进脂多糖诱导的小胶质细胞炎性因子释放,机制与激活ERK有关.
- 和晓韵张利东底妍刘健李伟彦嵇晴
- 关键词：小神经胶质细胞脂多糖类细胞因子类
- 小胶质细胞表面受体在神经病理性疼痛中的作用研究进展被引量：5
- 2013年
- 神经病理性疼痛(NP)是一种顽固性的慢性疼痛综合征,对患者的身心健康有着极大的影响。小胶质细胞是神经元-胶质细胞网络中最为活跃的分子,其细胞膜上存在着许多离子通道和神经递质受体,通过复杂的信号转导通路产生和释放神经活性物质参与疼痛信号的转导与调控,在慢性疼痛的产生过程中起着重要作用。总结分析小胶质细胞表面受体在NP中的作用研究进展,对于促进该领域的基础研究和临床诊疗均有重要意义。
- 底妍李伟彦
- 关键词：神经病理性疼痛小胶质细胞神经递质受体
- 鞘内注射PDE4A、PDE4C亚型特异性siRNA对L5脊神经结扎大鼠神经病理性疼痛的影响被引量：1
- 2013年
- 目的观察鞘内分别注射针对磷酸二酯酶4A、4C亚型基因(phosphodiesterase 4A,PDE4A;phosphodiesterase 4C,PDE4C)的小干扰RNA(siRNA)对L5脊神经结扎(SNL)大鼠的痛觉高敏行为的影响。方法72只鞘内置管成功的成年雄性SD大鼠,随机均分为六组:假手术组(S组)、生理盐水组(NS组)、单纯载体组(Lipofectamin TM RNAiMAX,V组)、错配SiRNA组(M组)、PDE4A siRNA组(siR-A组)和DE4C siRNA组(siR-C组)。S组仅暴露L5脊神经,其余五组行SNL。S组、NS组分别在术后即刻、术后1、3、5、7d给予等量生理盐水10μl,其余四组分别给予Li-pofectamin TM RNAiMAX、错配SiRNA、PDE4A siRNA、PDE4C siRNA 2μg/10μl,并在术前1d、术后2、4、6、8d测定热缩足潜伏期(TWL)和机械缩足阈值(MWT),第8天行为学测定结束后处死大鼠,取腰段脊髓,采用western blot和ELISA法分别测定PDE4A、PDE4C的蛋白表达水平及肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β表达水平。结果与S组和siR-A组比较,其它四组大鼠PDE4A蛋白含量明显增加(P<0.05)。与S组和siR-C组比较,其它四组的PDE4C蛋白含量明显增加(P<0.05)。与S组比较,其它五组大鼠术后2、4、6、8dTWL明显减慢,MWT明显下降(P<0.05);术后第8天大鼠脊髓TNF-α和IL-1β含量明显升高(P<0.05)。结论鞘内分别注射PDE4A-siRNA、PDE4C-siRNA可明显抑制SNL大鼠腰脊髓段PDE4A、PDE4C蛋白的表达,但不能缓解大鼠机械和热痛觉高敏,抑制TNF-α、IL-1β的表达。
- 和晓韵底妍刘清珍刘健嵇晴李伟彦
- 关键词：磷酸二酯酶4
- 瑞舒伐他汀对大鼠吗啡耐受的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨瑞舒伐他汀对大鼠吗啡耐的影响。方法雄性SD大鼠48只，体重200～250g，采用随机数字表法，将大鼠随机分为6组（n=8）：对照组（C组）、吗啡耐受组（MT组）、瑞舒伐他汀对照组（RC组）和不同剂量瑞舒伐他汀处理组（R1组～R3组）。每天8：00和16：00皮下注射吗啡10mg／kg，连续5d，制备吗啡耐受模型。C组和RC组给予等量生理盐水。C组和MT组每天皮下注射生理盐水或吗啡前30min给予生理盐水10ml／kg灌胃，连续5d；RC组、R1组、R2组和R3组每天皮下注射生理盐水或吗啡前30min分别给予10．0、0．d、2．0和10．0mg／kg瑞舒伐他汀灌胃，连续5d。模型制备前1d（T1）和制备后1d（T2）测定热缩足潜伏期，计算最大镇痛效应百分比（MPE）；T2时痛阈测定结束后，处死大鼠，取k脊髓，采用Western blot法测定脊髓细胞外调节蛋白激酶（ERK）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）的表达水平，采用ELISA法测定以及白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（TNF—α）的含量。结果与C组相比，MT组和R1组T2时MPE降低，脊髓p-ERK、IL-1β和TNF-α水平升高（P〈0．05），RC组、R2组和R2组差异无统计学意义（P〉0．05）；与MT组相比，RC组、避组和R2组T2时MPE升高，脊髓p-ERK、IL-1β和TNF-α水平降低（P〈0．05），R1组差异无统计学意义（P〉0．05）。R2组和R3组上述指标比较差异无统计学意义（P〉0．05），6组大鼠脊髓ERK表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）。结论瑞舒伐他汀可减轻大鼠吗啡耐受，其机制可能与抑制脊髓ERK磷酸化及降低IL-1β和TNF-α水平有关。
- 李永乐舒银银张瑶底妍孙茜谢军明刘健李伟彦
- 关键词：降血脂药吗啡药物耐受性
- 鞘内注射PDE4B-siRNA对L5脊神经结扎大鼠痛觉高敏的影响被引量：1
- 2013年
- 目的观察鞘内注射针对磷酸二酯酶4B(PDE4B)基因的小干扰RNA(siRNA)对L5脊神经结扎(SNL)大鼠的热痛觉及机械痛觉高敏的影响。方法雄性SD大鼠70只,随机均分为假手术组(Sham组)、生理盐水组(NS组)、单纯载体组(V组)、错配siRNA组(siRNA-M组)和PDE4B-siRNA组(siRNA-B组),分别于神经结扎术后即刻以及术后1、3、5、7d鞘内注射生理盐水、生理盐水、LipofectamineRNAiMAX、错配siRNA 2μg和PDE4B-siRNA 2μg,容量均为10μl。PDE4B-siRNA、错配siRNA与载体均在注射前30min混匀。于术前1d及术后2、4、6、8d分别测定五组大鼠的机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL);术后4、8d行为学测试结束后每组各处死6只大鼠,取腰段脊髓,采用实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)和western bolt分别测定PDE4B的mRNA和蛋白表达。结果与术前1d比较,术后2、4、6、8dNS组、V组、siRNA-M组和siRNA-B组大鼠MWT明显缩短、TWL明显减小(P<0.05)。与NS组比较,术后2、4、6、8dsiRNA-B组大鼠MWT明显延长、TWL明显增加(P<0.05)。与Sham组比较,术后4、8dNS组、V组、siRNA-M组、siRNA-B组大鼠脊髓组织的PDE4B mRNA、PDE4B蛋白表达升高(P<0.05)。与NS组比较,术后4、8dB组大鼠脊髓PDE4B mRNA、PDE4B蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论鞘内注射PDE4B-siRNA可显著抑制L5SNL大鼠腰段脊髓PDE4B的mRNA和蛋白表达,有效缓解机械和热痛觉高敏。
- 底妍和晓韵嵇晴刘清珍刘健李伟彦
- 关键词：神经病理性疼痛脊神经结扎小干扰RNA
- 瑞舒伐他汀部分恢复吗啡耐受大鼠的吗啡镇痛效能被引量：8
- 2013年
- 目的探讨瑞舒伐他汀对吗啡耐受大鼠的吗啡镇痛效能的影响及其相关的分子机制。方法 48只♂SD大鼠随机分成6组(n=8):Ⅰ组为空白对照组;Ⅱ组为吗啡耐受组;Ⅲ组为10 mg.kg-1瑞舒伐他汀对照组;Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组分别为0.4、2、10 mg.kg-1瑞舒伐他汀处理组。Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组皮下注射吗啡10 mg.kg-1,Ⅰ组和Ⅲ组皮下注射生理盐水,每天8∶00和16∶00各1次,连续10 d。d 6起,上午皮下注射前30 min,Ⅰ、Ⅱ组给予生理盐水灌胃,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组给予相应剂量的瑞舒伐他汀灌胃,连续5 d。d 6、11,测定大鼠基础热缩足潜伏期(PWTL)后,计算尾静脉注射吗啡30 min时各组大鼠的MPE值。d 11行为学检测后处死大鼠,留取腰5脊髓,比较各组脊髓内细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)及星形胶质细胞表面标志物GFAP的表达水平。结果①d 6,6组的基础PWTL无明显差异。与Ⅰ组相比,Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ组MPE值明显降低(P<0.05)。d 11,6组的基础PWTL无差异。与Ⅰ组相比,Ⅱ、Ⅳ组尾静脉注射吗啡后30 min的MPE值明显降低(P<0.05);与Ⅱ组相比,Ⅴ、Ⅵ组的MPE值明显升高(P<0.05)。②d 11,6组大鼠腰5脊髓内总ERK表达水平差异无显著性。与Ⅰ组相比,Ⅱ、Ⅳ组腰5脊髓内p-ERK表达明显升高(P<0.05);与Ⅱ组相比,Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ组腰5脊髓内p-ERK表达明显降低(P<0.05)。与Ⅰ组相比,Ⅱ组腰5脊髓内GFAP的荧光强度明显升高(P<0.05);与Ⅱ组相比,Ⅵ组腰5脊髓内GFAP的强度明显降低(P<0.05)。结论瑞舒伐他汀能够部分恢复吗啡耐受大鼠的吗啡镇痛效果,这可能与其抑制脊髓内ERK的磷酸化,减少星形胶质细胞活化有关。
- 李永乐谢军明舒银银张瑶底妍孙茜刘健李伟彦
- 关键词：吗啡耐受神经炎症胶质细胞他汀脊髓背角
- 沉默PDE4B对内毒素刺激的小胶质细胞内cAMP的影响被引量：1
- 2013年
- 目的观察磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4,PDE4)4种亚型(A、B、C和D)的siRNA对内毒素刺激前后小胶质细胞内cAMP的影响。方法 24孔板接种原代培养的小胶质细胞,收集细胞测定PDE4 4种亚型的蛋白含量。随机将细胞分为空白对照组、LPS组、单纯载体组、错配siRNA组、PDE4A-siRNA组、PDE4B-siRNA组、PDE4C-siRNA组和PDE4D-siRNA组,空白对照组与LPS组细胞不进行转染;其余5组分别转染LipofectaminTMRNAiMAX、错配siRNA、PDE4A siRNA、PDE4B siRNA、PDE4C siRNA和PDE4D siRNA,48 h后收集各组细胞测定4种亚型mRNA及细胞内cAMP的表达水平;除空白对照组外,其余7组细胞在转染48 h后分别给予100μg·L-1LPS,刺激30 min后收集各组细胞测定细胞内cAMP的浓度。结果 PDE4 4种亚型蛋白均在小胶质细胞内表达;转染48 h后,PDE4A-siRNA、PDE4B-siRNA、PDE4C-siRNA和PDE4D-siRNA可分别明显抑制相应PDE4亚型mRNA的表达(P<0.05),各组细胞内cAMP的含量无明显改变(P>0.05);LPS刺激后各组细胞内cAMP的含量均比空白对照组明显增高(P<0.05),与LPS组相比,仅PDE4B-siRNA组细胞内的cAMP含量明显升高(P<0.05)。结论 PDE4B-siRNA可有效抑制PDE4B mRNA的表达并能明显升高LPS刺激后细胞内的cAMP含量。
- 和晓韵底妍张利东刘健刘清珍李伟彦嵇晴
- 关键词：小胶质细胞磷酸二酯酶4神经病理性疼痛环磷酸腺苷
- 磷酸二酯酶4B蛋白在神经病理性痛大鼠脊髓炎症反应中的作用：与ERK的关系被引量：1
- 2013年
- 目的评价磷酸二酯酶（PDE）4B蛋白在神经病理性痛大鼠脊髓炎症反应中的作用及其与ERK的关系。方法健康雄性sD大鼠60只，体重180～220g，先行L5，6鞘内置管，第6天确定导管位置后，采用随机数字表法分为5组（n=12）：假手术组（Sham组）、生理盐水组（Ns组）、单纯载体组（V组）、错配siRNA组（siR—M组）及PDE4B—siRNA组（siR—B组）。结扎L5脊神经制备大鼠神经病理性痛模型。于结扎后即刻、第1、3、5、7天各组分别鞘内注射10μl生理盐水、10μl生理盐水、Lipofecta—min RNAiMAX、错配siRNA和Lipofectamin RNAiMAX包裹的PDE4B—siRNA（2pg／10μl）。术前1d及术后第2、4、6和8天分别测定大鼠机械痛阈；术后第8天行为学测试结束后处死大鼠取腰段脊髓，采用Westernbolt法检测PDE4B、细胞外调节蛋白激酶（ERK）、磷酸化ERK（p-ERK）的蛋白表达，ELISA法测定TNF—α、IL-1G和IL-6水平。结果与Sham组比较，Ns组、V组、siR—M组和siR—B组术后2、4、6和8d时机械痛阈降低（P〈0．05），v组和siR—M组术后2、4、6和8d时机械痛阈差异无统计学意义（P〉0．05），脊髓p-ERK、PDE4B蛋白、TNF—α、IL．1G和IL-6水平升高（P〈0．05）；与Ns组相比，siR—B组术后2、4、6和8d时机械痛阈升高，脊髓p-ERK、PDFAB蛋白、TNF-α、IL-18和IL-6水平降低（P〈0．05），V组和siR-M组上述指标比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论PDE4B蛋白参与了大鼠神经病理性痛的形成，可能与促进脊髓ERK磷酸化，增强炎性反应有关。
- 底妍李伟彦和晓韵李永乐刘清珍刘健嵇晴
- 关键词：脊髓神经痛
