张宁坤
- 作品数：106 被引量：357H指数：11
- 供职机构：中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金海军总医院创新培育基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学电子电信更多>>
- 脐带间充质干细胞治疗缺血性心脏病的新进展
- 2016年
- 目前心脏移植是终末期缺血性心脏病(IHD)患者唯一有效的治疗手段,但由于供体来源短缺、免疫排斥和费用昂贵等限制,无法广泛应用于临床。随着干细胞研究的深入,人们看到了新的曙光。干细胞治疗,尤其是间充质干细胞(MSC)的替代治疗成为终末期IHD患者的另一有效治疗选择。MSC是来源于发育早期中胚层内的具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的多能干细胞,广泛存在于骨髓、脐带、脂肪等组织中,能够产生多种细胞因子和化学因子,具有组织再生、免疫调节等功能,因此,MSC在再生医学中具有重要的科研和临床实用价值。现就脐带间充质干细胞(UC-MSCs)在IHD治疗应用中的研究进展进行综述。
- 童珊珊张宁坤陈宇
- 关键词：脐带间充质干细胞干细胞移植缺血性心脏病
- 脐带华通胶来源的间充质干细胞在心力衰竭细胞移植治疗中的应用
- 本发明涉及脐带华通胶来源的间充质干细胞作为治疗因冠心病及扩张性心肌病引起的心力衰竭细胞移植材料的应用，包括心肌梗死后引起的慢性缺血性心力衰竭、终末期缺血性心力衰竭，及原发性扩张性心肌病和心肌炎后继发心肌病所致的心力衰竭。
- 高连如张宁坤陈宇杨晔丁青艾朱智明曹毅
- 冠状动脉慢血流者血浆同型半胱氨酸水平与血小板一氧化氮及其合酶变化的临床研究被引量：6
- 2008年
- 目的通过测定冠状动脉慢血流(CSF)者血浆同型半胱氨酸(Hcy)、血小板一氧化氮(NO)及其合酶(NOS)的变化,探讨它们与CSF发生机制的关系。方法选择经冠状动脉造影(CAG)检查诊断为CSF者20例(CSF组),CAG示无管腔狭窄及无慢血流者20例作为对照(NCF组),采用校正的TIMI血流分级(CTFC)方法评价冠状动脉血流速度,并测定其血浆Hcy、血小板NO含量、NOS活性、血小板计数(Plt)、血小板体积分布宽度(MPV)、平均血小板体积(PDW)。结果两组患者Plt、MPV、PDW比较无显著性差异(P﹥0.05);CSF组血浆Hcy水平[(17.92±5.86)μmol/L]明显高于NCF组[(11.42±4.28)μmol/L](P﹤0.001);血小板NO含量、NOS活性[(0.40±0.33)μmol/gprot,(1.69±0.15)U/mgprot]较NCF组[(1.27±0.8)μmol/gprot,(2.17±0.21)U/mgprot]明显减低(P﹤0.05)。结论增高的血浆Hcy水平使冠状动脉内皮功能受损,导致血小板功能受损,可能与CSF现象发生有关。
- 何疆春杨晔朱智明乔媛媛张宁坤陈宇李贤峰费宇行
- 关键词：冠状动脉慢血流内皮功能受损同型半胱氨酸一氧化氮
- 5-氮胞苷联合碱性成纤维生长因子诱导人胚胎干细胞定向心肌样细胞分化的实验研究被引量：1
- 2017年
- 目的探讨5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)联合碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)体外诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,h ESCs)定向分化为心肌样细胞的可行性。方法采用小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEF)作为饲养层细胞体外培养h ESCs,经悬浮培养形成拟胚体(embryoid bodies,EB),贴壁后分为无诱导剂组(对照组)、5-aza诱导组、b FGF诱导组、5-aza+b FGF联合诱导组4组诱导培养。诱导时间为2周。倒置相差显微镜下连续动态观察细胞形态学变化,并计算各组出现自发搏动的EB,以定量聚合酶链反应检测心肌细胞特异性基因NKX2.5、GATA4、α-actin,免疫荧光法检测心肌特异性肌钙蛋白T(cardiac troponin T,c Tn T)。结果 EB克隆贴壁诱导3~4 d后部分细胞出现自发性节律性搏动,以5-aza+b FGF联合诱导组为著。14 d后定量聚合酶链反应检测示5-aza+b FGF联合诱导组NKX2.5、GATA4、α-actin表达显著高于其他3组(P<0.05)。免疫荧光法示5-aza+b FGF联合诱导组c Tn T的表达最为明显(P<0.05)。结论 h ESCs在体外经5-aza+b FGF联合诱导后可定向心肌细胞分化,该诱导方案为心肌再生与组织工程领域的研究奠定了基础。
- 王力方志荣高连如张宁坤徐小红朱智明
- 关键词：心肌细胞细胞分化人胚胎干细胞5-氮胞苷碱性成纤维生长因子
- 脐带华通胶间充质干细胞移植治疗晚期慢性心力衰竭的手术配合被引量：1
- 2010年
- 目的探讨脐带华通胶间充质干细胞移植治疗晚期慢性心力衰竭的护理配合与观察方法的重要性。方法从脐带组织中利用酶消化法提取华通胶间充质干细胞,经静脉推注无菌干细胞悬液,推注速度3～4 ml/min。术中给予心电监护、严密观察患者生命体征及有无变态反应等。结果移植过程中及移植后均无不良反应和并发症发生。6个月后随访患者6 min步行试验、超声心动检查射血分数值增加,临床症状明显改善。结论严格的无菌操作技术、适宜的静脉推注速度和严密的护理观察与配合是移植手术治疗成功的重要环节。
- 李莉黄叶莉张宁坤李俊凤
- 关键词：心力衰竭间充质干细胞手术配合
- 人脐带间充质干细胞对实验性自身免疫性葡萄膜炎的治疗作用研究被引量：3
- 2017年
- 目的观察体外培养的人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)的治疗作用。方法组织块贴壁法培养HUCMSCs、流式细胞术鉴定。用视网膜光感受器间维生素A类结合蛋白(interphotoreceptor retinoid-binding protein,IRBP)诱导EAU模型。C57BL/6小鼠尾静脉注射HUCMSCs,每日用裂隙灯显微镜对小鼠眼前节的炎症情况进行观察。流式细胞术检测实验小鼠脾脏淋巴细胞CD11c、CD86表型。结果建模后的C57BL/6小鼠于注射IRBP后7~9 d开始发病,12~14 d发病达高峰,16~20 d眼前节炎症自限性减轻,21 d后眼内炎症逐渐消退、自愈。HUCMSCs治疗后,建模小鼠EAU发病时间延长,炎症程度减轻,实验组与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。建模后的小鼠脾脏CD11c+CD86-细胞数量增加非常明显,经HUCMSCs治疗后第9天CD11c^+CD86^-细胞数量接近治疗前水平。建模后小鼠脾脏中CD86+CD11c+/CD11c比值下降,经HUCMSCs治疗后有所回升,但在第15天时仍未恢复至正常水平。结论 HUCMSCs对IRBP诱导的小鼠EAU有治疗作用,HUCMSCs作用于树突状细胞等抗原呈递细胞,抑制了EAU的进展。
- 秦力维张宁坤郭建巍高原王桂琴曹利群田春雨崔蓓王静陈洁
- 关键词：人脐带间充质干细胞实验性自身免疫性葡萄膜炎树突状细胞
- Apelin13对人胚胎干细胞定向心肌细胞分化效率的影响被引量：2
- 2017年
- 目的探讨Apelin13对人胚胎干细胞(hESCs)定向心肌细胞分化效率的影响。方法将hESCs单层培养后经EDTA消化传代,应用明确的诱导分化培养基对观察组(加Apelin13)和对照组(不加Apelin13)定向诱导hESCs向心肌细胞分化。于诱导第2天(中胚层阶段)、第4天(心肌分化初始阶段)、第7天(心肌分化末阶段)作为时间节点,采用实时荧光定量PCR检测两组Brachury T、Mesp1、NKx2.5、APJ mRNA表达水平,采用Western blotting检测两组Brachury T、Mesp1、NKx2.5、APJ、Nanog、Sox2蛋白表达;同时于诱导第7天采用细胞免疫荧光技术检测两组心肌细胞标志物肌钙蛋白T2(TNNT2)、α-辅肌蛋白(α-actinin)表达。结果诱导第7天观察组hESCs定向心肌分化程度高于对照组,免疫荧光染色倒置显微镜下可清楚看到成熟心肌细胞的肌结及心肌细胞TNNT2、α-actinin表达。在3个诱导时间节点,观察组Brachury T、Mesp1、NKx2.5、APJ mRNA及其蛋白表达均高于对照组(P均<0.05),观察组hESCs标志蛋白Nanog、Sox2低于对照组(P均<0.05)。结论 Apelin13可提高hESCs向心肌细胞的分化效率。
- 程涛陈宇张宁坤高连如王泽张燕
- 关键词：人胚胎干细胞心肌细胞细胞分化
- 自体骨髓单个核细胞经冠状动脉移植治疗缺血性心脏病的手术配合
- 2009年
- 李俊凤黄叶莉李莉薛宁张宁坤
- 关键词：自体骨髓单个核细胞手术配合
- 犬自体骨髓单个核细胞经冠状动脉移植重建梗死心肌被引量：8
- 2004年
- 目的 :探讨选用含有原始干细胞 /多系祖细胞及基质细胞的骨髓单个核细胞 (MBMC) ,经冠状动脉移植重建犬梗死心肌 ,观察其修复、重建梗死心肌及改善心功能的效果。方法 :经皮穿刺球囊封堵前降支成功建立心肌梗死动物模型并存活约 1周的杂种犬 10条 ,平均分为细胞移植组和对照组。细胞移植术前 1d分离 MBMC,以 DAPI标记 ,温箱保存过夜。常规冠状动脉造影、PTCA,在球囊闭塞前降支条件下注入 MBMC(每次 4× 10 6个细胞 ,2 ml) ,气囊保持充盈 2 min后恢复灌注 2 min,重复注入 3次。分别于术前及术后 2个月行超声心动图检查 ,动物放血处死后取心脏前壁和下壁冰冻切片 ,荧光显微镜观察并照相。 结果 :移植组术后与术前及对照组比较 ,平均左室舒张末容量和左室收缩末容量减少、EF和 FS增加 (P<0 .0 5 ) ;对照组则左室舒张末容量和左室收缩末容量明显增加、FS减少 (P<0 .0 5 )。细胞移植组左室收缩及舒张内径和梗死长度均较移植前缩小 ,梗死部位室壁厚度较移植前增加 (P<0 .0 5 ) ;而对照组梗死区室壁变薄。在细胞移植组前壁心肌组织冰冻切片中可以看到心肌细胞核发黄绿色荧光 ,发现带绿色荧光的丝状肌丝肌管 ,移植犬的下壁和对照组的前壁可见心肌细胞核发出光亮较移植组前壁淡的自发黄绿色荧光 ,而均未发现有带?
- 朱智明高连如费宇行王志国张宁坤陈宇贺声丁青艾
- 关键词：心肌梗死骨髓单个核细胞细胞移植
- 华通胶源间充质干细胞经冠状动脉移植治疗慢性缺血性心肌病的实验研究被引量：9
- 2015年
- 目的探讨华通胶源间充质干细胞(WJMSCs)经冠状动脉移植治疗猪慢性缺血性心肌病(CIMP)的安全性和有效性。方法巴马小型猪29头,其中25头行左冠状动脉前降支球囊闭塞制作心肌梗死后CIMP模型,以超声心动图检查左室射血分数(LVEF)≤45%为CIMP成功标准,其余4头为假手术(Sham)组。造模成功17头,3头未成功,5头死亡,研究初始6头CIMP模型猪(3头成功造模+3头造模未成功)先行WJMSCs经冠状动脉移植剂量选择安全性实验,依次以6×106、1×107、2×107剂量经冠状动脉移植,每剂量组小型猪2头,造模成功与未成功者各1头,以TIMI 3级为安全剂量。余14头CIMP模型猪被随机分为WJMSCs移植组和对照组(n=7),分别经冠状动脉移植WJMSCs(2×107),或注入生理盐水。在WJMSCs移植8周后,对两组模型猪进行超声心动图、病理组织学、免疫荧光学检测。结果 CIMP小型猪在WJMSCs移植8周后,LVEF较移植前增高11.6%(P<0.01),左室收缩末容积减少4.1ml(P<0.05),而对照组心室功能进一步恶化(LVEF从42.8%下降为35.9%,P<0.01),左室进一步扩张(左室舒张末容积从42.8±1.2ml进展为46.7±1.3ml,P<0.05)。病理组织学检查显示WJMSCs移植组梗死区心室壁厚度明显增厚,梗死边缘区血管密度明显增加。免疫荧光检测可见带有Myc标志的WJMSCs在梗死心肌内存活,且与心肌肌钙蛋白T、α-actin和Connexin-43共表达。结论经冠状动脉移植WJMSCs治疗猪慢性CIMP是安全、有效的。
- 张宁坤陈宇王志国李俊风王丽华朱智明王力高连如
- 关键词：间质干细胞移植冠状血管心肌缺血
