张韡
- 作品数：11 被引量：32H指数：4
- 供职机构：上海交通大学附属第六人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市自然科学基金上海市卫生局科技发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 转录反式激活蛋白转导域介导HBcAg穿透细胞膜的作用被引量：7
- 2008年
- 目的观察蛋白转导域（PTD）-HBcAg融合蛋白的细胞膜穿透作用。方法合成转录反式激活蛋白（Tat）-PTD编码序列，PCR技术扩增HBcAg全长基因，通过重叠延伸PCR片段拼接法将Tat—PTD编码序列和HBcAg全长基因融合，将融合基因克隆到pMAL-c2X原核表达载体中。挑选测序正确的构建质粒，转化大肠埃希菌Rosetta—gami^TM2（DE3），异丙基-β—D-硫代半乳糖苷诱导融合蛋白表达，Western印迹鉴定，亲和层析纯化融合蛋白PTD-HBcAg，同样方法得到HBcAg蛋白作为对照。纯化蛋白加入细胞培养介质中，间接免疫荧光检测进入细胞内的PTD-HBcAg和HBcAg。结果大肠埃希菌中过度表达的融合蛋白可通过亲和层析纯化，Western印迹证实纯化的PTD-HBcAg和HBcAg能被HBcAg单克隆抗体识别，细胞免疫荧光检测证实PTD-HBcAg可跨膜转导入细胞内，而单独的HBcAg未能在细胞内检测到。结论融合蛋白PTD-HBcAg可在原核表达系统中高效表达、分离纯化，PTD能介导HBcAg穿透细胞膜进入细胞。
- 潘庆春臧国庆余永胜汤正好张韡韩进超
- 关键词：反式激活因子类细胞膜
- 核酶基因治疗的研究进展
- 2003年
- 核酶是一种化学本质为核糖核酸(RNA)的生物催化剂,能够序列特异性识别和结合靶RNA,并将之催化裂解。核酶的这一特性为疾病的基因治疗提供了新途径,研究者们设计了不同的核酶来阻断特定基因的表达,广泛应用于艾滋病、肿瘤和病毒性肝炎等难治性疾病的治疗研究。大量研究结果表明,核酶作为一种新的基因治疗手段或药物具有广阔的应用前景。
- 张韡周霞秋
- 关键词：核酶基因治疗艾滋病肿瘤病毒性肝炎
- C-端截短变异的HBx真核表达质粒的构建及表达
- 2010年
- 目的构建羧基端缺失30个氨基酸的HBx蛋白的真核表达质粒,并在真核细胞内稳定表达。方法提取HBV-DNA阳性血清总DNA,PCR扩增截短变异的HBx基因(HBx),克隆到真核质粒pEGFP-N3中,酶切及测序鉴定。利用脂质体将重组质粒转染HepG2细胞,通过W estern blot方法检测细胞内截短变异的HBx蛋白的表达。结果构建的重组质粒pEGFP-N3/x经酶切及测序鉴定结果正确。质粒pEGFP-N3/x转染细胞后可检测到目的蛋白。结论成功构建在真核细胞内稳定表达的重组质粒pEGFP-N3/x。
- 张韡潘庆春臧国庆
- 关键词：基因变异HBVX基因乙肝病毒真核表达质粒
- Caspase-12活化在小鼠原代肝细胞凋亡中的作用被引量：10
- 2006年
- 目的探讨caspase-12表达变化与内质网应激介导小鼠原代肝细胞凋亡的关系。方法原位消化灌流法分离小鼠原代肝细胞,应用毒胡萝卜素对小鼠原代肝细胞进行凋亡诱导,通过DNA梯带,Hoechst染色和流式细胞仪等对肝细胞凋亡进行定性和定量检测,选出合适的诱导浓度和诱导时间。用Western印迹法检测凋亡过程中caspase-12蛋白酶的表达变化。结果毒胡萝卜素4μmol、诱导30h可引起50%肝细胞发生凋亡,并出现典型的凋亡形态改变。随诱导时间延长procaspase-12蛋白表达逐渐减少。结论毒胡萝卜素4μmol作用30h是建立小鼠原代肝细胞凋亡模型的合适条件,随凋亡细胞数量增加,procaspase-12相应减少,caspase-12活化是毒胡萝卜素引起内质网应激介导肝细胞凋亡的主要机制。
- 姜山谢青张韡周惠娟刘海防俞红
- 关键词：内质网应激凋亡肝细胞CASPASE-12
- 乳猪肝细胞的分离、培养及功能检测被引量：2
- 2004年
- 目的 为构建生物人工肝进行肝细胞的准备。方法 采用胶原酶半原位灌流法分离单个乳猪肝细胞,并对其活力及单层和聚集培养后的白蛋白、尿素合成功能进行检测。结果 采用本方法从每头乳猪中分离到的单个肝细胞数为(3.1±1.5)×10^(10),活性超过95％。在加入激素和生长因子的培养基中单层培养时,肝细胞功能良好,可维持2周左右。而在未加入激素和生长因子的培养中肝细胞虽能存活1周,但功能于24h后即丧失。球形聚集培养可实现肝细胞的大量培养,且生物学活性较单层培养显著提高。结论 采用胶原酶半原位灌注法所得单个乳猪肝细胞基本能满足构建生物人工肝对肝细胞数量的要求。聚集培养接种密度大,细胞生物学活性高,可用于构建生物人工肝。
- 俞红秦爱兰周霞秋向晓星张韡
- 关键词：乳猪肝细胞生物人工肝细胞分离细胞生物学
- 抗Caspase-12核酶的制备与体外活性鉴定
- 2005年
- 目的 设计针对小鼠内质网应激凋亡途径中Caspase-12 mRNA的锤头状核酶(Rz138、Rz218),通过靶基因及核酶的体外转录、切割,进行核酶活性鉴定,评估其应用前景。 方法 小鼠Caspase-12基因的逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增片段克隆于PGEM-T载体的T7启动子下游,通过α-32P UTP标记的体外转录物作为靶RNA。设计合成针对小鼠Caspase-12 mRNA的核酶,通过PCR方法扩增核酶的转录模板,采用非同位素标记法行体外转录,核酶与靶RNA进行体外切割实验。 结果 在37℃,Rz138、Rz218均有切割活性,Rz138的切割效率较高,几乎100％。 结论 Rz138在体外具有良好的特异催化切割活性,它有望通过切割Caspase-12 mRNA而抑制内质网应激介导的细胞凋亡发生。
- 姜山谢青张韡周霞秋俞红金由辛
- 关键词：CASPASE-12核酶抗C体外活性T7启动子体外转录
- 凋亡抑制蛋白在细胞凋亡中的调节作用被引量：6
- 2003年
- 凋亡抑制蛋白(IAP)家族是至今发现的惟一一种内源性Caspase蛋白酶抑制剂,在细胞凋亡中发挥重要的调节作用。本文结合近年来的研究进展,综述了Caspase在凋亡中的作用、IAP家族蛋白分子的结构特征、抗凋亡作用机制以及IAPs抗凋亡作用的负调控。进一步认识细胞凋亡中复杂的调控机制,为寻找与凋亡紊乱相关的疾病治疗提供了重要靶向。
- 张韡
- 关键词：细胞凋亡凋亡抑制蛋白
- 肝炎病毒标志物阴性老年肝功能异常病因及临床特点被引量：2
- 2009年
- 目的收集甲~戊型肝炎标志物阴性的老年肝功能异常患者246例,分析其病因及临床特点。方法检测甲~戊型肝炎病毒血清学标志物、EB病毒等非嗜肝病毒抗体、及自身抗体水平,并行腹部B超或CT等影像学检查。对照组分别为甲~戊型老年病毒性肝炎177例、肝炎标志物阴性青中年肝功能异常40例。统计分析采用卡方检验、t检验。结果肝炎标志物阴性老年肝功能异常发生率高,达58.26%。其中位居前4位的病因依次为：病因不明者27.64%,胆源性肝损21.54%,自身免疫紊乱伴肝损20.33%,EB病毒等非嗜肝病毒感染15.04%,和青中年组相比上述病因构成无差别（P〉0.05）;脂肪肝比例（2.85%）低于青年对照组（P〈0.05）。腹胀、肝掌阳性比例高于老年肝炎组（P〈0.05）,尿黄、纳差比例高于青中年肝炎阴性组（P〈0.05）。临床类型多为急性肝损（81.71%）,慢性肝损、肝衰竭、肝硬化发生率低于老年病毒性肝炎组（P〈0.05）,但和青中年组无明显差异（P〉0.05）。结论老年肝功能异常由非病毒性肝炎引起者所占比例较高;临床表现、疾病严重程度比老年病毒性肝炎组轻。
- 朱明芬汤正好余永胜江红奚敏张韡臧国庆
- 关键词：肝功能异常老年人病因
- 上海市非甲～非戊型肝炎患者及献血者中SENV感染的分子特征
- 2007年
- 目的探讨上海市非甲～非戊型肝炎患者和健康献血者中SEN病毒的感染情况及其分子特征。方法收集非甲～非戊型肝炎患者和健康献血者的血液样本,分离血清,采用巢式聚合酶链反应方法对收集的血清样本进行SENVDNA检测,并对部分PCR产物进行测序鉴定。结果非甲～非戊型肝炎患者中SENVDNA阳性率为53.3%(16/30),无偿献血者中SENV感染率为10%(3/30)。其中,无偿献血者3例阳性样本中,2例为SENVH亚型,1例为SENVD亚型。16例阳性非甲～非戊型肝炎患者标本中,8例为SENVH亚型,6例为SENVD亚型,2例为D亚型和H亚型混合感染。结论上海非甲～非戊型肝炎患者及献血者中SENV主要为D或H亚型,输血传播非SENV唯一传播形式。
- 汤正好陈小华张韡乐魏列余永胜臧国庆
- 关键词：巢式聚合酶链反应
- 生长因子及细胞外基质对肝前体细胞体外增殖及分化的影响被引量：5
- 2004年
- 目的明确多种生长因子对胚胎肝脏前体细胞体外增殖分化的影响. 方法用胶原酶从胎龄14.5d SD大鼠胚胎肝脏分离单个细胞,采用3H-TdR掺入法检测生长因子对胎肝细胞体外增殖的促进作用,并观察生长因子及细胞外基质成分对胎肝干细胞集落形成的影响.采用免疫细胞双标记及G-6-P酶活性测定以检测肝前体细胞表面标记的表达及向成熟肝细胞的分化能力. 结果肝前体细胞在体外培养时显示克隆样生长的特性.促肝细胞生长因子(HGF)、表皮生长因子(EGF)能促进肝前体细胞的增殖,使DNA合成加速,并促进干细胞集落的形成及角蛋白19、白蛋白、G-6-P的表达.转化生长因子α对肝前体细胞的促增殖作用较弱.转化生长因子β对肝前体细胞的增殖起到抑制作用.细胞基质成分Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、层黏连蛋白能促进肝干细胞集落的形成,而纤维连接蛋白的作用较弱.肝干细胞单克隆增殖需要生长因子及细胞外基质的共同参与,加入新鲜分离胎肝细胞培养液上清液时单细胞增殖较快,于第5天即形成细胞集落. 结论 HGF、EGF对肝前体细胞的增殖分化起重要作用,细胞外基质成分亦参与了其增殖分化过程.肝干细胞单克隆培养除需生长因子和细胞外基质外,可能亦有某些造血细胞、间质细胞分泌的因子参与其增殖分化的调控.
- 秦爱兰周霞秋俞红谢青张韡郭清
- 关键词：细胞外基质肝前体细胞细胞增殖细胞分化
