方浩
- 作品数：27 被引量：12H指数：2
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- 周期型马来丝虫复合多价蛋白疫苗的制备方法
- 本发明公开了一种周期型马来丝虫复合多价蛋白疫苗的制备方法，包括周期型马来丝虫pcDNA3.1（+）-BmCPI/BmGAPDH重组质粒的抽提、基因转染、阳性克隆的筛选、阳性克隆的提取和扩大培养、阳性克隆的冻存、检测阳性克...
- 方政王慧方浩陆施娟徐倩胡迎青童海燕徐邦生
- 文献传递
- 周期型马来丝虫M29表位基因DNA疫苗的用途
- 本发明公开了一种周期型马来丝虫M29表位基因DNA疫苗的用途，以我国流行的周期型马来丝虫为研究对象，扩增马来丝虫myosin基因片段，构建了周期型马来丝虫myosin真核表达重组质粒。根据测序结果分析，推测其氨基酸序列，...
- 方政吴佳倩徐倩方浩张波陆施娟陶然刘芹谢东方
- 文献传递
- 马来丝虫肌球蛋白29表位基因真核表达质粒及原核表达蛋白免疫小鼠诱导的免疫应答
- 2017年
- 目的观察马来丝虫肌球蛋白29(Brugia malayi myosin 29,Bm M29)表位基因真核表达质粒pc DNA3.1(+)-Bm M29和原核表达的纯化重组蛋白r Bm M29免疫小鼠诱导的免疫应答效果。方法在大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21诱导表达重组蛋白r Bm M29,纯化后作为重组蛋白疫苗;纯化真核表达重组质粒pc DNA3.1(+)-Bm M29作为核酸疫苗。核酸疫苗免疫注射部位为小鼠后腿胫前肌,重组蛋白为皮下多点注射。60只BALB/c小鼠随机分为A、B、C、D、E组,每组12只,分别注射PBS(100μg)、pc DNA3.1(+)/Cp G(100μg/30μg)、pc DNA3.1(+)-Bm M29/Cp G(100μg/30μg)、r Bm M29/Cp G(50μg/30μg)、pc DNA3.1(+)-Bm M29/r Bm M29/Cp G(前2次注射pc DNA3.1(+)-Bm M29/Cp G 100μg/30μg,第3次注射r Bm M29/Cp G 50μg/30μg),共免疫3次,每次免疫间隔2周。初次免疫后第4、6、8周,眼球摘除法采血制备血清,ELISA法检测免疫小鼠血清特异性Ig G抗体效价。免疫第8周处死小鼠,制备脾细胞悬液培养48 h,ELISA检测培养上清中细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平。结果 ELISA检测结果显示,A、B、C、D和E组小鼠初次免疫后第4周血清中抗体的吸光度(A490值)分别为0.038±0.050、0.053±0.009、0.360±0.035、0.456±0.025、0.370±0.025,第6周分别为0.045±0.003、0.045±0.005、0.510±0.018、0.548±0.010、0.552±0.018,第8周分别为0.041±0.004、0.044±0.009、0.606±0.047、0.674±0.042、0.770±0.041,C、D、E组均高于A、B组(P<0.05),第8周时,E组Ig G抗体的A490值高于C组和D组(P<0.05)。初次免疫后第8周,A至E组小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ的水平分别为(47.72±8.94)、(50.43±2.81)、(304.78±8.42)、(242.28±5.99)、(426.52±6.76)pg/ml,C、D、E组均高于A、B组(P<0.05),E组高于C组和D组(P<0.05);小鼠脾细胞培养上清中IL-4的水平分别为(60.00±11.14)、(57.71±15.95)、(93.17±12.56)、(96.67±11.48)、(101.17±5.81)pg/ml,C、D、E组均高于A、B组(P<0.05)。结论 pc DNA3.1(+)-Bm M29核酸疫苗和r
- 夏瑜椰徐倩孙婷婷方浩刘蔚陆施娟方政
- 关键词：马来丝虫基因疫苗蛋白疫苗
- 周期型马来丝虫M29表位基因DNA疫苗的制备方法
- 本发明公开了一种周期型马来丝虫M29表位基因DNA疫苗的制备方法，以我国流行的周期型马来丝虫为研究对象，扩增马来丝虫myosin基因片段，构建了周期型马来丝虫myosin真核表达重组质粒。根据测序结果分析，推测其氨基酸序...
- 方政吴佳倩徐倩方浩张波陆施娟陶然刘芹谢东方
- 文献传递
- 易操作周期型马来丝虫M29表位基因DNA疫苗的制备方法
- 本发明公开了一种易操作周期型马来丝虫M29表位基因DNA疫苗的制备方法，以我国流行的周期型马来丝虫为研究对象，扩增马来丝虫myosin基因片段，构建了周期型马来丝虫myosin真核表达重组质粒。根据测序结果分析，推测其氨...
- 方政吴佳倩徐倩方浩张波陆施娟陶然刘芹谢东方
- 周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗的用途
- 本发明公开了一种周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗的用途，所述周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗制备方法包括引物设计、PCR扩增Bm‑myosin基因、Bm‑myosin基因片段纯化和T载体的连接以及转化、阳性重组克...
- 王颖颖方政方浩徐倩吴佳倩张波王慧陶然谢东方
- 文献传递
- 周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶/半胱氨酸蛋白酶抑制剂复合基因真核重组质粒的构建与表达被引量：2
- 2011年
- 目的 构建周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氰酶/半胱氨酸蛋白酶抑制剂（GAPDH/CPI）复合基因真核重组表达质粒,为研制复合多价疫苗奠定基础.方法 依据GenBank中BmGAPDH及BmCPI基因序列设计引物,以周期型马来丝虫总RNA为模板,RT-PCR扩增目的 编码基因.PCR产物经TA克降后,克隆至载体pGEM-T Easy中.取阳性重组质粒pGEM-T/BmGAPDH和pGEM-T/BmCPI以及真核重组表达载体分别双酶切,将酶切后的载体和目的 片段进行连接,构建真核重组表达质粒pcDNA3.1（＋）/BmGAPDH/BmCPI.将复合基因重组质粒瞬时转染人HeLa细胞后,进行RT-PCR验证,将表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行分析和鉴定.结果 分别克隆了pGEM-T/BmGAPDH和pGEM-T/BmCPI重组质粒,经酶切鉴定分别得到877、621 bp特异性片段,与预期值吻合.成功构建了复合基因重组真核表达载体pcDNA3.1（＋）/BmGAPDH/BmCPI,酶切鉴定所产生的片段大小与预期吻合.复合基因真核重组表达质粒转染HeLa细胞后得到高水平表达,SDS-PAGE分析显示重组蛋白相对分子质量（Mr）约为54×103.结论 成功构建了周期型马来丝虫GAPDH/CPI复合基因重组表达质粒,并在哺乳动物细胞内得到正确表达.
- 刘晓骏郭晓峰张赛楠陆施娟方浩徐邦生方政
- 关键词：半胱氨酸蛋白酶抑制剂HELA细胞
- 简便的周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗制备方法
- 本发明公开了一种简便的周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗制备方法，包括引物设计、PCR扩增Bm‑myosin基因、Bm‑myosin基因片段纯化和T载体的连接以及转化、阳性重组克隆的筛选和鉴定、Bm‑MYOSIN二级结...
- 方政王颖颖方浩徐倩吴佳倩张波王慧陶然谢东方
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- 易操作周期型马来丝虫M29表位基因DNA疫苗的制备方法
- 本发明公开了一种易操作周期型马来丝虫M29表位基因DNA疫苗的制备方法，以我国流行的周期型马来丝虫为研究对象，扩增马来丝虫myosin基因片段，构建了周期型马来丝虫myosin真核表达重组质粒。根据测序结果分析，推测其氨...
- 方政吴佳倩徐倩方浩张波陆施娟陶然刘芹谢东方
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- 周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗的用途
- 本发明公开了一种周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗的用途，所述周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗制备方法包括引物设计、PCR扩增Bm‑myosin基因、Bm‑myosin基因片段纯化和T载体的连接以及转化、阳性重组克...
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