朱祺
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学食品学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 深黄被孢霉Δ5-脱饱和酶的原核表达及纯化
- 2013年
- 目的原核表达并纯化深黄被孢霉Δ5-脱饱和酶。方法采用RT-PCR技术扩增深黄被孢霉Δ5-脱饱和酶基因,插入表达载体pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-D5D,转化入大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经Ni2+-NTA纯化后,进行Western blot鉴定。结果重组表达质粒pET-D5D经双酶切(NotⅠ/SalⅠ)和测序鉴定,证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为55 000,诱导6 h表达量较高,主要以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白可与兔抗Δ5-脱饱和酶多克隆抗体特异性结合。结论成功在E.coli中表达了深黄被孢霉Δ5-脱饱和酶,纯化后的重组蛋白反应原性良好,为进一步研究Δ5-脱饱和酶的功能奠定了基础。
- 朱祺于长青姚笛
- 关键词：深黄被孢霉原核细胞基因表达纯化
