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人成骨细胞株HOS TE85致瘤性转化的研究被引量：1: 2006年; 目的建立人成骨细胞株HOS TE85致瘤性转化的模型,作为骨肉瘤癌变过程细胞分子生物学研究的模型。方法通过克隆形成率实验确定N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(N-m ethyl-N-′n itro-N-n itrosoguan id ine,MNNG)对HOS TE85细胞转化浓度后,以MNNG作启动剂,佛波酯(12-0-Te-tradecanoyl phorbol 13-acetate,TPA)作促进剂对其进行转化,66 d后通过细胞形态、软琼脂集落形成实验和裸鼠体内致瘤实验鉴定细胞转化程度。结果经MNNG和TPA协同处理HOS TE85细胞66 d后,细胞中出现形态异常的转化灶,转化灶细胞失去接触抑制;转化细胞凝集性增强;软琼脂克隆形成率明显增加;转化细胞在裸鼠皮下成瘤,病理组织学证实为低分化骨肉瘤。结论模拟人体细胞发生恶性转化的过程,建立了HOSTE85的恶性转化模型。; 孟刚李懿郭乔楠肖航; 关键词：TE85 MNNG TPA 恶性转化

高密度Oligo基因芯片筛选人永生化成骨细胞恶性转化中印迹基因的研究: 目的:探索骨肉瘤发病相关印迹基因,研究印迹基因表达水平对于骨肉瘤发病的重要意义。方法:建立人成骨细胞恶性转化模型,通过克隆形成率实验确定N-甲基-N,- 硝基-N-亚硝基胍（N—methyl-N’-nitro—N— ni...; 孟刚李懿郭乔楠; 关键词：骨肉瘤印迹基因基因芯片; 文献传递

人永生化成骨细胞hFOB1.19恶性转化的研究被引量：8: 2007年; 目的建立人胚永生化成骨细胞系(hFOB1.19)的恶性转化模型,作为骨肉瘤癌变过程细胞分子生物学研究的模型。方法通过克隆形成率实验确定N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)对hFOB1.19细胞转化浓度后,以MNNG作启动剂,佛波酯(12-0-Te-tradecanoyl phorbol 13-acetate,TPA)作促进剂对hFOB1.19细胞进行转化,90d后通过细胞形态、DNA含量分析、软琼脂集落形成试验和裸鼠体内致瘤试验鉴定细胞恶性转化程度。结果经MNNG和TPA协同处理hFOB1.19细胞90d后,细胞中出现形态异常的转化灶,转化灶细胞失去接触抑制;高倍体细胞数,转化组(81.08%)高于对照组(55.03%);软琼脂克隆形成率明显增加;转化细胞在裸鼠皮下成瘤,病理组织学证实为低分化骨肉瘤。结论模拟人体细胞发生恶性转化的过程,建立了人胚永生化成骨细胞系的恶性转化模型。; 孟刚李懿辛榕郭乔楠; 关键词：MNNG TPA 恶性转化

高密度Oligo基因芯片筛选人永生化成骨细胞恶性转化中印迹基因的研究被引量：1: 2007年; 目的探索骨肉瘤发病相关印迹基因,研究印迹基因表达水平对于骨肉瘤发病的重要意义。方法建立人成骨细胞恶性转化模型,收集转化过程中4个不同时间点(40、55、70、90 d)细胞,以未处理第90天传代细胞为对照,提取总RNA,合成生物素标记的cDNA与博奥生物CAP-F0017芯片杂交。用实时荧光定量PCR对随机选取的2个基因在3组样本(对照,40 d,90 d)中的表达情况进行验证。结果以表达差异≥2.0或≤0.5为限,共筛选出10个差异表达印迹基因;CD81、GRB10、NDN、MEST在转化过程中表达下调,H19、MKRN3、SLC22A1L、SLC22A3、TSSC3、CDKN1C在转化过程中表达上调,功能分类显示差异表达基因主要与细胞生长/维持和细胞信号转导相关,随机挑选2个差异表达基因的实时RT-PCR结果与芯片结果相符。结论在人成骨细胞恶性转化过程中发现10个差异表达印迹基因,通过对10个差异表达基因的分析有助于揭示骨肉瘤发生过程中印迹基因的参与机制。; 孟刚李懿郭乔楠; 关键词：骨肉瘤印迹基因基因芯片

人骨肉瘤抗失巢凋亡细胞的生物学特性研究被引量：3: 2008年; 目的获得人骨肉瘤抗失巢凋亡细胞,了解其生物学特性。方法采用本室建立的人永生化成骨细胞(hFOB1.19)恶性转化细胞株(转化细胞),用抗黏附培养法,模拟脱离基质情况,获得抗失巢凋亡细胞。电子显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪观察悬浮培养后不同时相点细胞的形态学改变和凋亡率。MTT法、Transwell小室分别检测细胞增殖情况和细胞的迁移能力。结果形态学观察可见到典型的凋亡细胞,流式细胞仪检测细胞悬浮后24、48、72h的凋亡(PI染色)情况,凋亡率逐渐升高。抗失巢凋亡细胞再次悬浮同时相凋亡率与转化株相比下降;抗失巢凋亡细胞较对照组(转化细胞)的细胞增殖能力增强,迁移能力增强,转化细胞差异有统计学意义(P<0.05)。结论经过14d的悬浮培养处理后,获得的人骨肉瘤抗失巢凋亡细胞不仅抗失巢凋亡能力有所增强,增殖能力和迁移能力也有增强。; 温磊孟刚李懿郭乔楠; 关键词：骨肉瘤失巢凋亡细胞迁移细胞增殖

P53和P63蛋白在人骨肉瘤组织及恶性转化细胞株中的表达变化及意义被引量：1: 2006年; 目的探讨人骨肉瘤组织及经硫酸镍恶性转化的永生化骨肉瘤样细胞系HOS中P53、P63蛋白的表达及意义。方法采用免疫组织化学SP法和图像分析技术检测35例骨肉瘤标本、经硫酸镍恶性转化前后的永生化骨肉瘤样细胞系HOS和永生化的人胚成骨细胞系hFOB中P53、P63蛋白的表达。结果P53、P63在35例骨肉瘤标本中的阳性表达率分别为42.9%、25.7%,不同组织学类型的骨肉瘤标本中阳性表达率无明显差异(P>0.05),P53蛋白和P63蛋白阳性患者与其阴性患者间总生存率比较在统计学上差异无显著性(P>0.05);在正常对照的人胚成骨细胞系hFOB中P53蛋白未见明显表达,P63蛋白表达呈弱阳性,未转化的HOS细胞株中可见P53、P63表达,而经硫酸镍恶性转化的HOS细胞株中P53、P63表达水平明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论P63蛋白及突变型P53蛋白的过表达在硫酸镍诱导的HOS细胞株恶性转化过程中起重要作用,是骨肉瘤发生早期的重要分子事件。; 李懿孟刚郭乔楠; 关键词：P53蛋白 P63蛋白

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李懿