李江伟
- 作品数：52 被引量：96H指数：6
- 供职机构：新疆大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金新疆生物资源基因工程重点实验室开放基金自治区科技支疆项目计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学理学更多>>
- 采用环介导等温扩增技术快速检测猪丹毒丝菌病原体被引量：2
- 2012年
- [目的]建立猪丹毒丝菌(E.rhusiopathiae)毒力株的快速检测方法。[方法]利用快速灵敏的环介导等温扩增技术(Loop-mediated Isothermal amplification,LAMP)针对丹毒丝菌spa基因较为保守区域设计4条特异性LAMP引物,采用FTA(Flinders technology associates,FTA)滤膜法提取12种血清型丹毒丝菌,8种非丹毒丝菌及受感染小鼠血液的基因组DNA,分析LAMP环引物的特异性;比较LAMP与传统PCR方法的扩增敏感性和产物特异性。[结果]在61℃恒温条件下,LAMP法能够特异性扩增丹毒丝菌特异条带,与常规PCR扩增结果一致;灵敏度实验表明LAMP法检测猪丹毒丝菌的检测下限为2 CFU/mL,较传统PCR的敏感性(大于20 CFU/mL)至少高10倍。LAMP方法与PCR方法都能在小鼠感染模型血样中检测到浓度为200 CFU(10^(-7))/mL以上浓度的丹毒丝菌。[结论]LAMP法与FTA滤膜法相结合在检测丹毒丝菌中具有潜在的应用价值。
- 克力比努尔.热合曼杨春静晏鹏飞李江伟
- 关键词：FTA
- 通过融合表达COMP48自折叠肽提高纳米抗体与CD47抗原的亲和力被引量：2
- 2019年
- 目的利用自折叠肽人软骨寡聚基质蛋白(COMP48)改造CD47纳米抗体,以提高其与CD47抗原的亲和力.方法设计和合成COMP48与CD47纳米抗体(VHHB1)DNA的融合序列,构建重组质粒pET22b-VHHB1-COMP48,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导表达融合蛋白.采用蛋白质印迹法、间接酶联免疫吸附测定(ELISA)和非竞争ELISA法检测融合蛋白和抗原CD47的结合特异性和亲和力.结果采用1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导得到重组蛋白VHHB1-COMP48,经固定化金属离子亲和层析纯化后得到纯度为90%的重组蛋白.蛋白质印迹结果显示,重组蛋白VHHB1-COMP48可特异性结合抗原CD47,但不结合无关蛋白.间接ELISA和非竞争ELISA结果显示,偶联COMP48的纳米抗体VHHB1-COMP48与未偶联的纳米抗体VHHB1相比亲和力增加,差异具有统计学意义(P<0.01).通过非竞争ELISA测得融合COMP48的纳米抗体的结合常数为6.97×10^7L/mol,解离常数为1.434×10^-8 mol/L.结论在纳米抗体后偶联COMP48可提高纳米抗体与抗原的亲和力.
- 张琪秦瑞坪范利华马晓玲李江伟
- 关键词：CD47
- 新疆双峰驼抗血清中重链抗体的分离鉴定被引量：7
- 2010年
- 【目的】初步探讨新疆双峰驼Camelus bactrianus免疫系统中缺失轻链的重链抗体(heavy chain antibody,HCAb)是否具有常规抗体的基本抗原结合功能。【方法】采用本实验室构建的丹毒丝菌表面蛋白A原核表达载体pGEX4T-1-spaA-N,进行诱导表达,纯化获得重组抗原GST-SpaA-N,免疫双峰驼制备抗血清,经Protein A和Protein G亲和层析从抗血清中分离重链抗体及常规抗体,Western blotting鉴定重链抗体的抗原结合特性,间接ELISA比较重链抗体与传统抗体的抗原结合活性。【结果】经过Protein A/G纯化得到了IgG2。对各组分进行分析初步表明重链抗体约占血清IgG的60%—80%。采用GST-SpaA-N免疫双峰驼可以诱导高滴度的IgG2型重链抗体,在5次免疫后,骆驼抗spaA-N特异的重链抗体IgG2多抗血清的效价为1﹕51200。Western blotting结果显示分离的多克隆重链抗体可特异结合SpaA天然抗原,且ELISA分析结果表明重链抗体与常规抗体具有相同的抗原结合活性。【结论】首次从双峰驼抗血清中成功分离获得具有与常规抗体相同生物学功能的多克隆重链抗体,提示重链抗体可能在骆驼免疫防御中发挥重要作用。
- 夏丽洁苏幼红张清华夏雪琴刘红春李江伟
- 关键词：双峰驼
- 通过融合白蛋白结合域延长抗CD47纳米抗体的半衰期
- 2021年
- 纳米抗体是一类在生物医药中具有重要应用前景的蛋白药物,然而由于其分子过小极易被清除.为了获得更好的体内代谢,我们通过CD47纳米抗体融合表达白蛋白结合域(ABD),从而提高其体内半衰期.使用分子克隆技术合成构建带有CD47-ABD基因的原核表达载体pET22b-3D3-2-ABD,转入BL21(DE3)中进行表达及Ni~+亲和层析柱纯化,并使用酶联免疫吸附剂(ELISA)法测定其生物学活性.给小鼠尾静脉注射融合蛋白后在不同时间点采血,用双抗体夹心ELISA测定融合蛋白的血浆浓度,并计算药代动力学参数.获得了pET22b-3D3-2-ABD重组质粒,并在BL21(DE3)表达了CD47-ABD融合蛋白.通过Ni~+亲和柱纯化,获得了较高纯度和浓度的CD47-ABD融合蛋白;改造后的CD47-ABD融合蛋白仍保留抗原结合活性,与CD47抗原及人血清白蛋白(HSA)的结合活性均具有剂量依赖性.CD47-ABD融合蛋白的半衰期从改造前的35.82 min延长至了501.52 min.本研究证明了融合ABD能够显著延长CD47纳米抗体体内半衰期而不影响其抗原结合,为解决纳米抗体自身半衰期短的缺点提供了理论和技术参考.
- 高晓娟娜斯拜·阿卜杜瓦哈普马晓玲王鲁娟王飞李江伟
- 关键词：CD47融合蛋白半衰期
- 人乳头瘤病毒L1基因与丹毒丝菌SpaA-N优势抗原表位序列的嵌合重组质粒构建及活性鉴定
- 2011年
- 为确定丹毒丝菌表面保护性抗原A的N-末端(SpaA-N)优势抗原表位,研发新型表位DNA嵌合疫苗,利用生物信息学软件对丹毒丝菌SpaA-N的优势B细胞抗原表位进行预测,以重叠PCR将优势表位插入人乳头瘤病毒16型的主要衣壳蛋白(HPV-16 L1)HI环结构的编码序列中,构建获得重组嵌合质粒pcDNA3-HPV-L1-ΔspaA。该重组质粒经体内、外瞬时转染后,RT-PCR均扩增获得了1 500 bp左右的目的片段。免疫印迹试验显示,体外转染嵌合质粒的细胞总蛋白能够与GST-SpaA-N重组蛋白免疫血清在56 kD处产生特异性结合。ELISA分析显示嵌合质粒可在小鼠体内产生差异显著的特异性抗体(P<0.01),抗体滴度为1∶1 000。此外,pcDNA3-HPV-L1-ΔspaA制备的抗血清至少可在1∶10稀释度条件下,介导外源补体对半数以上的菌体进行杀伤。该研究表明,获得的SpaA-N表位DNA嵌合疫苗具有免疫活性,为研发安全有效的丹毒丝菌新型DNA疫苗提供了一个新思路。
- 庆格乐图杨薇薇晏鹏飞苏幼红李江伟
- 关键词：表位预测HPV-16
- 新疆双峰驼天然单域抗体库的构建及初步鉴定被引量：3
- 2011年
- 旨在构建新疆双峰驼天然单域抗体库,及从中快速筛选VHH抗体。采用两种不同的抗原(溶菌酶和cAb-HEWL23)用天然文库进行筛选,成功筛选到了相应的抗体,并以溶菌酶筛选的VHH抗体(A3-1,A4-1和A10-1)进行表达和初步的ELISA检测。结果显示,A3-1和A10-1具有结合溶菌酶的能力。该方法简单方便、省时省力,可以快速从天然单域抗体库中筛选VHH抗体。
- 张清华夏雪琴克力比努尔.热合曼李江伟
- 关键词：溶菌酶噬菌体展示单域抗体VHH
- 新疆双峰驼纳米抗体、重链抗体和常规抗体的热稳定性比较被引量：2
- 2020年
- 【目的】比较纳米抗体、HCAbs与常规抗体之间在温度稳定性方面的差异,为研究HCAb的功能特性和骆驼适应极端环境的免疫特点提供参考。【方法】从溶菌酶、蒜氨酸酶和丹毒丝菌表面抗原A 3种抗原免疫的新疆双峰驼血清中,采用Protein A和Protein G亲和色谱纯化IgG1、IgG2和IgG33种亚型抗体,并在大肠杆菌BL21(DE3)菌中表达和纯化3种纳米抗体。采用ELISA方法,测定经过22~90℃一系列热处理后、平衡至室温的各抗体与相应抗原的结合活性,以剩余抗原结合活性的百分比作为衡量抗体温度稳定性的参数。【结果】3种抗原免疫后均能在骆驼激发明显的抗体反应。采用Protein A/G亲和色谱,从血清中纯化获得分子量分别为50 KD+25 KD、46 KD和43 KD的IgG1、IgG2和IgG3亚型抗体。骆驼IgG2和IgG3重链抗体比IgG1具有更高的温度稳定性,其中IgG3表现出比IgG2对温度更高耐受的趋势。从细菌表达纯化的3种纳米抗体都表现出比重链抗体和常规抗体更高的温度稳定性。【结论】抗体结构形式和分子大小可能显著影响了双峰驼抗体对温度的耐受性。
- 坤杜孜阿依·阿布都沙拉木姜志强刘娅菲熊静璠娜斯拜·阿卜杜瓦哈普李江伟
- 关键词：温度稳定性ELISA测定
- 基于多孔硅Bragg反射镜的光学免疫检测方法被引量：5
- 2009年
- 通过共价固定方法将羟基红花黄色素A(HSYA)抗血清蛋白固定到多孔硅Bragg反射镜的孔洞中,定量分析了不同浓度的羟基红花黄色素A人工抗原与特异性抗羟A多克隆抗体反应后多孔硅Bragg反射镜的反射谱峰位的红移情况.对比研究了固定阴性血清蛋白的多孔硅Bragg反射镜基底在加入抗原后的反射谱峰位变化情况,结果表明,基于多孔硅Bragg反射镜的光学免疫检测具有很好的特异性,且同目前普遍使用的ELISA方法相比,具有免标记且检测时间短等优异性能,同时该研究也为开发红花成分快速检测的免标记多孔硅生物传感器奠定了基础.
- 吕小毅庆格乐图向梅贾振红李锐钟福如李江伟张富春
- 关键词：光学检测羟基红花黄色素A反射光谱
- 新疆双峰驼纳米抗体噬菌体展示文库多样性的生物信息学分析
- 2016年
- 【目的】骆驼免疫系统中只存在重链抗体,其可变区VHH片段是最小的天然抗体片段。通过对双峰驼VHH基因进行序列分析,了解双峰驼VHH基因特征,分析VHH文库多样性组成。【方法】采用新疆双峰驼VHH特异引物扩增全部抗体基因片段,连接到M13噬菌粒载体上,与p III蛋白融合表达在噬菌体表面,构建噬菌体展示文库。基因测序和菌落PCR方法,分析文库大小和阳性克隆插入率。NCBI-Ig GBLAST工具对抗体序列进行IMGT编号命名,Web Logo工具分析抗体保守序列分布频率,MEGA6软件对VHH序列进行同源性比对和系统进化树构建。【结果】利用免疫的新疆双峰驼淋巴细胞,构建了库容量为1.4×109的VHH抗体噬菌体展示文库。对91个随机挑选的文库TG1单菌落进行PCR。结果表明该文库VHH阳性插入率为97%,DNA测序表明文库多样性为97.8%。对91个克隆DNA测序结果进一步分析表明,这些基因中除2个为常规VH抗体外,其余均为重链VHH抗体。根据抗体序列中的特征氨基酸分布,将91个抗体序列划分为7个亚群。【结论】构建的新疆双峰驼VHH文库多样性较好,生物信息学分析揭示出文库中多样性克隆的分布和特征,有助于新疆双峰驼纳米抗体噬菌体展示文库的进一步构建。
- 冯亚宁姜志强马晓玲李江伟
- 关键词：双峰驼单域抗体生物信息学分析
- 融合C3Fab抗PD-L1纳米抗体的制备及其对血浆半衰期的影响
- 2024年
- 目的制备融合C3Fab的抗程序性死亡-配体1(PD-L1)纳米抗体P3C8-C3Fab,并研究其对血浆半衰期的影响。方法将来源于蛋白G的C3Fab肽段,通过DNA重组技术与纳米抗体P3C8进行分子融合,并构建重组质粒pET21a-P3C8-C3Fab,在大肠杆菌BL21菌株中进行诱导表达和纯化,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测P3C8-C3Fab与PD-L1蛋白、小鼠IgG和表达PD-L1肿瘤细胞的结合,利用双抗夹心ELISA检测不同时间小鼠血清中残留P3C8-C3Fab,以评估C3Fab对PD-L1纳米抗体血浆半衰期的延长作用。结果成功构建了融合C3Fab的抗PD-L1纳米抗体P3C8-C3Fab,其在BL21菌中以可溶形式高效表达,经纯化获得质量分数约为90%的NbP3C8-C3Fab蛋白,得率为7.18 mg/L。P3C8-C3Fab随着质量浓度的增加,对PD-L1蛋白和小鼠IgG亲和力也逐渐升高,且呈现浓度相关性;P3C8-C3Fab与肺癌A549细胞的结合呈浓度相关性。小鼠血清中P3C8-C3Fab的浓度标准曲线呈典型的S型浓度相关性;P3C8血浆半衰期仅为0.44 h,而P3C8-C3Fab的血浆半衰期达到9.36 h,血浆半衰期延长了21.27倍。结论C3Fab与纳米抗体P3C8连接可以显著延长其血浆半衰期,对改善纳米抗体的体内作用具有应用价值。
- 王展雄雷萌邓奕辰娄楚杨天宁胡倩倩李江伟
- 关键词：程序性死亡受体-1半衰期
