杨国成
- 作品数：18 被引量：26H指数：3
- 供职机构：武汉大学基础医学院更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- GM1对PC12细胞缺氧缺糖损伤中HO-1表达的影响及PI-3K/Akt通路在此过程中的作用被引量：1
- 2006年
- 目的:探讨PC12细胞缺氧缺糖损伤中,单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)对血红素加氧酶(HO-1)表达的影响,并研究PI-3K/Akt通路在此过程中的作用。方法:用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)消除培养基中的氧合并培养基质缺糖制造PC12细胞缺氧缺糖损伤(OGD)模型,用RT-PCR和Western blot方法检测不同剂量(25-100μmol/L)GM1和PI-3K抑制剂LY294002对缺氧缺糖损伤时PC12细胞HO-1mRNA及蛋白表达的影响。结果:与对照组和单纯缺氧缺糖组相比,GM1可显著上调缺氧缺糖PC12细胞的HO-1mRNA和蛋白表达,且两者呈明显的剂量依赖关系;PC12细胞经LY294002预处理后,GM1上调HO-1mRNA和蛋白表达的作用均受到抑制。结论:GM1可上调缺氧缺糖损伤时PC12细胞HO-1mRNA和蛋白表达,PI-3K/Akt通路在此过程中发挥了一定的信号转导作用。
- 汤贝贝杨国成夏腊菊孟祥平刘莉高兴华
- 关键词：缺氧缺糖血红素加氧酶PC12细胞LY294002
- 重组人白细胞介素-10融合表达载体的构建及其在BL21(DE3)pLysE细菌细胞中的表达被引量：1
- 2004年
- 目的 构建重组人白细胞介素 10 (recombinanthumaninterleukin 10 ,rhIL 10 )融合蛋白的表达载体 ,并在大肠杆菌中表达。方法 应用RT PCR方法扩增IL 10基因 ,克隆PCR产物 ,构建PCRR○T7/NT TOPOR○ IL 10重组质粒 ,以AppiedBiosystems 370 0DNA分析仪进行分析。构建成功的重组质粒转化大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysE细胞 ,经 12 %SDS PAGE鉴定融合表达蛋白。结果 PCRR○T7/NT TOPOR○ 质粒已载入rhIL 10基因 ,其序列与理论设计完全一致 ,表达质粒在BL2 1(DE3)pLysE中得到高效表达 ,产物主要以包涵体形式存在。结论 已成功构建重组PCRR○T7/NT TOPOR○ IL 10质粒载体 ,并在大肠杆菌BL2 1(DE3)
- 方爱平杨国成YEShui-qing夏腊菊孙凌聪刘少平
- 关键词：RHIL-10包涵体大肠杆菌
- 小鼠颌下腺2.5S神经生长因子生物活性评估标准的建立被引量：2
- 2005年
- 目的 观察小鼠颌下腺 2 5S神经生长因子 (NGF)对鸡胚背根神经节 (DRG)细胞生长的作用 ,建立一套对神经生长因子在生物活性的评估标准。方法 分离培养鸡胚背根神经节 ,加入不同浓度NGF、NGF标准品 ,另设空白和NGF与NGF抗体对照组 ,共培养 4 8h后观察各组神经节周围神经突起的生长情况。结果 NGF促进神经节细胞突起生长 ,随浓度升高突起而增多增长 ,与标准品相似 ,而不加NGF或加NGF与NGF抗体则无或仅有少量突起生长。结论 小鼠颌下腺 2 5SNGF呈剂量依赖性促进背根神经节细胞生长的作用 ,依神经节突起生长的不同程度可将NGF的生物活性划分为五个等级标准。
- 刘少平杨国成孟祥平夏腊菊朱汉民
- 关键词：神经生长因子生物活性背根神经节
- 2,5-己二酮诱导的PC12细胞损伤和凋亡被引量：5
- 2005年
- 目的建立2,5己二酮诱导的PC12细胞凋亡模型。方法以PC12细胞为神经元的细胞模型,将2,5己二酮(30、40、50mmol/L)加入培养的PC12细胞中,四甲基偶氮唑盐检测细胞活性,Hochest33258观察细胞核变化,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂、流式细胞仪检测细胞凋亡率,比较各组间的差异。结果随2,5己二酮浓度增加,细胞存活率下降(P<0.01);荧光显微镜观察有特征性的凋亡细胞核;琼脂糖凝胶电泳有明显的DNAladder;流式细胞仪检测凋亡率随2,5己二酮浓度的增大而增加(P<0.05)。结论一定浓度的2,5己二酮有导致PC12细胞损伤和凋亡的作用。
- 孙凌聪杨国成夏腊菊朱汉明张澄宇刘少平
- 关键词：2,5-己二酮PC12细胞凋亡
- 臭氧溶液对HBV体外感染的HepG2细胞的抗病毒作用研究
- 目的:建立乙型肝炎病毒 HBV 体外感染人肝癌 HepG2细胞的实验模型,研究臭氧溶液对感染细胞的抗病毒作用,并探讨其可能的作用机制。
- 付向阳杨国成朱汉明夏腊菊
- 关键词：臭氧溶液HBVHEPG2细胞抗病毒
- 文献传递
- 人生长激素亚型的基因克隆、表达及分离纯化方法的研究
- 目的:构建三种人生长激素(human growth hormone,hOH)亚型20kD hGH、17kD hGH 和 5kD hGH 的高效表达载体 pTIG-Trx/20kD hGH、pTIG-Trx/17kD hG...
- 林玲杨国成夏腊菊陈光宇
- 关键词：包涵体复性
- 文献传递
- 神经生长因子对大白鼠神经损伤的治疗作用
- 夏腊菊朱汉明杨国成方爱平
- 人乳头瘤病毒18型E2基因的原核表达载体构建与表达被引量：1
- 2008年
- 目的将人乳头瘤病毒18型(Human papillomavirus 18,HPV18)E2基因插入到原核表达载体pET28a(+)T7启动子下游,构建原核表达载体pET28a(+)-HPV18E2,原核表达并纯化HPV18E2蛋白,为研究HPV18 E2蛋白相关疫苗奠定实验基础。方法1)以HPV18型基因组DNA为模板,运用聚合酶链反应扩增E2基因,将其插入到原核表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a(+)-HPV18E2;2)PCR、限制性内切酶酶切分析以及核酸序列测定重组质粒pET28a(+)-HPV18E2的正确性;3)将重组表达质粒pET28a(+)-HPV18E2转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经镍螯合亲和层析胶体纯化HPV18E2蛋白;4)十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blot)鉴定HPV18E2蛋白的正确表达。结果1)PCR、限制性内切酶酶切分析和核酸序列分析鉴定证实了重组表达质粒pET28a(+)-HPV18E2的成功构建;2)SDS-PAGE电泳分析,HPV18E2蛋白在大肠杆菌BL21中表达量占菌体总蛋白的21%,纯化后的蛋白纯度大于90%;经Western blot鉴定,显示HPV18E2蛋白与标签蛋白(6xHis)形成相对分子质量约42KD的蛋白,与理论预计值相符。结论1)成功构建了原核表达载体pET28a(+)-HPV18E2;2)原核表达获得了HPV18E2蛋白。
- 黄发军杨国成柳长柏
- 关键词：人乳头瘤病毒E2蛋白宫颈癌
- A型流感病毒HA和BLyS基因双顺反子真核表达载体的构建及其免疫学效应的初步研究
- 目的:为了研究 B 淋巴细胞刺激因子(B Lymphocyte Stimulator,BLyS)作为新型的基因疫苗佐剂非特异增强流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)基因疫苗的免疫效应,构建能在体内外同时表达...
- 胡敏杨国成夏腊菊陈光宇
- 关键词：基因疫苗流感病毒
- 文献传递
- 单唾液酸神经节苷脂对2,5-己二酮诱导的PC12细胞凋亡的影响被引量：2
- 2006年
- 目的研究单唾液酸神经节苷脂(GM1)对2,5-己二酮(2,5-HD)诱导PC12细胞凋亡的保护作用,并探讨其作用机制。方法以PC12细胞为神经元的细胞模型,2,5-HD、GM1及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)抑制剂LY294002单独或联合处理细胞,MTT法检测细胞存活率,Giemsa染色法观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,免疫印迹检测蛋白激酶B(Akt)和磷酸化-Akt(P-Akt)蛋白的表达。结果GM1可以有效地改善凋亡引起的细胞形态学改变,提高细胞存活率(P<0.05),最高可提高36.35%;降低DNA断裂程度,减少凋亡率(P<0.001),最明显可降低69.36%。GM1能够促进Akt磷酸化,LY294002可以阻断这种作用。结论GM1对2,5-HD诱导的PC12细胞凋亡有保护作用。该保护作用可能是通过启动PI3-K信号通路,激活Akt及其下游信号而产生的。
- 孟祥平杨国成刘少平孙凌聪刘莉高兴华汤贝贝
- 关键词：神经节苷脂2,5-己二酮PC12细胞凋亡磷脂酰肌醇3-激酶蛋白激酶B正己烷中毒
