杨晓兰
- 作品数：127 被引量：158H指数：7
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市医学科研计划项目重庆市教委科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学文化科学更多>>
- 多肽/蛋白药物的聚乙二醇修饰:现状和展望
- 药用多肽或蛋白可为人源和外源物质,其主要在人体血液中循环并发挥作用。多肽或蛋白作为药物需其水溶性好,抗聚集能力强,抗人体免疫排除和降解;尤其应基本无免疫原性和抗原性,这是药用外源多肽或蛋白必须解决的问题。用聚乙二醇(PE...
- 张纯杨晓兰冯涓廖飞
- 文献传递
- 人PDE4B2全长与截短突变体的重组表达及表征
- 2018年
- 目的:比较6His-SUMO融合的人全长环核苷酸磷酸二酯酶4B2(SF-h PDE4B2)及152-528aa截短突变体(STh PDE4B2)在大肠杆菌融合表达、亲和纯化及酶学特征,以明确ST-h PDE4B2用于筛选抗炎活性h PDE4B2抑制剂的优势。方法:分别将6His-SUMO融合到人全长PDE4B2基因编码区的N端和152-528aa截短突变体N端得到SF-h PDE4B2和STh PDE4B2;大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,Ni2+-NTA亲和层析纯化,用偶联碱性磷酸酶的孔雀绿定磷法测定酶活性。结果:纯化后ST-h PDE4B2比活性接近SF-h PDE4B2的40倍,活性收率超过100倍;SDS-PAGE和6His标签免疫印迹发现纯化后2种融合蛋白都有多种带6His标签的降解片段;测定咯利普兰[(R)-Rolipram]和罂粟碱的抑制常数表明,SF-h PDE4B2对(R)-Rolipram主要为高亲和力结合构象,而ST-h PDE4B2主要为低亲和力结合构象。结论:与SF-h PDE4B2相比,ST-h PDE4B2用于筛选抗炎活性h PDE4B2抑制剂可能更有优势。
- 张祥何姝胡小蕾廖飞杨晓兰
- 关键词：酶抑制剂
- 绿脓杆菌芳香硫酸酯酶序列与活性关系的初步表征被引量：1
- 2018年
- 目的:通过定点突变初步表征绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas Aeruginosa arylsulfatase,PAAS)序列-活性关系,识别通过迭代饱和突变提高突变体比活性的合适位点。方法:分析PAAS活性中心三维构象初步识别催化相关位点;定点突变获得突变体,重组表达后Ni2+-NTA亲和纯化,表征其酶学性质。结果:与野生型相比,R55、M72、G138、D317、K375等位点用常见氨基酸替换/突变都显著降低其催化活性;R55、D317和K375等突变显著降低底物选择性和/或热稳定性,而M72和G138突变主要改变其催化活性。结论:M72和G138适合作为通过迭代饱和突变实施定向进化的候选位点。
- 李雨薇袁梅杨晓兰廖飞
- 关键词：定点突变
- 一种均相定量比较未纯化酶及其突变体比活性的方法
- 一种均相定量比较未纯化酶及其突变体比活性的方法，涉及如下步骤：重组表达需比较比活性的起始酶及其突变体；超声、化学裂解或冻融裂解宿主细胞，离心上清液用0.22μm滤膜过滤后的滤液为样品；用纯化后起始酶或某个突变体为免疫原，...
- 廖飞杨晓兰胡小蕾冯一然种慧敏李雨薇
- 文献传递
- 磁珠固定多抗预测最大吸附活性识别阳性突变体
- 2017年
- 目的考察磁珠固定多抗吸附细胞裂解液中酶/突变体,分析吸附酶活性对样品蛋白量响应曲线预测最大吸附活性(Vs)用于比较识别阳性突变体的可靠性。方法纯化重组表达大肠杆菌碱性磷酸酶(ECAP)及绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(PAAS)为免疫原;兔抗血清用33%硫酸铵分级和DEAE-纤维素层析纯化得多抗。磁珠羧基活化后固定多抗;用对硝基酚显色底物,碱终止后测定405nm吸收增量反映酶活性;分析吸附响应曲线预测Vs。结果多抗磁珠吸附酶的容量约2.0mg/g磁珠。ECAP比活性超过PAAS比活性70倍。ECAP突变体R168K较野生型比活性提高约50%,用2.5μg多抗磁珠反应10min即可预测Vs识别此阳性突变体;用PAAS突变体G138S为起始酶,用10μg多抗磁珠测定吸附酶反应20min后吸收预测Vs,能识别活性提高20%以上的PAAS弱阳性突变体。结论只要被吸附酶活性能可靠测定,优化磁珠固定多抗的用量能预测低活性酶/突变体Vs进行比较识别阳性突变体。
- 种慧敏冯一然杨晓兰廖飞
- 关键词：多抗突变体磁珠
- 双交联琼脂包嵌凹凸棒吸附剂的制备和性能研究被引量：1
- 2007年
- 报道了一种可用于血液净化的新材料——双交联琼脂包嵌凹凸棒吸附剂(DCAA)的制备方法,并对其进行了初步的性能考查。用甲苯2,4-二异氰酸酯对已用环氧氯丙烷交联过的琼脂包嵌凹凸棒(CAA)再次交联,得到的DCAA比CAA对亚甲蓝等阳离子药物的选择性吸附性能提高约4倍,强度提高约6倍,外观更加紧密。与血液充分接触1 h,血液有形成分白细胞的损失<1％,红细胞的损失<5％,血小板的损失<8％;与血液充分接触2 h,血液中白细胞的损失<2％,红细胞的损失<10％,血小板的损失<20％。
- 马育杨晓兰黄维
- 关键词：吸附剂血液净化琼脂凹凸棒
- 用多波长吸收单通道同步测量多种酶活性的方法
- 本发明公开了一种用多波长吸收单通道同步测量多种酶活性的方法；基于光吸收线性加和性及酶显色底物与其对应显色产物的等吸收波长，建立多波长吸收同步测量单通道同步测定多种酶活性所需显色底物组合设计原理及消除吸收光谱重叠干扰的数据...
- 廖飞杨晓兰刘红博党济政龙高波李元丽刘霖
- 联用酶反应过程分析法和终点平衡法测定酶底物量的方法
- 一种联用终点平衡法和酶反应动力学过程分析法处理酶反应过程数据测定酶底物量的方法；连续记录的酶反应曲线中相邻数据间信号变化超过仪器噪声两倍者为有效数据；测定加入少量酶液前的检测信号，校正酶液稀释效应得校正后起点信号；酶反应...
- 廖飞杨晓兰龙高波刘红博廖娟
- 文献传递
- 一种基于Cas13a和中介物介导的双级联循环激活无扩增快速检测RNA方法
- 本发明建立一种基于Cas13a和中介物介导的双级联循环激活无扩增快速检测RNA方法，属于生物检测技术领域。设计优选Cas13a反式剪切中介物发夹结构及产物对应引导CrRNA。靶RNA识别并结合Cas13a/RNA1复合物...
- 杨晓兰曾宏威胡小蕾
- 德氮吡格影响人肝癌细胞株QGY-7701亚细胞的蛋白质组学研究
- 2011年
- 目的观察德氮吡格（TNBG）对人肝癌细胞QGY-7701亚细胞蛋白表达的影响，探讨其影响脂代谢的分子机制。方法分别提取TNBG处理前后人肝癌细胞QGY-7701的细胞质、细胞膜和细胞核蛋白进行双向电泳，PDQuest7．4．0软件分析比对图像，采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术（MALDI—TOF-MS）鉴定差异蛋白质点。结果TNBG作用于人肝癌细胞QGY-770172h后，细胞质的差异表达蛋白质点有56个，细胞膜的差异表达蛋白质点有65个，细胞核的差异表达蛋白质点有34个，共计155个。利用MALDI—TOF-MS技术鉴定出其中33个差异表达蛋白质点，其中包括与脂质合成有关的10个蛋白质点和与脂质降解、转运有关的7个蛋白质点，如3-羟基-3甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶、角鲨烯合成酶、低密度脂蛋白受体、三磷酸腺柠檬酸裂解酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、甘油-3-磷酸酰基转移酶、长链酯辅酶A脱氢酶等，这些都是固醇调节元件结合蛋白调控的靶基因。结论TNBG可能通过固醇调节元件结合蛋白途径增加胆固醇和甘油三酯合成，导致肿瘤细胞内脂滴大量聚积。
- 袁拥华杨晓兰李伟郑小红谷容余瑜
- 关键词：肝细胞蛋白质组学脂代谢障碍德氮吡格
