柴慧萍
- 作品数：10 被引量：35H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划甘肃省自然科学基金国家科技基础条件平台建设计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 驽巴贝虫病间接ELISA检测方法的建立被引量：8
- 2010年
- 目的克隆表达驽巴贝虫诊断抗原基因BC48,建立间接ELISA诊断方法。方法从感染驽巴贝虫的毛驴血液中提取虫体基因组DNA,利用PCR技术扩增BC48基因,将其克隆入表达载体pET-28a,转化大肠埃希菌感受态细胞,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用镍柱亲和层析法纯化蛋白。以该蛋白作为诊断抗原建立间接ELISA诊断方法 ,对反应条件进行优化,并对该方法的特异性和敏感性进行评价。结果扩增获得1272bp的BC48基因片段。重组表达质粒pET-28a-BC48诱导后获得大小约为Mr46000的可溶性融合蛋白,纯化后蛋白浓度为12.98mg/ml。间接ELISA方法条件优化的结果显示,最佳抗原包被浓度为65μg/ml,最适血清稀释度为1∶80,该融合蛋白可特异性地与驽巴贝虫感染血清结合,而不与马泰勒虫感染血清及阴性血清反应。使用该方法与镜检法检测17份散养毛驴血清样品,阳性检出率分别为3/17和2/17。结论以BC48重组蛋白为抗原建立的间接ELISA方法可用于马属动物驽巴贝虫病的检测。
- 龚真莉刘光远谢俊仁柴慧萍张丽艳李知新田占成王路刘建刚
- 关键词：纯化ELISA
- 马属动物梨形虫病的PCR鉴别诊断技术研究
- 龚真莉刘光远谢俊仁张丽艳柴慧萍李知新田占成王路刘建刚张林
- 实验室条件下长角血蜱甘肃株孤雌生殖种群的生物学特性被引量：14
- 2007年
- 在实验室条件下，对我国北方长角血蜱甘肃株孤雌生殖种群的生活史进行了首次观察。研究发现，行孤雌生殖的长角血蜱为三宿主蜱；在兔体完成1个世代共需106～154d，饥饿期的幼蜱、若蜱与两性生殖的饥饿幼蜱、若蜱体重的差异不显著（P〉0．05），而饱血体重与两性生殖的长角血蜱种群饱血体重差异极显著（P〈0．01）；雌蜱饱血体重可达吸血前的108．46±19．72倍，与两性生殖的种群饱血体重差异亦极显著（P〈0．01）。雌蜱产卵量与饱食体重之间呈极显著正相关r=0．8970（P〈0．01）；生殖效率指数REI=6．76，生殖适合度指数RFI=6．29；蜱发育时间在不同季节无明显变化。
- 李知新刘光远田占成谢俊仁王路龚真莉柴慧萍孙晓林
- 关键词：长角血蜱孤雌生殖生物学特性
- 长角血蜱MLP基因的克隆、表达及反应原性分析
- 目的对长角血蜱饥饿雌性成蜱cDNA表达文库进行免疫学筛选得到部分MLP基因序列,同源性比对发现该基因与肩突硬蜱MLP基因的核苷酸序列相似性达87.9%,相关研究文献表明MLP能够参与细胞骨架形成、细胞分化、基因表达调控及...
- 沈辉柴慧萍刘光远田占成谢俊仁罗金
- 文献传递
- 几种蜱MLP基因的表达及其表达产物反应原性的分析
- 2012年
- 通过对饥饿的长角血蜱雌性成蜱cDNA表达文库中筛选到的未知基因进行5′RACE扩增,以期获得长角血蜱MLP基因全长cDNA序列。设计通用引物,采用PCR方法分别从青海血蜱、麻点璃眼蜱、森林革蜱、微小牛蜱及小亚璃眼蜱中对MLP基因完整的开放阅读框进行了扩增,并将其克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建重组质粒,转入BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,分别用SDS-PAGE和Western-blot分析目的蛋白的表达情况和反应原性。结果表明,成功扩增了长角血蜱的MLP基因全长序列及多个蜱种的MLP基因开放阅读框序列,体外高效诱导表达了约39.2ku的不同蜱的MLP重组蛋白。Western-blot结果表明,长角血蜱的MLP重组蛋白具有很强的反应原性,且不同蜱的重组蛋白间具有很强的交叉反应性。
- 沈辉刘光远柴慧萍田占成谢俊仁罗金张萍田美媛殷宏
- 关键词：MLP原核表达
- 长角血蜱MLP基因的克隆、表达及反应原性分析
- 沈辉柴慧萍刘光远田占成谢俊仁罗金
- 马属动物梨形虫病的PCR鉴别诊断技术研究
- 马属动物是国内仅次于牛和羊的主要家畜种群,在我国现有的农业生产条件下,马属动物依然是大部分农村(特别是山区和广大西部地区)的主要使役动物。目前,该动物的梨形虫病流行非常广泛,危害非常严重,给国民经济和人民生活造成极大的威...
- 龚真莉刘光远谢俊仁张丽艳柴慧萍李知新田占成王路刘建刚张林
- 关键词：马属动物梨形虫病PCR
- 文献传递
- 长角血蜱雌蜱唾液腺cDNA表达文库的免疫筛选与初步分析被引量：9
- 2008年
- 蜱的免疫预防是目前国内外研究的热点,以抗血清为探针筛选cDNA表达文库是获取功能抗原基因的有效的方法之一,为了获得抗长角血蜱免疫原基因,用兔抗长角血蜱血清和兔抗长角血蜱唾液腺蛋白血清对长角血蜱雌蜱唾液腺cDNA表达文库进行了免疫筛选,经过两轮筛选共获得34个阳性克隆,所得阳性噬菌体转染宿主菌BM25.8使之亚克隆为重组质粒,用此质粒转化宿主菌JM109并进行序列测定和生物信息学分析.结果表明:在长角血蜱雌蜱唾液腺cDNA表达文库中获得26个长角血蜱免疫相关cDNA序列,其编码蛋白与长角血蜱HL35、黏附素hlim3假定蛋白、热休克蛋白、NADH脱氢酶、钙网蛋白以及杂色花蜱和肩突硬蜱的二硫异构酶等具有同源性.所获阳性克隆为长角血蜱保护性抗原基因的筛选奠定了基础.
- 刘光远谢俊仁田占成李知新龚真莉王路柴慧萍才学鹏
- 关键词：长角血蜱唾液腺CDNA表达文库免疫筛选
- 长角血蜱丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的原核表达被引量：2
- 2009年
- 根据GenBank中的长角血蜱丝氨酸蛋白酶抑制剂(Haemaphysalis longicornisserine proteinase inhibitor-2,HLS2)基因序列设计特异性引物,以长角血蜱饥饿成蜱总RNA为模板,经RT-PCR扩增出1 164 bp的HLS2DNA片段。将其与pET-30a载体连接,构建pET-30a-HLS2表达载体,转化J M109大肠杆菌,筛选阳性克隆,经双酶切鉴定及测序分析后转化到E.coliBL21(DE3)表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE电泳分析。优化表达条件后纯化融合蛋白,用Western blotting鉴定其抗原性。结果表明,获得的HLS2 DNA片段与GenBank中的HLS2(序列号AB162827)序列的同源性为98%。构建的pET-30a-HLS2表达载体在大肠杆菌中表达了约为47000的HLS2融合蛋白,主要以包涵体形式存在,IPTG终浓度为1.0 mmol/L、28℃诱导7 h后融合蛋白的表达量最高。Western blotting显示该融合蛋白可与兔抗长角血蜱阳性血清反应。
- 王路刘光远谢俊仁龚真莉田占成柴慧萍贾宁
- 关键词：长角血蜱原核表达
- 长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库的构建及免疫学筛选被引量：5
- 2009年
- 目的构建长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库,筛选长角血蜱功能性抗原基因。方法在无RNA酶污染的条件下提取长角血蜱总RNA,进而纯化mRNA,以寡脱氧胸腺核苷酸[oligo(dT)]为引物合成双链cDNA,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将cDNA分子定向克隆至具有EcoRⅠ/HindⅢ黏性末端的λSCREEN载体。用噬菌体包装蛋白对以上连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,转化大肠埃希菌(Escherichia coli)ER1647,从而构建长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库。使用兔抗长角血蜱全蜱血清对该文库进行免疫学筛选,经过2次筛选得到的阳性噬菌体转化E.coli BM25.8亚克隆为重组质粒,转化E.coli JM109,提取重组质粒进行PCR和测序分析。结果长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库的基础库容量为1.8×106pfu,重组率为100%,扩增后的滴度为2.4×109pfu/ml。筛选获得42个阳性克隆,序列分析表明有12个新cDNA序列,其编码蛋白与长角血蜱原肌凝蛋白、环状扇头蜱幼蜱未知蛋白、黑腹果蝇染色体2R、褐黄血蜱线粒体DNA、青海血蜱HqL09、Hq05和肌球蛋白轻链mRNA等具有同源性。结论构建了长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库,获得的阳性克隆为长角血蜱功能性抗原的研究奠定基础。
- 柴慧萍刘光远张林龚真莉谢俊仁田占成贾宁
- 关键词：长角血蜱CDNA表达文库免疫学筛选
