梁爱敏
- 作品数：12 被引量：18H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家转基因植物研究与产业化专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 利用易错PCR随机突变技术突变EPSPs基因研究草甘膦抗性机理被引量：2
- 2004年
- 运用易错PCR介导的随机突变技术使高抗草甘膦的菌株的5-烯醇式丙酮酸-3-磷酸莽草酸合酶(5-Enolpyruvylshikimate-3-phosphate，EPSPs)基因发生随机突变，转入EPSPs基因缺陷型的大肠杆菌ER2799中，通过互补试验获得对草甘膦抗性明显降低的突变株AZ100。测序结果发现AZ100的EPSPs基因与未突变基因相比，碱基序列发生了两个位点变化，第792位的碱基由鸟嘌呤(G)突变为胸腺嘧啶(T)，第1203位的碱基由胞嘧啶(C)突变为鸟嘌呤(G)。氨基酸序列也发生了相应的变化，第264位由甘氨酸(Gly)突变为缬氨酸(Val)，第401位由丙氨酸(Ala)突变为甘氨酸(Gly)。二级结构预测显示此两个突变的氨基酸的位点恰好位于EPSPs与底物结合的关键部位。这两个氨基酸位点的突变，导致EPSPs在有草甘膦存在的情况下活性降低，从而导致菌株的草甘膦抗性降低。将这两个突变的碱基位点与美国的专利保护位点比较，发现这两个突变位点均不在专利保护范围之内。
- 梁爱敏刘柱张怀江刘秀敏陈明陆伟李国勋林敏
- 关键词：随机突变草甘膦抗性机理
- 利用宏基因组文库筛选草甘膦不敏感的5-enolpyruvyl shikimate-3-phosphate synthase基因
- ＜正＞5-enolpyruvyl shikimate-3-phosphate synthase（EPSPs）（EC2．5．1．19）是莽草酸途径的第六位酶, 是植物、微生物生物合成芳香族化合物的关键酶,也是草苷膦除草剂作...
- 陆伟梁爱敏孟秀萍顿宝庆金丹穆文超林敏
- 文献传递
- 高耐受草甘膦的EPSP合酶及其编码序列
- 本发明首次发现了一种新型高耐受草甘膦的EPSP合酶(5－烯醇式丙酮莽草酸－3－磷酸合酶)，以及编码该合酶的核苷酸序列。本发明发现的EPSP合酶编码基因与已报道的EPSP合酶同源性低。实验证实，将本发明所述基因在植物中表达...
- 林敏梁爱敏陆伟李亮陈明张维平淑珍
- 文献传递
- 斯氏假单胞菌A1501EPSP合酶Asn130位点抗草甘膦机理研究
- 5-烯醇氏丙酮酸莽草酰-3-磷酸合酶(EPSP合酶或EPSPS是广谱灭生性除草剂草甘膦的专一作用靶酶。源于斯氏假单胞菌A1501的EPSP合酶通过多序列比对和构建系统发育树证明为具有对除草剂草甘膦天然抗性的Ⅱ型EPSP合...
- 李亮梁爱敏李鑫鑫韩云蕾陆伟林敏
- 文献传递
- 高耐受草甘膦的EPSP合酶及其编码序列
- 本发明首次发现了一种新型高耐受草甘膦的EPSP合酶(5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶)，以及编码该合酶的核苷酸序列。本发明发现的EPSP合酶编码基因与已报道的EPSP合酶同源性低。实验证实，将本发明所述基因在植物中表达...
- 林敏梁爱敏陆伟李亮陈明张维平淑珍
- 文献传递
- 利用宏基因组文库筛选草甘膦不敏感的5-烯醇式丙酮莽草酰-3-磷酸合酶（EPSPS）基因被引量：2
- 2006年
- 为探索利用宏基因组文库筛选草甘膦不敏感的5-烯醇式丙酮莽革酰-3-磷酸合酶（EPSPS）基因，直接从土壤中提取细菌DNA，构建草甘膦污染土壤细菌宏基因组文库，并利用EPSP合酶缺失突变株ER2799筛选到4个能互补EPSP合酶功能的克隆，其中两个克隆的转化子能够在含5mmol／L草甘膦的MOPS培养基上生长。测序结果表明它们均含有完整的EPSP合酶编码基因，GT-1aroA核苷酸长度为1335bp，编码445个氨基酸，GT-4aroA核苷酸长度为1350bp，编码450个氨基酸。利用PCR方法将两个基因克隆到原核表达载体pET28a上后，可以使宿主细胞BL21（DE3）在含100mmol／L草甘膦的MOPS培养基中良好生长。上述结果表明，利用宏基因组文库筛选方法可以得到高抗草甘膦的EPSPS基因。
- 陆伟梁爱敏孟秀萍顿宝庆金丹穆文超林敏
- 关键词：草甘膦
- 新型高抗草甘膦EPSP合酶基因的拆分和重建
- 由于花粉带来抗草甘膦基因的漂移产生超级杂草。目前解决思路是由于花粉中只含有染色体DNA,叶绿体DNA 不能随植物花粉转移,因此可将抗草甘膦基因拆分成两个没有活性的基因片断,一个整合在染色体DNA 上,一个插入叶绿体DNA...
- 顿保庆金丹梁爱敏陆伟林敏
- 关键词：草甘膦
- 文献传递
- 极端污染环境下草苷膦抗性菌株HTG7的筛选及其特性研究被引量：7
- 2004年
- 从被草苷膦极度污染的土壤中分离到一株极端抗草苷膦菌HTG7,经初步鉴定其为可变盐单胞菌 (Halomonasvarabilis) ,该菌株最高可以耐受 5 0 0mmol L左右的草苷膦浓度。电镜观察表明 ,5 5 0mmol L的草苷膦浓度下 ,细胞大量坏死。生理生化特性表明该菌最适pH为 7 0 ,并且在氯化钠浓度 0～ 1 0 %生长良好。
- 刘柱梁爱敏张维平淑珍陈明陆伟徐玉泉杨志荣林敏
- 荧光假单胞菌G2-EPSP合酶的拆分和intein介导的活性恢复被引量：1
- 2006年
- 利用GPS-LS接点扫描系统,在荧光假单胞菌G2的5-磷酸烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶编码基因aroA中随机插入15 bp(即编码5个氨基酸短肽)的外源片段,建立含一系列不同插入位点的aroA突变体库．利用内源aroA基因缺失的大肠杆菌突变株ER2799对突变体库进行功能互补筛选,测序后确定了12个可以忍受5个氨基酸插入的位点,其中位点F295／T296经Ssp DnaE内含肽(intein)介导的蛋白互补技术鉴定为可拆分和蛋白重建的位点．从位点F295／T296将G2-EPSPS基因一分而二,N-端和C-端片段分别连接在携带Ssp DnaE内含子元件的原核表达双质粒上,获得共转化质粒pMEPSN295IN和pKEPSc296Ic．将质粒pMEPSN295IN和pKEPSc296Ic分别或共转化内源aroA基因缺失的大肠杆菌突变株ER2799中,携带共转化质粒的重组子能够在M9限制性培养基生长,而携带单一质粒的不能生长,表明从位点F295／T296拆分的aroA基因在内含肽介导下实现了蛋白重建,在突变株ER2799中恢复了5-磷酸烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶活性,酶活水平达到野生型的62．92％,为4．48 U/mg．
- 顿宝庆陆伟张维平淑珍王旭静陈明徐玉泉金丹王劲赵仲麟梁爱敏侯松娜Ming-Qun Xu林敏
- 极端草甘膦环境中EPSP合酶基因的克隆及其抗性相关位点的鉴定
- 该论文以5-烯醇式丙酮酸-3-磷酸莽草酸合酶(5-Enolpyruvylshikimate-3-phosp-hate Syntheses简称EPSP合酶)为研究对象,以克隆新的EPSP合酶和鉴定EPSP合酶基因中草甘膦抗...
- 梁爱敏
- 关键词：草甘膦EPSP合酶易错PCR基因文库二级结构预测
- 文献传递
