王丹静
- 作品数：12 被引量：35H指数：4
- 供职机构：中南大学湘雅医学院病原生物学系更多>>
- 发文基金：湖南省重点学科建设项目更多>>
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- 弓形虫GRA1与HBsAg二价核酸疫苗的研究
- 目的:构建乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和弓形虫致密颗粒抗原-1(GRA1)融合基因真核表达载体pcDNA3-HBsAg-GRA1,观察该二价DNA疫苗的保护性.方法:1.构建融合基因表达载体pcDNA3-HBsAg-G...
- 王丹静
- 关键词：融合基因HBSAG核酸疫苗
- 文献传递
- 弓形虫和乙型肝炎病毒混合核酸疫苗的研究Ⅱ.pcDNA3-HBsAg-GRA1在COS-7细胞中的表达及鉴定被引量：6
- 2005年
- 目的 鉴定pcDNA3 HBsAg GRA1在哺乳动物细胞内是否表达目的蛋白。 方法 提取pcDNA3 HBsAg GRA1质粒 ;体外培养COS 7细胞 ;pcDNA3 HBsAg GRA1经脂质体转染体外培养的COS 7细胞 ;取转染后的细胞培养上清进行SDS PAGE ,Western blot鉴定。结果 成功将pcDNA3 HBsAg GRA1转染入COS 7细胞。转染的细胞能高效表达分子为 4 7kD分泌性融合蛋白 (HBsAg GRA1)。HBsAg GRA1能同时被HBsAb阳性人血清及弓形虫免疫兔血清所识别。 结论 pcDNA3 HB sAg GRA1在体外培养的COS 7细胞中高效表达与预期分子量大小相同 ,且具有免疫学活性的融合蛋白。
- 王丹静舒衡平秦志强蔡力汀吴翔蒋立平
- 关键词：COS-7细胞弓形虫
- 弓形虫和乙型肝炎病毒混合核酸疫苗的研究Ⅲ.pcDNA3-HBsAg-GRA1免疫小鼠的保护性观察被引量：8
- 2005年
- 目的观察重组质粒pcDNA3HBsAgGRA1DNA接种诱导的保护性免疫应答。方法质粒DNA免疫BALB/c小鼠;ELISA法检测GRA1、HBsAg抗体及亚类水平;提取各免疫组小鼠肌肉组织DNA进行PCR检测;弓形虫RH强毒株攻击感染各免疫组小鼠。结果经pcDNA3HBsAgGRA1免疫组小鼠产生抗GRA1和HBsAg抗体,且抗GRA1的抗体水平明显高于GRA1单独和GRA1与HBsAg混合免疫组。弓形虫RH强毒株攻击感染pcDNA3HBsAgGRA1免疫组小鼠,其存活时间明显长于其他各组,结果提示HBsAg可能起免疫佐剂作用。结论将GRA1与HBsAg融合明显增强了GRA1的免疫原性和保护性。
- 王丹静舒衡平蔡力汀吴翔蒋立平
- 关键词：弓形虫乙肝表面抗原DNA疫苗
- 大鼠天然抗体相关的弓形虫抗原基因的免疫筛选与克隆被引量：1
- 2004年
- 目的 研究大鼠对弓形虫感染的天然抗性分子 ,为弓形虫病疫苗的研制提供新的抗原分子。方法 用正常大鼠血清作为探针筛选弓形虫速殖子cDNA文库 ,对阳性克隆的插入片段分别进行PCR扩增及DNA序列测定。结果 从cDNA文库 2× 10 5个噬菌斑中筛选出 5个阳性克隆 ,其插入片段大小分别为 0 5 5～ 1 8kb。对P1、P4、P6和P8四个克隆进行测序 ,将所得序列查询基因序 ,结果显示 :P8与弓形虫棒状体蛋白 2 (ROP2 )基因相同。P4为弓形虫的新基因序列 (GenBank中的登录号为AY34916 2 ) ,命名为T .gP4。T .g -P4编码 96个氨基酸的跨膜蛋白。PROSCAN分析显示T .g -P4含有 4个蛋白激酶C磷酸化位点 ,3个N -肉豆酸酰化位点 ,1个核糖体蛋白L2 9信号。P1和P6为新基因片段。阳性克隆的分子鉴定正在进行中。结论 阳性克隆的筛选和鉴定为抗弓形虫病疫苗的研制奠定基础。
- 蒋立平舒衡平王丹静蔡力汀吴翔
- 关键词：弓形虫CDNA文库免疫筛选克隆
- 血吸虫病性肝纤维化相关细胞因子的研究进展被引量：1
- 2002年
- 肝纤维化是血吸虫病严重的病理表现 ,它可进一步导致门脉高压、食管胃底静脉曲张、脾肿大等最终致死。近年来的研究显示 :细胞因子在血吸虫病肝纤维化的形成过程中 ,具有十分重要的作用。 Th1型细胞因子诸如 IFN-、IL -12、IL - 18有利于减少肝纤维化 ,而 Th2型细胞因子诸如 IL - 13则有助于肝纤维化。然而 ,无论 Th1型细胞因子或 Th2型细胞因子极化可引发不同的但是同样致死的后果。所以今后研究的重点之一应是探索怎样维持两型细胞因子的平衡。
- 王丹静陈焱何永康
- 关键词：血吸虫病肝纤维化相关细胞因子TH1型细胞因子TH2型细胞因子
- 6个弓形虫新基因的克隆与分析被引量：3
- 2003年
- 目的 :克隆并分析弓形虫新的抗原基因 ,为弓形虫病疫苗的研制提供有效的候选抗原分子。方法 :以弓形虫RH株速殖子感染大鼠血清作为探针筛选弓形虫cDNA文库 ,对阳性克隆的插入片段进行PCR扩增及DNA序列测定。通过互联网对测序获得的核苷酸序列进行同源性分析 ,并预测新基因编码蛋白质的结构与功能。结果 :共筛选出 13个阳性克隆 ,其插入片段大小分别为 0 .4 5～ 2 .4kb。通过测序分析 ,其中新基因L3,L6 ,L7和L13分别编码 4 9,5 9,16 0和 76个氨基酸组成的非跨膜蛋白 ;新基因L11和L12基因分别编码 5 5 0和 114个氨基酸组成的跨膜蛋白。结论
- 蒋立平舒衡平蔡力汀吴翔王丹静
- 关键词：弓形虫属抗原克隆
- 弓形虫pcDNA3/T.g-R1的构建与保护性效果观察
- 2004年
- 弓形虫能感染几乎所有的温血动物,但对各种动物易感性各不相同:大鼠和绵羊对弓形虫有较高的天然抵抗力;人对弓形虫不太敏感,有较强的天然抵抗力,人感染弓形虫后绝大多数为隐性感染.
- 蒋立平舒衡平吴翔蔡力汀王丹静
- 关键词：弓形虫
- 弓形虫和乙型肝炎病毒混合核酸疫苗的研究Ⅰ.pcDNA3-HBsAg-GRA1真核表达质粒的构建及鉴定被引量：4
- 2004年
- 目的 构建 pcDNA3-HBsAg -GRA1真核表达质粒 ,为提高弓形虫DNA疫苗保护性做出新的探索 ,并期望“一 / +-苗两用”。方法 采用PCR分别扩增HBsAg、GRA1;经BclⅠ、EcoRⅠ双酶切HBsAg ;EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切GRA1;BamHⅠ、XhoⅠ双酶切载体 pcDNA3 0 ;HBsAg、GRA1、pcDNA3 0双酶切纯化产物与T4DNA连接酶在 2 2℃连接过夜 ,用双酶切及双脱氧末端终止法测序鉴定重组质粒。结果 成功构建pcDNA3-HBsAg -GRA1真核表达质粒。结论 为进一步研究 pcD NA3-HBsAg -GRA1诱导的保护性免疫奠定了基础。
- 王丹静舒衡平蔡力汀吴翔蒋立平
- 关键词：弓形虫乙型肝炎病毒真核表达质粒
- 弓形虫真核表达质粒pcDNA3/GRA1的构建及序列测定被引量：3
- 2003年
- 目的 :构建弓形虫致密颗粒抗原 1 (GRA1 )真核表达质粒 ,为进一步开展DNA疫苗的保护性研究打下基础。方法 :采用PCR扩增出编码GRA1目的基因 ,用EcoRⅠ /XhoⅠ分别对扩增产物和真核表达质粒pcDNA3进行双酶切 ,将GRA1定向克隆到pcDNA3EcoRⅠ /XhoⅠ位点 ;对重组质粒进行PCR ,双酶切初步鉴定后做序列测定。结果 :特异扩增出预计的GRA1片段 ,大小为 5 73bp ;扩增产物双酶切后成功连接到pcDNA3中 ,经PCR ,双酶切及序列测定结果表明重组质粒中含有GRA1读框。结论 :成功构建弓形虫GRA1真核表达质粒。
- 蔡力汀舒衡平蒋立平吴翔王丹静
- 关键词：弓形虫真核表达质粒
- 编码弓形虫致密颗粒抗原-1(GRA1)质粒DNA免疫小鼠诱导抗弓形虫感染的保护性(英文)被引量：9
- 2005年
- 目的构建真核表达质粒pcGRA1,并观察其免疫小鼠的保护性。方法经PCR从cDNA克隆中扩增出GRA1编码基因,定向克隆入pcDNA3的EcoRⅠ/XhoⅠ位点,从而获得pcGRA1。用限制性内切酶消化、PCR及序列测定对该重组质粒进行鉴定。将100μg质粒于小鼠左后腿DNA肌注,于注射后2周和4周各加强1次;分别观察小鼠体内的特异性抗体滴度、GRA1基因在小鼠体内的分布、GRA1在肌细胞的表达以及免疫小鼠对弓形虫强毒株RH速殖子攻击后的保护性。结果DNA序列测定结果表明,将573bp的GRA1编码阅读框定向克隆到pcDNA3EcoRⅠ/XhoⅠ位点,成功构建了重组质粒pcGRA1;免疫小鼠血清中检测到特异性IgG;不同组织DNA为模板特异地扩增出GRA1编码基因;IFA检测pcGRA1免疫鼠肌细胞呈阳性反应;弓形虫RH株速殖子攻击感染pcGRA1免疫鼠,其存活时间长于对照组。结论重组质粒pcGRA1免疫小鼠可诱导特异性免疫反应,对弓形虫强毒株的攻击感染具有一定的保护性。
- 蔡力汀舒衡平王丹静蒋立平吴翔
- 关键词：弓形虫DNA疫苗
