- 血管平滑肌细胞在不同细胞外基质的迁移特性:玻片倒扣法研究被引量：3
- 2013年
- 血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)迁移参与血管发育和多种疾病的发生、发展过程,然而其迁移机制尚不清楚。本课题建立了一种适合研究VSMCs迁移的方法——玻片倒扣法,基于该方法进一步研究VSMCs在不同细胞外基质上的迁移特性及机制。原代培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs),采用免疫细胞化学方法鉴定其纯度。将细胞接种于小玻片上,待生长至单层汇合后,将小玻片倒扣于包被有不同细胞外基质的大玻片上,培养24h后,固定、拍照、统计软件测量迁移出的细胞数量和迁移距离。进一步采用细胞划痕实验和免疫细胞化学技术,研究细胞外基质对PASMCs迁移的作用及机制。结果显示:(1)原代培养PASMCs纯度高达(97±3)%;(2)玻片倒扣24h后,层粘连蛋白(laminin)组、基质胶(Matrigel)组比对照(phosphate buffered saline,PBS)组、多聚右旋赖氨酸(poly-D-lysinehydrobromide,PDL)组迁出的细胞数量更多,迁移距离更远,差异具有明显统计学意义;(3)细胞划痕8、12、24h后,细胞在层粘连蛋白、基质胶上的面积愈合率比在PBS上的高,差异具有统计学意义;(4)免疫细胞化学结果显示迁移能力较强的PASMCs中肌动蛋白在与细胞运动方向相一致的边缘聚集现象越明显;vinculin(粘附斑的标记物)染色显示,种植于层粘连蛋白和基质胶上的PASMCs中,vinculin的分布较PBS和PDL上的更少。上述结果表明:玻片倒扣法是一种适合研究VSMCs迁移的方法;层粘连蛋白和基质胶可能通过抑制粘附斑的形成和调节骨架蛋白,促进VSMCs迁移。
- 王凤王桂芹薛峰陈兆琴龚永生黄智慧
- 关键词：肺动脉平滑肌细胞细胞外基质
