王培之
- 作品数：5 被引量：64H指数：4
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- 相关领域：生物学更多>>
- 用遗传工程的方法构建一个分泌型高表达的枯草杆菌碱性蛋白酶E(Subtilisin E)的枯草杆菌质粒-宿主系统被引量：9
- 1993年
- 将克隆了枯草杆菌蛋白酶E基因aprE的枯草杆菌质粒pPZW101和一个组成型強启动子Psk连接构建成质粒pPZW102,转入碱性和中性蛋白酶缺失枯草杆菌DB104并进行表达。此质粒-宿主系统具有Subtilisin E高表达和外分泌的特点。
- 王培之王贤舜丁丽俐
- 关键词：启动子蛋白酶枯草杆菌
- 枯草杆菌碱性蛋白酶E的纯化和性质被引量：25
- 1992年
- 目前国内外研究较多的是地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)碱性蛋白酶Carlsberg和解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)碱性蛋白酶BPN’的纯化。鉴于蛋白酶E和蛋白酶BPN’在结构上有15％的非同源性,故我们用修饰纯化蛋白酶BPN’的方法来纯化蛋白酶E(subtilisin E)。
- 王贤舜路阳张治洲邓力李冰施建平王培之
- 关键词：蛋白酶E层析分离枯草杆菌
- 用蛋白质工程的方法改良枯草杆菌蛋白酶E(Subtilisin E)的抗氧化性被引量：6
- 1992年
- 以含有蛋白酶E基因(aprE)的单链M13mp18-aprE DNA为模板,合成的寡核苷酸5′-3′为诱变引物,用缺口双链法对aprE进行Met-222-Ala点突变。经菌落印迹杂交筛选,选出阳性噬斑。用SaⅡ酶解M13mp18-aprE得到aprE,将它和pPZW103重组,转化中性、碱性蛋白酶缺失宿主菌DB104。经含卡那霉素和脱脂奶粉板筛选和比较aprE限制性内切酶NcoⅠ和SacⅡ水解电泳图谱分析,完成构建一个分泌抗氧化的枯草杆菌蛋白酶E的工程菌PW8888。
- 王培之王贤舜孔丽云李党生
- 关键词：蛋白酶E抗氧化性枯草杆菌
- 基因融合方法的发展和应用
- 1989年
- 近十几年来,出于一系列新的、强有力的基因研究方法的发展、卓有成效地提高了分析生物问题的能力。其中,如限制性内切酶的使用,重组DNA技术的发展,以及DNA测定技术的精细改进等,对生命科学在近几年的迅速发展所作出的重大贡献是众所公认的。
- 王培之孔丽云
- 关键词：基因融合
- 用考玛斯亮兰G—250迅速、灵敏地测定蛋白质浓度被引量：25
- 1992年
- 蛋白质浓度测定法是生物化学实验室最常用的方法,目前用得比较多的有双缩脲法、Folin酚法。对混有核酸的蛋白质则用260nm和280nm的紫外光吸收测定法。如果利用肽键在远紫外区(205 nm附近)的光吸收,受氨基酸组成分的影响较小,则可更精确地测定蛋白质浓度。比较这些方法的优劣时我们发现:双缩脲法灵敏度低;Folin酚法需要较多的试剂,过程比较复杂,不准确;280nm和260nm的光吸收测定法精度不高,对不含核酸的蛋白质的测定有局限性;远紫外光吸收测定精度高,但芳香族和蛋白质二级结构如α-螺旋。
- 路阳王贤舜丁丽俐王培之
- 关键词：蛋白
