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shRNA沉默Survivin基因对胶质瘤细胞U87生物学行为影响的研究: 2011年; 目的观察短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默Survivin基因对人脑胶质瘤细胞U87增殖、凋亡等生物学特性的影响。方法通过脂质体LipofectamineTM 2000对胶质瘤细胞株U87转染Survivin shRNA干扰质粒(Suvrivin shRNA-i),以及对照无意义质粒(Suvrivin shRNA-nonsense),应用RT-PCR、Western blot检测转染前后Survivin mRNA和蛋白表达,流式细胞术测定各组细胞的细胞周期及TUNEL测定细胞凋亡形态。结果转染Survivin shRNA-i组的Survivin mRNA及蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05)。与对照组相比较,转染Survivin shRNA-i后细胞周期G_2/M期阻滞显著,细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论靶向Survivin基因的特异性shRNA能够阻制U87细胞的生长并诱导其凋亡。; 焦保华田伟梁朝辉郭二坤卢圣奎; 关键词：神经胶质瘤

PTEN在正常脑组织及脑胶质瘤中的表达与细胞凋亡的关系被引量：1: 2011年; 0引言胶质瘤是中枢神经系统中最常见的恶性肿瘤,在国内胶质瘤的发病率居颅内肿瘤之首,虽然脑肿瘤的手术技巧以及放疗和化疗等综合治疗己经取得了很大的进展,但恶性胶质瘤患者的预后仍然很差。随着分子生物学和分子遗传学的发展,; 郑克彬何心田伟焦保华; 关键词：PTEN 脑胶质瘤细胞凋亡

shRNA Notch2对人脑胶质瘤细胞株U251生长及凋亡的影响被引量：2: 2011年; 目的:探讨稳定转染基因Notch2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对胶质瘤细胞株U251生长、增殖和凋亡的影响。方法:采用脂质体法将构建插入Notch2-shRNA和无意义shRNA(Negative-shRNA)的重组表达质粒分别转染人脑胶质瘤U251细胞,建立稳定长效转染的细胞株;应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测Notch2-shRNA对U251细胞中Notch2表达的影响及相关蛋白表达的变化;MTT法检测其细胞增殖的影响;FCM法检测细胞凋亡率和细胞周期。结果:稳定转染Notch2-shRNA后,U215细胞中Notch2 mRNA和蛋白的表达明显受到抑制;干扰组细胞从第5天开始增殖明显降低(P<0.05);干扰组细胞的凋亡率为(15.14±4.26)%,明显高于Negative-shRNA组的(2.70±1.45)%和未转染组的(2.10±1.72)%(P<0.05);Notch2-shRNA干扰组细胞S期细胞所占百分比为(23.1±3.4)%,明显低于转染Negative-shRNA组的(41.2±6.9)%和未转染组的(53.2±7.8)%(P<0.01),而干扰组G1期细胞所占百分率为(51.8±3.9)%,显著高于转染Negative-shRNA组的(38.9±9.7)%和未转染组的(25.2±7.7)%(P<0.05);与转染Negative-shRNA组和未转染组相比,干扰组细胞中p21和p27蛋白表达量上调,而细胞周期蛋白cyclinD1和微型染色体维持蛋白2(minichromosome maintenance 2 protein,MCM2)的表达量下调。结论:Notch2shRNA能有效抑制U251细胞中Notch2的表达和细胞的增殖,为脑胶质瘤基因治疗提供了新的靶点。; 何心焦保华郑克彬田伟梁朝辉; 关键词：神经胶质瘤

PTEN重组腺病毒对胶质瘤细胞株凋亡及凋亡抑制蛋白因子家族的影响: 2010年; 目的探讨以腺病毒为载体转染第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)对胶质瘤细胞株增殖和凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法以携带PTEN的重组腺病毒(Ad-PTEN)转染胶质瘤细胞株,应用RT-PCR、Western blot检测PTEN基因mR-NA、蛋白表达的变化,MTT、TUNEL和流式细胞法检测转染后细胞增殖能力及凋亡率的改变。RT-PCR检测转染后凋亡抑制蛋白因子家族(inhibtor of apoptosis family of proteins,IAPS):CIAP1、CIAP2、XIAP、SURVIVIN的mRNA水平的变化,Westernblot检测细胞CIAP1、CIAP2、XIAP、SURVIVIN的蛋白表达水平的变化。结果经荧光显微镜证实Ad-PTEN转染成功,Western blot、RT-PCR显示转染后PTEN基因表达显著增加。PTEN转染U251、U87、A172细胞株后3d细胞凋亡率明显高于对照组(F分别为93.80、95.70、72.52,P<0.01),PTEN转染组中CIAP1、CIAP2、XI-AP、SURVIVIN mRNA及蛋白水平与空白转染组mRNA及蛋白水平相比明显下降(F分别为73.8、49.5、50.4、69.1、39.7、48.8、54.3、70.3,P<0.01)。结论 PTEN转染后可能通过抑制IAPS家族表达途径促进细胞凋亡,从而抑制胶质瘤细胞株的的生长。; 郑克彬何心田伟焦保华; 关键词：PTEN 脑胶质瘤细胞凋亡

shRNA干扰Survivin基因后胶质瘤细胞中Survinvin及mcm2的表达及意义被引量：1: 2015年; 目的观察小发夹状RNA(shRNA)干扰生存素(Survivin)对脑胶质瘤细胞株U251中Survivin及微小染色体维持蛋白2(MCM2)表达的影响。方法通过脂质体介导对脑胶质瘤细胞株U251、转染Survivin shRNA质粒PG-sur(p Genesil-Suvrivin)及无意义shRNA质粒PG,采用RT-PCR、Western-blot分别对未转染组(U251)、转染无意义序列组(U251-PG)及转染干扰序列组(U251-sur)检测Survivin的mRNA及蛋白表达情况,流式细胞术(FCM)定量测定各组细胞的细胞周期和细胞凋亡,MTT检测细胞增殖能力。采用RT-PCR、Western-blot分别检测转染前后细胞MCM2的mRNA和蛋白的表达情况。结果与其他两组比较,转染干扰序列组细胞Survivin基因的mRNA及蛋白表达抑制效果显著,细胞增殖能力降低,细胞周期G2/M期阻滞显著,细胞凋亡率升高(p<0.05)。MCM2的mRNA和蛋白表达显著降低。结论靶向Survivin基因的特异性shRNA能够在体外明显抑制U251细胞的生长并诱导其发生凋亡及细胞周期阻滞。且本试验结果表明MCM2是一可靠的细胞增殖标记物,且与Survivin之间不是各自孤的,两者间可能起协同作用共同参与胶质瘤的发生。; 田伟郑克彬何心宋国智梁朝辉焦保华; 关键词：胶质瘤

shRNA靶向干扰Notch2对人脑胶质瘤细胞株U251的影响: 2010年; 目的研究Notch2信号对人脑胶质瘤细胞株U251的增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法应用脂质体将pGFP-V-RSNotch2shRNA干扰质粒导入胶质瘤细胞株U251后,应用MTT法检测细胞增殖变化、流式细胞仪检测转染效率、细胞凋亡和细胞周期的改变、RT-PCR和Westenblot检测Notch2基因的抑制效果和干扰后细胞周期、凋亡相关蛋白的表达改变。结果 pGFP-V-RSNotch2shRNA干扰质粒转染效率为86.68%±2.54%,转染后在mRNA水平和蛋白水平均发生Notch2的表达抑制,与无关序列组和未转染组相比干扰组细胞自第5天开始增殖明显减慢(P<0.05),干扰组G0/G1期细胞百分数(68.2%±1.29%)显著高于无关序列组和未转染组(35.8%±2.37%和47.7%±1.03%,P<0.01),而干扰组G2/S期细胞(20.4%±1.56%)显著低于无关序列组和未转染组(49.1%±3.65%和35.4%±2.42%,P<0.05),干扰组凋亡率显著升高(P<0.05)。细胞周期、凋亡相关蛋白P21上调,cy-clinD1、p-Rb下调。结论 Notch2靶向干扰能够显著抑制U251细胞株的增殖、阻滞细胞周期、增加凋亡。; 何心焦保华郑克彬田伟; 关键词：胶质瘤

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田伟

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