秦保亮
- 作品数：62 被引量：68H指数：5
- 供职机构：河南科技学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生经济管理水利工程更多>>
- 猪流行性腹泻病毒可视化RT-LAMP检测方法的建立与初步应用被引量：2
- 2023年
- 为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)可视化反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法,本研究根据PEDV ORF1a/b基因的保守序列,设计了8组特异性引物,以PEDC cDNA为模板,采用试剂盒推荐的各反应条件经LAMP扩增,根据LAMP反应产物琼脂糖凝胶电泳结果筛选最佳引物组。以筛选的外引物PE2 F3/B3经PCR从PEDV cDNA中扩增ORF1a/b基因,构建重组质粒pPE-ORF1-2并分别经PCR和测序鉴定。结果显示,2号引物组(内引物PE2 FIP/PE2 BIP,外引物PE2 F3/PE2 B3)为最佳引物。PCR和测序鉴定结果表明重组质粒正确构建,经计算其浓度为1.56×1011拷贝/μL,将其稀释1000倍后作为质粒标准品。为建立检测PEDV的RT-LAMP方法,本研究对该方法的反应时间、反应温度、Mg2+浓度、内、外引物及dNTP浓度进行了优化,结果显示,RT-LAMP反应体系为:60℃反应50 min,Mg2+浓度80 mmol/L,内外引物终浓度分别为32μmol/L和5μmol/L,dNTP浓度10 mmol/L;通过在上述体系中加入甲酚红指示剂,初步建立了可视化RT-LAMP检测方法。特异性试验结果显示,该方法仅能检出PEDV,与猪德尔塔冠状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪传染性胃肠炎病毒均无交叉反应,且阳性管体系颜色由紫红色变为黄色,阴性反应管体系颜色保持紫红色,特异性较强;将重组质粒标准品pPE-ORF1-210倍倍比稀释(1.65×100拷贝/μL~1.65×108拷贝/μL)后作为模板,采用本研究建立的可视化RT-LAMP方法进行敏感性试验,结果显示,该方法对pPE-ORF1-2检测限为10拷贝/μL,比以重组质粒pPE-M-GB为模板,以引物PEGBF/PEGBR的PEDV国标RT-PCR方法的敏感性高1个数量级,敏感性较高;重复性试验结果显示,该方法对不同浓度质粒标准品的批内和批间重复性试验的变异系数均小于5%,重复性较好。对53份临床样品检测结果显示,RT-LAMP和RT-PCR对PEDV的检出率分别为32.1%(17/53)和28.3%(15/53)。二者的总符合率为96.2%(51/53)。本研究建立的PEDV RT-LAMP检
- 李林岳李任峰袁嘉康秦保亮庞俊增蔡琳琳赵晓会范国英王自良
- 关键词：猪流行性腹泻病毒RT-LAMP可视化
- 山羊痘病毒糖蛋白基因ORF122的克隆及其原核表达被引量：1
- 2010年
- 以山羊痘弱毒疫苗毒株AV41的细胞培养物中提取的总DNA为模板,通过PCR扩增获得山羊痘病毒(GTPV)ORF122基因片段。另设计1对引物,经PCR扩增获得缺失跨膜功能区的ORF122基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-32a中,构建了重组表达质粒pET-ORF122,将其转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导,成功表达出分子质量为32ku的融合蛋白。免疫印迹试验证实,表达的融合蛋白可以被GTPV阳性血清识别。经对该重组蛋白进行纯化,结果其纯度达到90%以上,产量达5.5mg/L。上述结果为GTPV重组诊断抗原的筛选和新型疫苗的研制奠定了基础。
- 李春艳郑敏黎宗强莫胜兰屈素洁梁媛李向涛秦保亮
- 关键词：山羊痘病毒克隆原核表达
- 一种非洲猪瘟病毒抗原表位多肽及ELISA抗体检测试剂盒
- 本发明公开一种非洲猪瘟病毒抗原表位多肽，抗原表位多肽由非洲猪瘟病毒p72蛋白抗原表位多肽和pp62蛋白抗原表位多肽组成，p72蛋白抗原表位多肽序列为NKSYGKPDPEPTLSQI，位置37‑52aa；pp62蛋白抗原表...
- 秦保亮李任峰李春艳王超牛巧平牛可可
- 布鲁氏菌病的诊断检测和综合防控
- 2013年
- 布鲁氏菌病（简称布病）是由布氏杆菌引起的一种人兽共患的慢性细菌性传染病，该病属自然疫源性传染病，在全世界各地都有很广泛的分布，严重危害人民健康和畜牧业发展，我国将其列为二类动物疫病。主要引起动物流产、不孕、睾丸炎以及人的波浪热。人医临床上主要表现为病情轻重不一的发热、多汗、关节痛等。
- 秦保亮
- 关键词：布鲁氏菌病细菌性传染病动物疫病自然疫源性人兽共患布氏杆菌
- 华支睾吸虫病的流行病学及防治措施
- 2016年
- 华支睾吸虫又称肝吸虫，其寄生在人和犬、猫等动物的胆囊和胆管内造成肝胆的一系列疾病，是一种重要的人畜共患寄生虫病。人体感染是因为食入含有华支睾吸虫活囊蚴的鱼或虾所致。
- 杜海燕陈光丽荆汝顶秦保亮韩俊伟
- 关键词：华支睾吸虫病流行病学人畜共患寄生虫病囊蚴
- 一种菌液多级稀释装置
- 本发明涉及一种菌液多级稀释装置，有效的解决了目前菌液稀释人工效率低；解决的技术方案包括储液腔和混液腔，储液腔位于混液腔上方，混液腔内装有一个用于排液的第一虹吸管，第一虹吸管的内端高于混液腔内底面固定距离，储液腔内安装有第...
- 刘海林王丽荣张守平杜少甫卢晓辉秦保亮杜海燕胡元春程亮邹小娟
- 文献传递
- 华支睾吸虫的流行病学分析
- 2016年
- 华支睾吸虫是一种严重的食源性寄生虫病，其寄生在人和犬、猫等动物的胆囊和胆管内造成肝胆的一系列疾病。寄生在肝胆管内虫体运动的机械性刺激和虫体代谢产物的作用，致胆管上皮损伤，胆管阻塞，从而引起华支睾吸虫病，可表现为胆管胆囊炎、胆石症和儿童发育障碍等。该病在我国流行范围广、感染率高，呈地方分布。本文主要针对其流行病学进行分析，正确认识该病发生流行情况，为更好地开展预防和治疗提供依据。
- 杜海燕陈光丽荆汝顶秦保亮韩俊伟
- 关键词：华支睾吸虫病传染源
- 华支睾吸虫的临床症状及治疗被引量：1
- 2016年
- 华支睾吸虫又称肝吸虫，其寄生在人和犬、猫等动物的胆囊和胆管内造成肝胆的一系列疾病，是一种重要的人畜共患寄生虫病。人体感染是因为食入含有华支睾吸虫活囊蚴的鱼或虾所致。寄生在肝胆管内虫体运动的机械性刺激和虫体代谢产物的作用，致胆管上皮损伤，胆管阻塞，从而引起华支睾吸虫病，可表现为胆管胆囊炎、胆石症和儿童发育障碍等，重者可发生肝硬化。华支睾吸虫病是我国流行最严重的食源性寄生虫病，被卫生部列为我国重点防治寄生虫病之一。
- 杜海燕陈光丽荆汝顶秦保亮韩俊伟
- 关键词：华支睾吸虫流行病学
- 穿心莲的药理作用及临床应用
- 2016年
- 穿心莲的地上部分，又名一见喜、斩蛇剑、印度草等，为爵床科植物，味苦、寒，具有清热解毒、凉血消肿之功，对多种感染性疾病有效，有减轻心肌缺血一再灌注损伤的作用，对冠脉血栓性心肌梗塞有防治作用，也可抑制血小板聚集等。
- 杜海燕秦保亮韩俊伟李春艳
- 关键词：穿心莲药理作用
- 空肠弯曲杆菌的病原学及其诊断
- 2016年
- 空肠弯曲杆菌是一种能引起人畜共同感染的病原菌,其受重视程度也越来越高.该菌可以引起家畜流产、不孕、乳房炎及幼畜腹泻和家禽肝炎.由于畜禽携带此菌而导致的乳肉等动物性食品被污染是人类感染空肠弯曲杆菌的主要原因.空肠弯曲杆菌在自然界广泛存在,严重威胁人畜健康,在公共卫生学和畜禽养殖业上具有重要意义.
- 杜海燕秦保亮韩俊伟李春艳
- 关键词：空肠弯曲杆菌病原学
