胡沙
- 作品数：16 被引量：38H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金更多>>
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- EZH2基因在人卵巢癌顺铂耐药株中的表达及其对细胞耐药性的影响被引量：9
- 2010年
- 目的:检测果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer ofzestehomolog 2,EZH2)基因在人卵巢癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药细胞株A2780/DDP及其亲本细胞株A2780中的表达差异,探讨以EZH2基因为靶向的RNA干扰能否有效逆转A2780/DDP细胞对DDP的耐药性。方法:采用实时荧光定量PCR(real-time fluorogenic quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western印迹法检测EZH2 mRNA和蛋白在A2780/DDP及A2780细胞中的表达差异。人工构建4个靶向沉默EZH2基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)质粒表达载体,脂质体法瞬时转染至A2780/DDP细胞,RFQ-PCR检测EZH2基因的沉默水平并挑选沉默效果最佳的质粒载体,G418加压筛选得到转染稳定的细胞株。RFQ-PCR和Western印迹法检测稳定转染后A2780/DDP细胞中EZH2基因的表达,MTT法检测转染细胞对DDP的耐药性。结果:A2780/DDP细胞中EZH2 mRNA和蛋白的表达量分别是A2780细胞表达量的(3.50±1.06)和(2.10±0.29)倍,差异有统计学意义(P<0.01)。稳定转染EZH2 shRNA后的A2780/DDP细胞,EZH2的mRNA及蛋白水平的表达量分别下降(83.66±5.65)%和(77.57±3.90)%(P<0.001),其对DDP的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值下降(61.33±11.40)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:EZH2基因在A2780/DDP细胞中的表达明显升高,沉默EZH2基因能有效逆转A2780/DDP细胞对DDP的耐药性。
- 胡沙王静李智敏郭剑锋于利利杨纯王泽华
- 关键词：EZH2基因人卵巢癌细胞耐药性WESTERN印迹法稳定转染A2780细胞
- 子宫颈癌SiHa细胞中NDRG1基因的表达及其与肿瘤侵袭转移的关系
- 2010年
- 宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤，其发病率及病死率居妇科恶性肿瘤的第2位，仅次于乳腺癌，严重威胁妇女的身体健康。近年来发现，人类N—myc下游调节基因1（NDRG1）与肿瘤侵袭转移密切相关，普遍分布于人体多种组织中，包括生殖、泌尿、消化、免疫系统，具有调节肿瘤细胞生长、分化、应激反应及侵袭转移的作用。NDRG1基因参与多种肿瘤的发生、发展，如乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌、肝癌、胰腺癌、脑肿瘤、黑色素瘤等。本研究使用基因转染技术增加NDRG1基因在宫颈癌细胞中的表达，探讨NDRG1基因对宫颈癌细胞的生长及侵袭转移的影响。
- 王静李智敏胡沙于利利王泽华
- 关键词：宫颈癌SIHA细胞NDRG1基因肿瘤侵袭转移基因转染技术
- 微小RNA-451在乳腺癌细胞中的表达及其与耐药的关系被引量：3
- 2012年
- 目的:研究人类微小RNA-451(Homo sapiens micro RNA-451,hsa-miR-451)在乳腺癌细胞中的表达及其与多柔比星(adriamycin,ADM)耐药的关系。方法:用实时荧光定量PCR一步法检测乳腺癌亲本细胞MCF-7和耐ADM细胞MCF-7/ADM中hsa-miR-451的表达;利用脂质体分别将成熟miR-451的模拟物(mimics)及阴性对照转染MCF-7/ADM细胞,然后采用实时荧光定量PCR法检测细胞中多药耐药基因1(multi-drug resistance gene 1,MDR1)mRNA的表达,蛋白质印迹法检测细胞中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达,MTT法检测不同浓度ADM作用下的细胞增殖情况。结果:miR-451在MCF-7/ADM耐药细胞中低表达,与亲本细胞MCF-7相比明显降低(P<0.05)。MCF-7/ADM细胞转染miR-451mimics后,MDR1 mRNA和P-gp蛋白的相对表达量比阴性对照转染组均明显下降(P<0.05);而miR-451 mimics转染组细胞对ADM的敏感性增加,其半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)值与阴性对照转染组细胞相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM中miR-451异常低表达,可能通过作用于MDR1/P-gp参与乳腺癌细胞耐药的发生和发展。
- 李智敏罗喜平王泽华胡沙殷文静孙小丽
- 关键词：乳腺肿瘤微RNAS多柔比星
- RNA干扰沉默EZH2基因对人卵巢癌细胞增殖迁移的抑制作用被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨RNA干扰沉默EZH2基因对人卵巢癌细胞系A2780增殖和迁移的影响。方法:真核表达载体介导靶向沉默EZH2 shRNA的重组质粒转染A2780细胞,Real-time RT-PCR检测EZH2基因的沉默效果,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Transwell小室检测细胞迁移。结果:EZH2shRNA转染明显下调EZH2的表达(P<0.001)。重组质粒稳定转染至A2780细胞后,细胞增殖速度明显下降(P<0.05),G0/G1期细胞增加(P<0.01),体外迁移能力下降(P<0.01),差异均有统计学意义。结论:EZH2基因沉默能有效抑制卵巢癌细胞的增殖和迁移能力,为卵巢癌的表观遗传学治疗提供新靶点。
- 于利利胡沙王静李智敏韩方黄在菊王泽华
- 关键词：EZH2细胞迁移卵巢癌
- 潜伏活性的人可溶性TNFⅠ型受体融合蛋白真核表达载体的构建及表达
- 2007年
- 目的:采用基因工程技术,将转化生长因子β前体相关蛋白(LAP)通过基质金属蛋白酶(MMP)水解部位与人可溶性TNFⅠ型受体(hsTNFRⅠ)连接,构建pcDNA3.1/LAP-MMP-hsTNFRⅠ融合蛋白真核表达载体,获得LAP-MMP-hsTNFRⅠ融合蛋白。方法:将编码MMP水解部位氨基酸的正反义DNA序列退火形成互补双链后定向克隆插入真核表达载体pcDNA3.1(+),得到pcDNA3.1/MMP重组体;将TGF-β1的LAP段和hsTNFRⅠ与MMP水解部位连接,获得pcDNA3.1/LAP-MMP-hsTNFRⅠ真核表达载体。测序鉴定后,脂质体介导重组质粒转染COS-7细胞,通过RT-PCR检测融合基因的表达。结果:酶切及测序结果证实pcDNA3.1/LAP-MMP-hsTNFRⅠ重组载体构建成功,转染后RT-PCR结果表明重组质粒在COS-7细胞中得到有效表达。结论:成功构建了融合蛋白真核表达载体pcDNA3.1/LAP-MMP-hsTNFRⅠ,并获得融合基因的瞬时表达,为进一步研究融合蛋白在子宫内膜异位症中的靶向治疗奠定了实验基础。
- 胡沙熊宙芳梁铭霖黄勇王泽华
- 关键词：基质金属蛋白酶融合蛋白
- EZH2基因沉默逆转卵巢上皮性癌细胞顺铂耐药性的实验研究被引量：2
- 2010年
- EZH2基因是果蝇zeste基因增强子的人同源物，作为一种转录抑制因子参与基因沉默，在细胞生长调控中发挥着重要作用。研究发现，EZH2基因可以抑制相关癌基因的活性，在前列腺癌、乳腺癌。和胰腺癌等多种恶性肿瘤组织中高表达，促进肿瘤生长、侵袭和转移。然而迄今为止，对EZH2基因参与卵巢上皮性癌（卵巢癌）化疗耐药及其机制的研究鲜见报道。本研究应用真核质粒载体介导的RNA干扰技术抑制EZH2基因的表达，探讨EZH2基因沉默后逆转卵巢癌耐药细胞株A2780／DDP对顺铂耐药的可能作用机制，为EZH2基因在卵巢癌耐药的基因治疗提供实验基础。
- 胡沙李智敏王静唐慧娟于利利王泽华
- 关键词：EZH2基因卵巢上皮性癌顺铂耐药性基因沉默癌细胞逆转卵巢癌耐药
- 潜伏活性的可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅰ靶向治疗子宫内膜异位症的实验研究
- 2010年
- 目的构建LAP—MMP—hsTNFR Ⅰ-pcDNA3．1融合蛋白真核表达载体，检测融合蛋白的潜伏活性。方法将编码MMP分解部位的DNA序列经基因重组定向克隆至真核表达载体pcDNA3．1中，并将TGF—β1的LAP段和人可溶性肿瘤坏死因子受体（hsTNFR）Ⅰ分别与MMP分解部位的N端和C端连接，构建LAP-MMP—hsTNFRⅠ—pcDNA3．1真核表达载体。经测序鉴定后转染COS-7细胞，通过RT—PCR及免疫印迹检测融合蛋白LAP—MMP—hsTNFRⅠ的表达。在融合蛋白被MMP或子宫内膜异位症患者腹腔液孵育的前后，用MTF法检测其对TNF-α细胞毒效应的抑制活性。结果成功构建了LAP—MMP—hsTNFRⅠ—pcDNA3．1重组载体，并在COS-7细胞得到了有效表达。生物学活性检测表明重组质粒LAP—MMP-hsTNFRⅠ转染组与空载体转染组的L929细胞死亡率差异无统计学意义（P〉0．05）。但在800ng／L肿瘤坏死因子（TNF）-α作用下，重组质粒转染上清与MMP和子宫内膜异位症患者的腹腔液孵育后，L929细胞死亡率分别为（44．5±2．4）％和（33．8±1．9）％，显著低于孵育前（58．1±2．4）％，（P〈0．05）。结论LAP—MMP-hsTNFRⅠ重组融合蛋白的生物学活性可被LAP有效潜伏，并可被MMP和子宫内膜异位症患者的腹腔液激活，可应用于子宫内膜异位症的局部靶向治疗。
- 熊宙芳胡沙王泽华
- 关键词：受体肿瘤坏死因子子宫内膜异位症
- 人WWOX基因的克隆及其真核表达载体的构建
- 2010年
- 目的:克隆人WWOX基因并构建其真核表达载体。方法:从人正常卵巢组织中提取总RNA,经逆转录聚合酶链反应扩增人WWOX基因,并构建其真核表达载体,经测序鉴定后转染人卵巢癌细胞系A2780。结果:成功克隆了人WWOX基因,与Genbank提供的序列(NM-016373)对比显示完全一致。真核表达载体pCMV-WWOX转染人卵巢癌细胞系A2780后,癌细胞的WWOXmRNA的表达水平显著增高(P<0.01)。结论:从人正常卵巢组织中成功克隆了人WWOX基因,为进一步研究WWOX在卵巢癌发生和进展中的作用及其靶向基因治疗奠定了实验基础。
- 熊宙芳胡沙王泽华
- 关键词：WWOX基因克隆真核表达载体
- EZH2 shRNA真核表达载体的构建及其在卵巢癌A2780细胞系的稳定表达被引量：1
- 2010年
- 目的采用基因工程技术,构建EZH2 shRNA的真核表达载体,获得稳定表达干扰质粒的卵巢癌A2780细胞系。方法合成特异性干扰EZH2的shRNA片段并定向克隆插入Supersilencing shRNA质粒表达载体pGPU6/GFP/Neo,获得表达载体pGPU6/GFP/Neo-shEZH2。脂质体介导重组质粒转染A2780细胞,经G418加压筛选获得稳定转染细胞株,Real time RT-PCR和Western blot检测转染后细胞系EZH2的表达。结果测序结果证实重组载体构建成功,稳定转染shEZH2的A2780细胞EZH2的mRNA和蛋白水平下降(90.20±1.66)%和(73.80±5.49)%,P<0.01,差异有统计学意义。结论成功构建EZH2 shRNA表达载体,获得EZH2基因稳定沉默的A2780细胞系,为进一步研究以EZH2为靶点的卵巢癌治疗奠定实验基础。
- 胡沙于利利李智敏韩方吴莉英黄在菊王泽华
- 关键词：EZH2卵巢癌RNA干扰
- Pgenesil-1质粒载体介导的表达ERCC1shRNA的质粒构建和鉴定
- 2008年
- 目的:设计构建Pgenesil-1质粒载体介导的表达ERCC1shRNA的重组体质粒。方法:以ERCC1为靶基因,以Pgenesil-1质粒为载体,设计构建重组体,根据ERCC1基因cDNA序列,设计有小发卡结构的2条寡核苷酸序列,克隆到空载体Pgenesil-1中,转化DH5а菌株,提取质粒,进行酶切鉴定和测序分析。结果:经酶切鉴定筛出的重组体测序结果和目的序列相同,重组体载体构建成功。结论:成功构建了能表达ERCC1shRNA的质粒载体Pgenesil-1/ERCC11和Pgenesil-1/ERCC12,为下一步研究ERCC1基因在卵巢癌细胞株顺铂耐药中的作用奠定了实验基础。
- 黄勇王绍海胡沙王泽华
